本发明专利技术涉及一种能高效地抑制双调蛋白的表达且能有效地用于预防或治疗呼吸道疾病的双调蛋白特异性-双链寡siRNA。此外，本发明专利技术还涉及一种双调蛋白特异性-双链寡siRNA结构和由所述寡siRNA结构组成的纳米颗粒，其中双调蛋白特异性-双链寡siRNA结构包含了通过一个简单的共价键或一个由连接物-介导的共价键结合在双调蛋白特异性-双链寡siRNA上的亲水性和疏水性化合物，以便增加双链寡siRNA的体内稳定性和细胞内的传送效能。本发明专利技术的双调蛋白特异性-双链寡siRNA结构能够增加双调蛋白特异性-双链寡siRNA的稳定性，不削弱双调蛋白特异性-双链寡siRNA的功能，同时能有效地增加双链寡siRNA的细胞膜渗透性。因此，当利用双调蛋白特异性-双链寡siRNA结构时，即使是在相对低的浓度下被服用的，双调蛋白特异性-双链寡siRNA仍可被有效地传送到细胞内，从而能有效地用于呼吸道疾病的预防或治疗。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种与呼吸道疾病相关的基因特异性-双链寡核糖核苷酸和一种包含所述双链寡核糖核苷酸的高效双链寡核糖核苷酸结构，在本专利技术中，该双链寡核糖核苷酸结构包含一亲水性化合物和疏水性化合物，它们通过一个简单的共价键或者由连接物-介导的一个共价键结合在双链RNA(siRNA)的两端，从而使上述双链寡核糖核苷酸被有效的传递到细胞内，且该双链寡核糖核苷酸结构通过其在水溶液中相互间的疏水作用可被转化成纳米粒。所述双链寡核糖核苷酸结构中的该双链寡核糖核苷酸对双调蛋白具有较好的特异性，是一种特别好的双调蛋白特异性-siRNA(amphiregulin-specific siRNA)，其中双调蛋白基因是一种与呼吸道疾病相关的基因。此外，本专利技术还涉及一种制备所述双链寡核糖核苷酸结构的方法和一种用于预防或治疗呼吸道疾病尤其是慢性阻塞性肺疾病(COPD)和/或特发性肺纤维变性(IPF)的药物组合物，该药物组合物包括上述双链寡核糖核苷酸结构。
技术介绍
在治疗疾病药物的发展中和靶标确认中，抑制基因表达的技术是一个重要的工具。为靶基因导入一转基因的技术，作为抑制靶基因表达的传统技术，已经被公开，该技术包括在启动子的反义链方向导入转基因的方法(Sheehy et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,85:8805-8808,1988；Smith et al.,Nature,334:724-726,1988)和在启动子的有义链方向导入转基因的方法(Napoli et al.,Plant Cell,2:279-289,1990；van der Krol et al.,Plant Cell,2:291-299,1990；US Patent No.5,034,323；US Patent No.5,231,020；and US Patent No.5,283,184)。同时，最近报道了转录后的基因沉默或者RNA干扰(RNAi)是由一个具有20-25个碱基对的双链RNA片段的累积引起的，该双链RNA是由RNA模板合成的(Hamilton&Baulcumbe,Science,286:950-952,1999)。上述双链DNA片段被命名为“短干扰核糖核酸(在下文中用siRNA指代)”。此后，siRNA被证实是抑制各种生命有机体的基因表达的一个重要的因素，包括哺乳动物(Fire et al.,Nature,391:806-811,1998；Timmons&Fire,Nature,395:854,1998；Kennerdell&Carthew,Cell,95:1017-1026,1998；Elbashir et al.,Nature,411:494-497,2001；WO 99/32619)。此外，已知双链siRNA被细胞内的RISC(RNA诱导沉默复合物)蛋白复合物转化为单链RNA，然后结合到目标mRNA上使目标mRNA失活(Novina&Sharp,Nature,430:161-164,2004)。利用上述siRNA来抑制基因表达的技术，被用来抑制靶细胞内的靶基因的表达，和观察由此引发的改变，也被有利地用在致力于鉴定靶细胞内的靶基因的功能的研究上。特别地，抑制易传染病毒或癌细胞中的靶基因的功能这种方式被认为可有效的用于治疗相关疾病的方法的发展。在实验动物上进行的体外研究和体内研究结果表明，靶基因被siRNA诱导沉默是有可能的(McCaffrey et al.,Nature Biotechnology,21:639-644,2003；Giladi et al.,Molecular Therapy,8:769-776,2003；Konishi et al.,epatology,38:842-850,2003；Sen et al.,Virus Research,96:27-35,2003；Yokota et al.,EMBO Reports,4:602-608,2003；Song et al.,Nature Medicine,9:347-351,2003；McCaffrey et al.,Nature,418:38-39,2002)。例如，国际专利公开号为WO 03/070969的专利中公开了一种通过利用siRNA抑制Bc12蛋白质在癌细胞中的表达来治疗癌细胞的方法，国际专利公开号为WO 04/009769的专利中公开了一种通过利用siRNA抑制血管原性VEGF蛋白的表达来治疗癌细胞的方法。同样地，因为siRNA可以以序列特异性的方式互补地结合在靶mRNA上来调节靶基因的表达，siRNA与传统的抗体药物或化学药物(小分子药物)相比，可以被有利地用在非常广范围的应用中。(Progress Towards in Vivo Use of siRNAs.MOLECULAR THERAPY.200613(4):664-670)。siRNA具有极好的效果且可被用在广泛范围内的应用中，但为了使siRNA发展到治疗药物中，还需要改善siRNA的体内稳定性和细胞内的传递有效性，从而有效地将siRNA传送到它的靶细胞中(Harnessing in vivo siRNA delivery for drug discovery and therapeutic development.Drug Discov Today.2006Jan；11(1-2):67-73)。为了改善siRNA的体内稳定性并解决与siRNA的先天性免疫刺激相关的问题，对以下技术的研究已在积极进行中：通过修改siRNA上的一些核苷酸或siRNA骨架的方法来改善其体内稳定性从而使siRNA对核酸酶具有抵抗性的技术，或是利用载体比如病毒载体、脂质体或者纳米颗粒的技术。包含病毒载体如腺病毒或逆转录酶病毒的传送系统具有高转染效能，但携带了免疫原性和致瘤性的风险。另一方面，相比于病毒载体，非病毒载体包括纳米颗粒被评估具有低细胞内传递效能，但也有其优势，包括体内高安全性，靶向特异性传送，有效的摄入和包裹RNA寡核苷酸进入细胞或组织，以及低细胞毒性和低免疫刺激性。因此，相比于病毒传送系统，这些非病毒载体被认为是一种有前景的传送方法(Nonviral delivery of synthetic siRNAs in vivo.J Clin Invest.2007December 3；117(12):3623–3632)。一种利用非病毒传送系统中的纳米载体的方法里，纳米颗粒是用各种多本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种双调蛋白特异性‑siRNA，包含有义链和反义链，该有义链包含任意一条选自SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:230的序列，该反义链含有与上述有义链互补的序列。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.10.05 KR 10-2012-01105591.一种双调蛋白特异性-siRNA，包含有义链和反义链，该有义链包含
任意一条选自SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:230的序列，该反义链含有与上
述有义链互补的序列。
2.如权利要求1所述的双调蛋白特异性-siRNA，其中所述siRNA的有
义链或反义链由19-31个核苷酸组成。
3.如权利要求1所述的双调蛋白特异性-siRNA，其中所述有义链包含
任一选自SEQ ID NO:8,9,28,39至41,43至45,47,49和50的序列，所述
反义链包含与上述有义链互补的序列。
4.如权利要求1至3任一项所述的双调蛋白特异性-siRNA，其中所述
siRNA的有义链或反义链至少包含一种化学修饰。
5.如权利要求4所述的双调蛋白特异性-siRNA，其中所述化学修饰是
选自以下修饰中的至少一种：一个或多个核苷酸的糖结构的2’碳位置上的
OH基团被–CH3(甲基),-OCH3(甲氧基),-NH2,-F(氟基),-O-2-甲氧乙基-O-
丙烷基,-O-2-甲硫基,-O-3-丙氨基,-O-3-二甲基氨丙基,-O-N-甲基乙酰胺或-
O-二甲氨基乙氧基取代的修饰；核苷酸中的糖结构的氧被硫取代的修饰；
核苷酸与磷硫酰、硼氢化磷酸盐或甲基膦酸酯键之间的化学键的修饰；对
PNA(核酸肽)，LNA(锁核酸)或UNA(未锁核酸)的修饰。
6.如权利要求1至5任一项所述的双调蛋白特异性-siRNA，其中一个
或多个磷酸基团结合到双调蛋白特异性-siRNA的反义链的5’端。
7.一种双链寡核糖核酸结构，包含由以下结构式(1)所代表的结构：
结构式(1)A-X-R-Y-B
所述结构式(1)中A代表亲水性化合物，B代表疏水性化合物，X和
Y各自单独代表简单的共价键或者连接物-介导的共价键，以及R代表所述
双调蛋白特异性-siRNA。
8.如权利要求7所述的双链寡核糖核苷酸结构，含有由以下结构式(2)
所代表的结构：
结构式(2)所述结构式(2)中，S和AS分别是双调蛋白特异性-siRNA的有义链
和反义链，A，B，X和Y与权利要求7中所定义的相同。
9.如权利要求8所述的双链寡核糖核苷酸结构，含有由以下结构式(3)
所代表的结构：
结构式(3)所述结构式(3)中A，B，X，Y，S和AS与权利要求8所定义的相
同，5’和3’分别代表双调蛋白特异性-siRNA的有义链的5’端和3’端。
10.如权利要求7至9任一项所述的双链寡核糖核苷酸结构，其中所述
双调蛋白特异性-siRNA是权利要求1至权利要求6任一项所述的siRNA。
11.如权利要求7至10任一项所述的双链寡核糖核苷酸结构，其中所<...
【专利技术属性】
技术研发人员：朴翰浯，蔡济旭，尹坪伍，
申请(专利权)人：株式会社百奥尼，
类型：发明
国别省市：韩国;KR
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