siRNA及其在治疗和/或预防眼病的方法和组合物中的用途技术

本发明专利技术涉及用于治疗/和或预防与香草素-1受体(TRPV)的高的表达水平和/或活性相关的眼病的方法和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及提供siRNA产品及其在利用RNA干扰用于治疗和/或预防与瞬时受体电位香草素(TRPVl)的高的表达水平和或活性相关的眼病的方法和组合物中的用途。其中，与眼痛关联的眼病如屈光手术后角膜的不适和改变的敏感性，接触镜片的使用，干眼综合征和舍格伦综合征(Sjogren' s syndrome)将得到减轻。
技术介绍
RNA干扰(RNAi)是天然存在的大多数真核细胞的调控机制，其使用小双链RNA(dsRNA)分子以指引依赖于同源性的基因沉默。Fire和Mello在蠕虫线虫(C. elegans)中的该发现{Fire，1998}获得了 2006年的诺贝尔奖。在对其首次描述后不久，RNAi也·显示发生在哺乳动物细胞中，不是通过长的dsRNA而是通过21个核苷酸长的双链小干扰RNA(siRNA){Elbashir,2001}。据信RNA干扰的过程是在进化上保守的细胞防御机制，用于防止外源基因的表达，并且为不同门(phyla)和区系(flora)所共享，其中它被称为转录后基因沉默。自从发现RNAi机制，已经进行了大量研究，用于发现能够选择性地改变基因表达的新的化合物，其通过处理属于利用涉及小分子或蛋白质的常规药物方法“不能用药”的靶标而作为治疗人类疾病的新途径。根据现有知识，RNAi的机制始于被称为切酶(Dicer)的RNA酶III样蛋白质处理长的双链RNA之时。蛋白质切酶通常包含N端RNA解旋酶结构域，RNA结合所谓Piwi/Argonaute/Zwille (PAZ)结构域，两个RNA酶III结构域和双链RNA结合结构域(dsRBD){Collins, 2005}，并且它的活性导致长的双链RNA被处理为21-24个核苷酸的双链siRNA，该双链siRNA具有2个碱基的3'突出端和5'磷酸和3'羟基。所得的siRNA双链体然后结合到被称为RNA诱导的沉默复合物(RISC)的效应物复合物中，其中在双链siRNA分子通过RNA解旋酶活性的依赖三磷酸腺苷(ATP)的解旋{Nykanen，2001}之后，siRNA的反义或指导链指导RISC识别并切割目标mRNA序列{Elbashir，2001}。导致mRNA降解的RISC的催化活性由核酸内切酶Argonaute 2 (AG02)介导{Liu，2004 ；Song,2004} <^602属于高度保守的Argonaute蛋白质家族。Argonaute蛋白质是 IOOKDa的高度碱性的蛋白质,其包含两个共同的结构域，即PIWI和PAZ结构域{Cerutti，2000}。PIWI结构域对于与切酶的相互作用是关键的并且包含负责切割mRNA的核酸酶活性{Song，2004}。AG02使用siRNA双链体中的一条链作为指导去找到含互补序列的信使RNA并在相对于指导链的5'端的第10和第11个碱基之间切割磷酸二酯骨架{Elbashir，2001}。RISC活化期间的重要步骤是由AG02切割正义或信使链，将此链从复合物中去除{Rand，2005}。分析siRNA指导链和PIWI结构域之间相互作用的晶体学研究表明仅第2至第8个核苷酸构成指导RISC识别目标mRNA的“种子序列(seed sequence)”，并且此序列中单个核苷酸的错匹配可以显著影响所述分子的沉默能力{Ma,2005 ；Doench 2004 ;Lewis，2003}。一旦mRNA已经被切割，并且由于片段中不受保护的RNA端的出现，mRNA被细胞内的核酸酶进一步切割和降解并且将不会被翻译为蛋白质IOrban，2005}，同时RISC将进行随后若干轮的再循环{Hutvagner，2002}。这构成了导致特定mRNA分子及相应的蛋白质的选择性减少的催化过程。可能利用基因沉默的这种天然机制从而通过直接将siRNA效应物递送到细胞或组织中来调控任何所选基因，在所述细胞或组织中siRNA效应物将活化RISC并且产生目标mRNA的有效和特异的沉默。已经发表了许多研究，其描述了为获得最大有效性siRNA应当具有的理想特征，有关长度、结构、化学组成和序列。siRNA设计的初始参数由Tuschl及同事在W002/44321中阐述，虽然从 此之后已经发表了许多后续研究、算法和/或改进。同样，已经进行了很多努力以加强siRNA稳定性，考虑到RNA酶在生物流体中的普遍性质，这被认为是基于siRNA的治疗的主要障碍之一。用于增强稳定性的后继的主要策略之一是使用修饰的核苷酸如2' -O-甲基核苷酸,2'-氨基核苷酸,含2' -O或4' -C亚甲基桥的核苷酸。同样，已经描述了修饰连接邻近的核苷酸的核糖核苷酸骨架，主要通过引入硫代磷酸盐修饰的核苷酸。似乎增强的稳定性通常与效力成反比(Parish，2000)，并且仅一定数目、位置和/或组合的经修饰的核苷酸可以产生稳定的沉默化合物。因为这是基于siRNA的治疗中重要的障碍，所以已经发表了不同研究，所述研究描述了特定修饰模式显示良好的结果，其实例包括 EP1527176，W02008/050329，W02008/104978 或 W02009/044392，虽然文献中可以找到更多的多。瞬时受体电位香草素-I (TRPVl)，也被称为香草素受体I (VR-I)，是辣椒素响应性配体门控的阳离子通道，其首先发现于1997年(Caterina，1997)。TRPVl主要被表达在感觉神经元上并且充当热、辣椒素、质子和内香草素的分子检测器(Caterina，2001 ；Montell, 2002 ；Baumann, 2000)。虽然本申请的专利技术人也已发现在来自泪腺和睫状体的组织中的TRPVl表达。当TRPVl由激动剂如辣椒素和其他因子如热、酸中毒、脂加氧酶产物或花生四烯酸乙醇酰胺活化时，钙进入细胞并且启动疼痛信号。通道的活化诱使神经肽从中枢和外周感觉神经末端释放，导致痛觉，神经性炎症，并且有时，导致平滑肌收缩和咳嗽。实际上，目前的证据暗示了 TRPVl在疼痛、咳嗽、哮喘和尿失禁中的作用(Jia，2005)。实际上，TRPVl是在对痛刺激的反应中通过镇痛进行治疗的已知靶标。此外，使用不同技术来降低TRPVl表达水平的治疗已经描述于聚焦于疼痛治疗的W02004/042046或(Schubert，2005)中。多觉伤害性感受器(polymodal nociceptors)是在角膜中发现的最大量的伤害性感受器类型。存在药理学证据表明这些受体纤维由于它们响应辣椒素、热和酸而表达TRPVl受体。此外，高剂量的辣椒素使角膜多觉伤害性感受器对热和酸的响应失活而机械响应性不受影响。这暗示存在于角膜多觉神经末梢中的TRPVl受体被选择性失活。因此，可能的是，响应于角膜损伤和伴随炎症的持续痛觉以及该组织中的刺激性过程的急性伤害性感受器的重要部分由TRPVl活化介导。此外，W02007/045930描述了使用TRPVl特异性siRNA用于治疗与眼痛(ocularpain)和干眼综合征(dry eye syndrome)相关的眼病。然而，本专利技术提供改进的产品用于降低TRPVl表达及随之发生的眼睛不适。与常规化学抑制剂相比，使用siRNA产品治疗这些病症的优势在于基于siRNA的治疗将具有更长的持续效果。该结果是由本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：玛尔塔·洛佩斯弗拉加，安娜·伊莎贝尔·希门尼斯，塔玛拉·马丁内斯·巴尔卡雷尔，
申请(专利权)人：西伦蒂斯私人股份公司，
类型：
国别省市：