本发明专利技术涉及降低眼睛的IOP的方法、组合物和剂量，其包括19个核苷酸的双链RNA分子。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】s i RNA及其在用于治疗和/或预防眼部病症的方法和组合 物中的应用 专利技术背景 青光眼（Glaucoma)定义为由眼内压（IOP)高于其正常生理界限的持续升高引起 的眼组织破坏的过程、在开角型青光眼（open angle glaucoma，OAG)中，由于视网膜神经 节细胞的损失，升高的I0P引起进行性视神经病变（progressive optic neuropathy)，其 最终导致失明2。在闭角型青光眼（angle-closure glaucoma)中，IOP的突发性高度升高 使得眼睛失明。青光眼是世界上失明的第二大主要原因3,并且在世界范围内流行性日益增 加4。青光眼失明是由视网膜和视神经的变性过程引起的，但是功能上与房水（AH)分泌和 流出之间的平衡的损害有关。AH由睫状体（CB)细胞分泌，并且流出可以通过下述两个通路 中的一种发生：小梁网通路和葡萄膜巩膜通路 5。 当前关于青光眼的治疗不能恢复由青光眼引起的视力丧失，而是集中在降低I0P 上6。已经表明控制I0P保护免于青光眼中对视神经的损害 5'7。目前有五类药物用于实现 降低IOP:a-肾上腺素能激动剂，0-肾上腺素能拮抗剂，胆碱能激动剂，前列腺素类和碳 酸酐酶抑制剂。如果使用这些药物中的任一种没能实现降低I0P的功效，可以向小梁网施 加激光治疗以增加AH流出。最后的治疗资源是手术方法，用于产生新的AH流出通路 8。 目前用于与青光眼有关的I0P升高的治疗具有相对少的眼科副作用，但是，如果 化合物到达血流中可能具有系统性副作用9a°' n。系统更好耐受的治疗，如前列腺素类，具 有许多局部耐受问题12。这一事实连同为保持适当的I0P水平而需要的滴注频率使得治疗 依从性成为患者的挑战 13。不能遵守治疗不仅能够允许疾病进展，而且还可能具有引起I0P 突然升高的重新启动作用，这可能对视神经非常有伤害性。 前列腺素类和e -阻断剂是优选的降低I0P的药剂12'14。前列腺素类非常好地降 低I0P，并且是系统性安全的，但是具有一些相关的眼部副作用15,即，使虹膜颜色变深，目艮 睫毛生长（lash growth)，眼周色素沉着和充血。该类药物的较不常见的眼部副作用是眼内 炎症，囊样黄斑水肿（cystoid macular edema)，和眼角膜疱瘆病毒感染的再激活16。由于 潜在的早产的风险，前列腺素类似物在妊娠过程中是禁忌的。 e阻断剂的典型应用通过减少AH产生并且不通过增加其流出而降低I0P。典型施 用的0阻断剂经由结膜上皮、泪通道、鼻黏膜和胃肠道吸收到系统循环中，诱发系统性的 不利作用 17_19。在眼中，肾上腺素能受体位于流经睫状体和小梁网的血管，在此处其主要作 用是血管收缩，尽管还描述了它们参与房水分泌。之前在兔眼中的研宄表明在结膜、角膜和 睫状突上皮中的高密度的肾上腺素能受体。在角膜内皮、晶状体上皮、脉络膜和眼外肌 中也存在0 _肾上腺素能受体。在眼中检测到的大部分0 _肾上腺素能受体属于0 2-型 20-23 〇 RNA干扰（RNAi)是基于这样的原理的技术：小的特别设计的化学合成的双链RNA 片段可以调控细胞质中特异性信使RNA(mRNA)的降解，由此选择性地抑制特定蛋白的合 成。这一技术已经成为开发旨在阻断和/或减少限定蛋白的异常活性的新化合物的非常有 力的工具24'25。可以合理地设计基于RNA干扰的化合物来阻断任意靶基因的表达，包括不能 发现针对其的传统小分子抑制剂的基因26。RNAi成功应用于治疗的实例包括抑制人细胞中 的HIV-1复制27和敲低阿尔茨海默病动物模型中的tau和载脂蛋白前体蛋白28。尽管RNAi 只是在十几年前发现的，但是，一些化合物已经进入了临床试验的晚期，即，用于治疗老年 性黄斑退化症（age-related macular degeneration)的RTP801 (Quark Pharmaceuticals， Fremont，PA，II 期）和用于治疗呼吸道合胞病毒的ALN-RSV01 (Alnylam Pharmaceuticals， Cambridge，MA，II期）29' 3°。由于停止治疗时，必须重新合成被沉默的蛋白，从而恢复其生物 活性，因此，对于慢性病症，RNA干扰是一种非常吸引人的方法。由此，基于RNA干扰的化合 物作用通常要比常规治疗的作用更持久 24'31。 眼睛是相对独立的组织区室；这为基于siRNA的疗法的应用特别提供了一些优 点。向眼部局部递送化合物限制系统性暴露并且减少所需要的化合物的量。这允许局部沉 默某种基因并且降低眼外广泛沉默的可能性。另外，免疫系统通向眼部的通路是有限的；由 此较不可能发生针对所述化合物的免疫应答 32。 继续W02006/021817中所描述的工作，我们已经开发了一种siRNA :SYL040012,显 示为SEQ ID NO :2,其是一种化学合成的、未修饰的、19bp双链寡核苷酸，在脱氧胸苷的3' 具有二核苷酸的突出端，其能够选择性地抑制0 2-肾上腺素能受体的合成，显示其用于治 疗患有高眼压、开角型青光眼和其他相关疾病的患者中的升高的I0P。 所述化合物具有已证明的抑制其靶标在细胞培养物中的表达和降低血压正常的 兔和升高的I0P的兔模型中的I0P的功效。 附图简述 图1 :SYL040012在人细胞中的体外功效。（A)人细胞中ADRB2的时间过程抑制： BxPC3和MDA-MB-231细胞转染100nM SYL040012或100nM混杂序列siRNA，在转染后的不同 时间点提取RNA并且分析ADRB2的表达。（B)在BxPC3细胞中，响应SYL040012的ADRB2剂 量依赖性抑制：BxPC3细胞转染增加剂量的SYL040012,并且在转染后48小时分析ADRB2表 达。（C)肾上腺素能家族受体响应SYL040012的表达。在用100nM SYL040012、混杂序列或 赋形剂（vehicle)处理的细胞中的BxPC3和MDA-MB-231。*表示相对于时间点0，p < 0. 5 的统计学显著性水平。 图2 :SYL040012在生物学流体中的稳定性。在兔房水和兔血清中，通过在时间0 时用在PBS中的20 yM SYL040012溶液掺加两种生物学流体的新鲜获得的样品，经由在不 同时间点的天然-HPLC来评估SYL040012的稳定性。结果表示为初始量的百分数。数据表 示2次独立的分析的平均值土S. D.。 图3:在用eGFP-siRNA处理后，睫状体中的eGFP水平减少。eGFP转基因小鼠用三 个160 y g/天的剂量进行处理。最后一次给药后48小时，将动物处死，摘出眼睛并进行处 理，以用于荧光显微镜检查。左图显示PBS处理的动物（A)和eGFP-siRNA处理的动物（B) 的睫状体的Nomarski显微照片。中间图显示PBS处理的动物（C)和eGFP-siRNA处理的动 物（D)的荧光纤维照片。右图显示Nomarski与荧光纤维照片的合并图。NPE :非色素上皮； PE :色素上皮。 图4 :SYL040012在兔中的体内功效。（A)SYL040012的降低I0P作用：两组NZW兔在 连续4天的时间期本文档来自技高网...
【技术保护点】
治疗以升高的眼内压(IOP)为特征的眼部病症的方法，所述方法包括向有此需要的患者的眼睛角膜表面局部施用剂量为约0.3mg‑约0.9mg的短干扰核酸分子(siNA)，所述短干扰核酸分子包含SEQ ID NO：3的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
【专利技术属性】
技术研发人员：安娜·伊萨贝尔·希门尼斯安东，维多利亚·冈萨雷斯法哈多，韦罗妮卡·鲁斯帕洛马尔，
申请(专利权)人：西伦蒂斯私人股份公司，
类型：发明
国别省市：西班牙;ES
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