用于控制蜂中的瓦螨的组合物制造技术

本文公开了一种分离的核酸剂，所述核酸剂包含减量调节狄斯瓦螨基因产物的表达的核酸序列。所述核酸剂可具有如在SEQ ID NO. 93-106中所述的序列。亦公开了包含所述核酸剂的组合物及其用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】用于控制蜂中的瓦螨的组合物 专利
和背景 本专利技术在其一些实施方案中涉及用于控制蜂中的瓦螨（Karroa mite)侵染的组合物。 蜜蜂，即意大利蜜蜂（Apis mellifera)为农作物的有效授粉所必需，因此对世界 农业而言为关键性的。蜜蜂亦产生经济上重要的产物，包括蜂蜜和蜂蜡。蜜蜂易感染许多 寄生虫和病原体，包括外寄生螨、狄斯瓦螨（Varroa destructor)。 蜜蜂的蜂群崩溃失调病（Colony Collapse Disorder，CO))对摧毁美国和世界农 业造成威胁。实际上，2006-2007年冬天在美国最近爆发的C⑶中，估计240万蜜蜂蜂巢的 25%或更多因为CXD而消失。估计23%的美国养蜂运作在2006-2007年冬天受C⑶所累，影 响了平均45%的养蜂人运作。在2007-2008年冬天，USDA-ARS的CXD行动小组估计，总计 来自商业运作的全部蜂巢的36%被CCD破坏。 C⑶通过自一群其成年蜂群体的迅速消失来表征，通常在距蜂群一定距离处发现 死亡的成年蜂。在崩溃末期，蜂王仅由少量新形成的成年蜂照料。崩溃的蜂群常常具有大 量封盖的幼蜂和食物储备。CCD现象首先在2006年报道；然而，养蜂人早在2004年就注意 到与CCD -致的独特的蜂群衰退。已假定多种因素作为原因，所述因素为例如螨和传染剂、 天气模式、电磁（蜂窝天线）辐射、杀虫剂、营养不良和应激。迄今为止，CCD的控制已集中 在瓦螨控制、环境卫生和移除受影响的蜂巢，针对机会性感染（例如小孢子虫属 进行处理和改善营养。至今仍未开发有效的预防措施。 瓦螨寄生于蛹和成年蜂中并且在蛹的抚幼室中繁殖。螨使用它们的嘴刺穿外 骨骼并且以蜂的血淋巴为食。这些外骨骼中的伤口部位隐匿细菌感染，例如蜂房球菌 (Melissococcus pluton)，其导致欧洲幼虫腐臭病（European foulbrood)。此外，因为它们 的寄生作用，怀疑瓦螨充当许多蜜蜂病原体的载体，所述病原体包括羽翼畸形病毒（DWV)、 克什米尔蜜蜂病毒（KBV)、蜜蜂急性麻痹病毒（ABPV)和黑蜂王台病毒（BQCV)，并且瓦螨可 减弱其宿主的免疫系统，使得它们易受感染的攻击。如果不加以治疗，瓦螨侵染典型地导致 群体水平的死亡率。 治疗瓦螨侵染的现行方法被证明无效，因为螨形成对现有杀螨剂的抗性。此外，使 用这类杀螨剂可能将有害的化学品引入旨在用于人消费的蜂蜜中。 美国专利申请20090118214教导了 dsRNA用于预防和治疗蜜蜂中的病毒感染中的 用途。 专利技术概沐 根据本专利技术一些实施方案的一个方面，提供了一种分离的核酸剂，所述核酸剂包含选 自SEQ ID NO. 93-105和106的核酸序列。 根据本专利技术的一些实施方案的一个方面，提供了一种核酸构建体，所述核酸构建 体包含编码本文所公开的分离的核酸剂的核酸序列。 根据本专利技术的一些实施方案的一个方面，提供了一种蜂可摄取的组合物，所述组 合物包含本文所公开的至少一种核酸剂。 根据本专利技术的一些实施方案的一个方面，提供了预防或治疗蜂巢的狄斯瓦螨侵染 的方法，所述方法包括向蜂巢的蜂给予有效量的至少一种核酸剂，所述核酸剂具有选自SEQ ID NO. 93-105和106的序列；从而预防或治疗蜂巢的狄斯瓦螨侵染。 根据本专利技术的一些实施方案的一个方面，提供了降低蜜蜂对蜂群崩溃失调病 (CCD)的易感性的方法，所述方法包括向蜜蜂给予有效量的至少一种核酸剂，所述核酸剂 选自如在SEQ ID No: 93-95和106中所述的核酸序列；从而降低蜜蜂对蜂群崩溃失调病 (CCD)的易感性。 根据本专利技术的一些实施方案，所述蜂可摄取的组合物包含至少五种核酸剂，所述 核酸剂各自具有选自SEQ ID No: 93-105和106的不同的核酸序列。 根据本专利技术的一些实施方案，所述蜂可摄取的组合物包含至少一种具有如在SEQ ID No: 93、96、100、104和106中所述的核酸序列的核酸剂。 根据本专利技术的一些实施方案，所述蜂可摄取的组合物包含具有如在SEQ ID No: 93、96、100、104和106中所述的核酸序列的核酸剂的每一种。 根据本专利技术的一些实施方案，所述蜂可摄取的组合物的形式选自固体形式和液体 形式。 根据本专利技术的一些实施方案，所述蜂可摄取的组合物进一步包含蛋白质。 根据本专利技术的一些实施方案，所述蛋白质呈花粉和/或大豆饼的形式。 根据本专利技术的一些实施方案，所述液体形式选自蔗糖溶液和玉米糖浆溶液。 根据本专利技术的一些实施方案，所述蜜蜂为蜂群的蜂，且其中所述给予降低蜂群体 对蜂群崩溃失调病的易感性。 根据本专利技术的一些实施方案，所述给予通过饲喂来实现。 根据本专利技术的一些实施方案，所述核酸剂以蜂可摄取的组合物提供，所述蜂可摄 取的组合物选自液体的蜂可摄取的组合物和固体的蜂可摄取的组合物。 根据本专利技术的一些实施方案，所述蜂可摄取的组合物包含至少一种具有在SEQ ID No: 93、96、100、104和106中所述的核酸序列的核酸剂。 根据本专利技术的一些实施方案，所述蜂可摄取的组合物包含至少五种核酸剂，每一 种核酸剂具有选自SEQ ID No: 93-106的不同的核酸序列。 根据本专利技术的一些实施方案，所述核酸剂作为核酸构建体给予。 根据本专利技术的一些实施方案，所述核酸剂如在SEQ ID No: 93、96、100、104和106 中所述。 除非另有定义，否则本文所用的所有技术和/或科学术语都具有与本专利技术所属领 域的普通技术人员通常理解的相同的意义。虽然与本文所述方法和材料类似或等同的方法 和材料可用于实践或测试本专利技术的实施方案，但方法和/或材料的实例描述于下文。如有 冲突，以本专利说明书（包括定义）为准。此外，所述材料、方法和实施例仅为说明性的而 不意图其为必要限制。 附图简沐 仅作为实例参考附图在此描述本专利技术的一些实施方案。现在详细地具体参考附图，强 调的是，所示细节是作为实例并且以说明性地论述本专利技术的实施方案为目的。在这点上，带 有附图的描述使得本专利技术的实施方案可如何实施对本领域技术人员显而易见。 在附图中： 图1为用于dsRNA转移给瓦螨的各种实验的时程的示意图。 图2A-E为狭线印迹分析（Slot blot analysis)已摄取的蜂（图2A)、通过成年蜂 喂养的幼虫（图2B)、蛹（图2C)和新形成蜂（图2D)中dsRNA-GFP存在情况的结果的照 片。dsRNA-GFP和来源于其的siRNA的存在情况通过RNA印迹来分析（图2E)。D=向蜂巢 给予dsRNA-GFP之后的天数。 图3为阐述在顶行所示的天数（时间如图1所示）从瓦螨提取的RNA的RT-PCR 分析结果的照片。绿色数字（顶行）表示已将其放置在已摄取dsRNA-GFP的蜂上的瓦螨个 体，而黑色数字表示来自放置在对照蜂上的瓦螨的RNA。+ =阳性对照（携带GFP的质粒）。 图4为阐述使用针对凋亡抑制剂蛋白（IAP ;序列27)的引物的瓦螨RNA的RT-PCR 的照片。M :大小标志物。泳道1-3 :来自用序列27的dsRNA处理的蜂巢的瓦螨的模板RNA。 泳道4 :来自对照蜂巢的瓦螨的模板RNA。泳道5 :阳性对照（携带IAP的质粒）。泳道6 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的核酸剂，所述核酸剂包含选自SEQ ID NO. 93‑105和106的核酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：E本查诺奇，Y加比安，H卡莱，E毛里，I塞拉，S沙菲尔，G亚登，
申请(专利权)人：耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展公司，比奥罗吉克斯公司，
类型：发明
国别省市：以色列;IL