用于控制蜂中的瓦螨的组合物制造技术

本文公开了一种分离的核酸剂，所述核酸剂包含减量调节狄斯瓦螨基因产物的表达的核酸序列。本文亦公开了包含所述核酸剂的组合物及其用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于控制蜂中的瓦螨的组合物专利
和背景本专利技术涉及用于控制蜂中的瓦螨(Varroamite)侵染的组合物。蜜蜂，即意大利蜜蜂(Apismellifera)为农作物的有效授粉所必需，因此对世界农业而言为关键性的。蜜蜂亦产生经济上重要的产物，包括蜂蜜和蜂蜡。蜜蜂易感染许多寄生虫和病原体，包括外寄生螨、狄斯瓦螨(Varroadestructor)。蜜蜂的蜂群崩溃失调病(ColonyCollapseDisorder，CCD)对摧毁美国和世界农业造成威胁。实际上，2006-2007年冬天在美国最近爆发的CCD中，估计240万蜜蜂蜂巢的25%或更多因为CCD而消失。估计23%的美国养蜂运作在2006-2007年冬天受CCD所累，影响了平均45%的养蜂人运作。在2007-2008年冬天，USDA-ARS的CCD行动小组估计，总计来自商业运作的全部蜂巢的36%被CCD破坏。CCD通过自一群其成年蜂群体的迅速消失来表征，通常在距蜂群一定距离处发现死亡的成年蜂。在崩溃末期，蜂王仅由少量新形成的成年蜂照料。崩溃的蜂群常常具有大量封盖的幼蜂和食物储备。CCD现象首先在2006年报道；然而，养蜂人早在2004年就注意到与CCD一致的独特的蜂群衰退。已假定多种因素作为原因，所述因素为例如螨和传染剂、天气模式、电磁(蜂窝天线)辐射、杀虫剂、营养不良和应激。迄今为止，CCD的控制已集中在瓦螨控制、环境卫生和移除受影响的蜂巢，针对机会性感染(例如小孢子虫(Nosema))进行处理和改善营养。至今仍未开发有效的预防措施。瓦螨寄生于蛹和成年蜂中并且在蛹的抚幼室中繁殖。螨使用它们的嘴刺穿外骨骼并且以蜂的血淋巴为食。这些外骨骼中的伤口部位隐匿细菌感染，例如蜂房球菌(Melissococcuspluton)，其导致欧洲幼虫腐臭病(Europeanfoulbrood)。此外，因为它们的寄生作用，怀疑瓦螨充当许多蜜蜂病原体的载体，所述病原体包括羽翼畸形病毒(DWV)、克什米尔蜜蜂病毒(KBV)、蜜蜂急性麻痹病毒(ABPV)和黑蜂王台病毒(BQCV)，并且瓦螨可减弱其宿主的免疫系统，使得它们易受感染的攻击。如果不加以治疗，瓦螨侵染典型地导致群体水平的死亡率。治疗瓦螨侵染的现行方法被证明无效，因为螨形成对现有杀螨剂的抗性。此外，使用这类杀螨剂可能将有害的化学品引入旨在用于人消费的蜂蜜中。美国专利申请20090118214教导了dsRNA用于预防和治疗蜜蜂中的病毒感染中的用途。专利技术概述本专利技术某些实施方案的一个方面提供了一种分离的核酸剂，所述核酸剂包含减量调节狄斯瓦螨基因产物的表达的核酸序列。本专利技术某些实施方案的一个方面提供了一种核酸构建体，所述核酸构建体包含编码本专利技术的分离的核酸剂的核酸序列。本专利技术某些实施方案的一个方面提供了一种蜂可摄取的组合物，所述组合物包含至少一种核酸剂，所述核酸剂包含减量调节狄斯瓦螨基因产物的表达的核酸序列。本专利技术某些实施方案的一个方面提供了预防或治疗蜂巢的狄斯瓦螨侵染的方法，所述方法包括给蜂施用有效量的至少一种包含减量调节狄斯瓦螨基因产物的表达的核酸序列的核酸剂，从而预防或治疗蜂巢的狄斯瓦螨侵染。本专利技术某些实施方案的一个方面提供了预防或治疗蜂巢的狄斯瓦螨侵染的方法，所述方法包括给蜂施用有效量的本专利技术的核酸构建体，从而预防或治疗蜂巢的狄斯瓦螨侵染。本专利技术某些实施方案的一个方面提供了降低蜜蜂对蜂群崩溃失调病(CCD)的易感性的方法，所述方法包括给蜜蜂施用有效量的至少一种双链核糖核酸(dsRNA)，所述至少一种dsRNA包含与狄斯瓦螨mRNA的至少21个核苷酸互补且能够诱导狄斯瓦螨特异性mRNA降解的序列。根据本专利技术的某些实施方案，所述核酸序列与狄斯瓦螨特异性RNA的至少21个核苷酸互补且能够诱导狄斯瓦螨RNA降解。根据本专利技术的某些实施方案，所述核酸剂选自dsRNA、反义RNA和核酶。根据本专利技术的某些实施方案，dsRNA选自siRNA、shRNA和miRNA。根据本专利技术的某些实施方案，所述基因产物为编码选自以下的多肽的mRNA：ATP酶亚基A、RNA聚合酶I、RNA聚合酶III、凋亡抑制剂(IAP)、FAS凋亡抑制剂和α-微管蛋白。根据本专利技术的某些实施方案，所述至少一种核酸剂包含至少五种核酸剂，用于减量调节ATP酶亚基A、RNA聚合酶III、凋亡抑制剂(IAP)、FAS凋亡抑制剂和α-微管蛋白，所述至少五种核酸剂的每一种都靶定不同的基因。根据本专利技术的某些实施方案，所述至少一种核酸剂包含至少六种核酸剂，用于减量调节ATP酶亚基A、RNA聚合酶I、RNA聚合酶III、凋亡抑制剂(IAP)、FAS凋亡抑制剂和α-微管蛋白，所述至少六种核酸剂的每一种都用于靶定不同的基因。根据本专利技术的某些实施方案，所述核酸剂如SEQIDNo:1、13、27、30和39所述。根据本专利技术的某些实施方案，所述核酸剂如SEQIDNo:1、4、7、10、13、16、19、22、25、27、30、33、36和39所述。根据本专利技术的某些实施方案，所述核酸序列长度大于15个碱基对。根据本专利技术的某些实施方案，所述核酸序列长度为19-25个碱基对。根据本专利技术的某些实施方案，所述核酸序列长度大于30个碱基对。根据本专利技术的某些实施方案，所述组合物呈固体形式。根据本专利技术的某些实施方案，所述组合物呈液体形式。根据本专利技术的某些实施方案，所述组合物包含蛋白质。根据本专利技术的某些实施方案，所述蛋白质呈花粉和/或大豆饼的形式。根据本专利技术的某些实施方案，所述液体为蔗糖溶液。根据本专利技术的某些实施方案，所述液体为玉米糖浆溶液。根据本专利技术的某些实施方案，所述液体进一步包含碳水化合物或糖补充剂。根据本专利技术的某些实施方案，所述蜂为蜜蜂。根据本专利技术的某些实施方案，所述蜜蜂为采集蜂。根据本专利技术的某些实施方案，所述蜜蜂为蜂巢蜂(hivebee)。根据本专利技术的某些实施方案，所述蜜蜂为蜂群的蜂，且其中所述施用降低蜂群体对蜂群崩溃失调病的易感性。根据本专利技术的某些实施方案，所述施用通过饲喂来实现。根据本专利技术的某些实施方案，所述饲喂包括提供液体的蜂可摄取的组合物。根据本专利技术的某些实施方案，所述饲喂包括提供固体的蜂可摄取的组合物。根据本专利技术的某些实施方案，狄斯瓦螨mRNA编码选自以下的多肽：NADH脱氢酶亚基2、ATP合成酶亚基8、ATP合成酶亚基6、钠通道和细胞色素氧化酶亚基I。除非另有定义，否则本文所用的所有技术和/或科学术语都具有与本专利技术所属领域的普通技术人员通常理解的相同的意义。虽然与本文所述方法和材料类似或等同的方法和材料可用于实践或测试本专利技术的实施方案，但示例性的方法和/或材料描述于下文。在冲突的情况下，以本专利说明书(包括定义)为准。此外，所述材料、方法和实施例仅为说明性的而不意图其为必要限制。附图简述仅作为实例参考附图在此描述本专利技术的某些实施方案。现在详细地具体参考附图，强调的是，所示细节是作为实例并且以阐述性地讨论本专利技术的实施方案为目的。在这点上，带有附图的描述使得本专利技术的实施方案可如何实施对本领域技术人员显而易见。在附图中：图1为用于dsRNA转入瓦螨的各种实验的时程的示意图。图2A-E为狭线印迹分析(Slotblotanalysis)已摄取的蜂(图2A)、通过成年蜂喂养的幼虫(图2B)、蛹本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.10.14 US 61/2513391.一种核酸构建体，所述核酸构建体包含编码分离的核酸剂的核酸序列，所述核酸剂包含由配对链组成的瓦螨特异性双链RNA双链体，所述配对链由SEQIDNo:27和其反义核酸序列组成，其中所述双链RNA不包含与任何蜂基因组序列或人基因组RNA序列完全同源的长于19个碱基的任何序列，并且其中所述dsRNA减量调节瓦螨中SEQIDNo:27的表达。2.一种蜂可摄取的组合物，所述组合物包含分离的核酸剂，所述核酸剂包含由配对链组成的瓦螨特异性双链RNA双链体，所述配对链由SEQIDNo:27和其反义序列组成，其中所述双链RNA不包含与任何蜂基因组序列或人基因组RNA序列完全同源的长于19个碱基的任何序列，并且其中所述dsRNA减量调节瓦螨中SEQIDNo:27的表达。3.权利要求2的蜂可摄取的组合物，其中所述至少一种核酸剂还包含至少一种额外的dsRNA双链体，其由配对链组成，所述配对链由选自以下的核酸序列和其反义序列组成：SEQIDNo:1、4、6、7、10、13、16、18、19、22、23、25、30、31、33、38...

【专利技术属性】
技术研发人员：I塞拉，S沙弗，E毛里，Y加比安，E本查诺奇，G亚登，
申请(专利权)人：耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展公司，比奥罗吉克斯公司，
类型：
国别省市：