本发明专利技术涉及免疫刺激性寡核糖核苷酸。本发明专利技术提供了免疫刺激性组合物以及这些化合物在药物制备以及体外用途中的用途，所述药物用于治疗疾病。本发明专利技术的组合物尤其包括加入了序列依赖性免疫刺激性序列基序的免疫刺激性寡核糖核苷酸。本发明专利技术提供了涉及磷酸联接、核苷酸类似物、加合物及其组合的特定修饰。可以任选地含有抗原的本发明专利技术组合物能够单独使用，或与其它治疗一起用于刺激或增强免疫应答。本发明专利技术还提供了适用于治疗下述受试者的方法，所述受试者患有感染、癌症、变应性病症、哮喘、气道再造或免疫缺陷。本发明专利技术的免疫刺激性寡核糖核苷酸被认为能刺激Toll样受体8(TLR8)。
【技术实现步骤摘要】
一般而言，本专利技术涉及免疫学领域，更具体地涉及免疫刺激性分子。更特别地，本专利技术涉及具有免疫刺激活性的核糖核酸(RNA)分子，包括寡核糖核苷酸。
技术介绍
Toll样受体(TLR)是高度保守的模式识别受体(PRR)多肽家族，其识别与病原体结合的分子模式(PAMP)，在哺乳动物的先天免疫(innate immunity)中起关键作用。目前已经鉴定出了至少十个家族成员，它们被命名为TLR1-TLR10。多种TLR的胞浆结构域特征在于 jToll-白介素 1 受体(TIR)结构域。Medzhitov R et al. (1998)Mol Cell 2 :253_8。 TLR对微生物侵入的识别引发信号级联放大的激活，这在果蝇(Drosophila)和哺乳动物中是保守的。已经报导含IlR结构域的适体蛋白MyD88与TLR结合，将与白介素1受体结合的激酶(IRAK)和肿瘤坏死因子(TNF)受体结合的因子6(TRAF6)募集至TLR。人们认为， MyD88-依赖性的信号转导途径导致NF-κ B转录因子和c-Jim NH2末端激酶(Jnk)促有丝分裂剂(mitogen)-激活的蛋白激酶(MAPK)的活化，这是免疫激活中及炎症细胞因子产生的关键步骤。综述参阅 Aderem A et al. (2000)Nature 406 :782-87和Akira S et al. (2004) Nat Rev Immunol 4 :499-511。已经鉴定出了大量的特异性TLR配体。TLR2的配体包括肽聚糖和脂肽。Yoshimura A et al. (1999) J Immunol 163 1-5 ；Yoshimura A et al. (1999) J Immunol 163:1—5; Aliprantis AO et al. (1999) Science 285 :736_9。脂多糖(LPS)是TLR4 的配体。Poltorak A et al. (1998)Science 282 :2085-8 ；Hoshino K et al. (1999)J Immunol 162 :3749_52。 细菌鞭毛蛋白是 TLR5 的配体。Hayashi F et al. (2001)Nature 410:1099-1103。已经报导肽聚糖不仅是TLR2的配体，而且还是TLR6的配体。Ozinsky A et al. (2000) Proc Natl Acad Sci USA 97 :13766-71 ；Takeuchi 0 et al. (2001)Int Immunol 13 :933—40。 最近报导某些低分子量合成化合物咪唑喹啉咪喹莫德(imidazoquinolines imiquimod, R-837)和瑞喹莫德(resiquimod，R-848)是 TLR7 和 TLR8 的配体。Hemmi H et al. (2002) Nat Immunol 3 :196-200 Jurk M et al. (2002)Nat Immunol 3 :499。从近来发现未甲基化的细菌DNA及其合成的类似物(CpG DNA)是TLR9的配体 (Hemmi H et al. (2000)Nature 408 :740-5 ；Bauer S et al. (2001)Proc Natl Acad Sci USA 98,9237-42)开始，已经有报导某些TLR的配体包括某些核酸分子。目前已经报导某些类型的RNA以序列非依赖性或序列依赖性形式是免疫刺激性的。另外，已经报导这些多种免疫刺激性RNA能刺激TLR3、TLR7或TLR8
技术实现思路
一般而言，本专利技术涉及含有某些免疫刺激性RNA基序的免疫刺激性的寡核糖核苷酸(ORN)，以及含有这类免疫刺激性ORN的相关免疫刺激性组合物，和这类免疫刺激性ORN 和组合物的使用方法。本专利技术的免疫刺激性ORN适用于任何用于刺激或增强免疫应答的装置(setting)或应用中。如下文所公开的，本专利技术的免疫刺激性ORN尤其适用于制备含有佐剂、疫苗、和其它药剂的药物组合物，所述药物组合物用于治疗多种病症，包括感染、癌症、变态反应和哮喘。因此，本专利技术在某些方面涉及含有本专利技术的免疫刺激性ORN的免疫刺激性组合物，以及它们的使用方法。如下文所公开的，本专利技术的免疫刺激性ORN和免疫刺激性组合物尤其适用于下述方法中，所述方法用于激活免疫细胞，疫苗接种受试者，治疗患有免疫系统缺陷的受试者，治疗患有感染的受试者，治疗患有自身免疫疾病的受试者， 治疗患有癌症的受试者，治疗患有变应性病症的受试者，治疗患有哮喘、气道重建(airway remodeling)、促进表位扩展和抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的受试者。如下文更详细地公开的，本专利技术的免疫刺激性ORN的特征在于它们包含至少一种序列依赖性的免疫刺激性RNA基序。序列依赖性的免疫刺激性RNA基序通常是短的RNA序列，尽管在某些实施方案中该基序也可以含有修饰，例如经修饰的核苷酸间磷酸联接、经修饰的核碱基(nuclecAase)、经修饰的糖、核苷酸类似物或其任何组合。如下文更详细地描述的，在一个实施方案中，免疫刺激性RNA基序存在于本专利技术的较长免疫刺激性ORN的环境中。免疫刺激性RNA基序也可以存在于嵌合的DNA:RNA核酸分子的环境中。序列依赖性的免疫刺激性RNA基序和加入有了这些基序的免疫刺激性ORN被公开为TLR8的激动剂。更具体地，至少某些序列依赖性免疫刺激性RNA基序、免疫刺激性ORN 和免疫刺激性DNA: RNA核酸分子被公开为是TLR8的激动剂而不是TLR7的激动剂。根据本专利技术一些方面的免疫刺激性RNA基序是N-U-R1-I^N是核糖核苷酸，并且N不包括U。在一些实施方案中，N为腺苷或胞嘧啶(C)或其衍生物。U是尿嘧啶或其衍生物。R是核糖核苷酸，其中队和&至少之一是腺苷(A)或胞嘧啶或其衍生物。R不是 U,除非N-U-R1-K含有至少两个A。本专利技术的ORN含有至少一个以及在一些实施方案中含有多于一个(即2、3或4个) 免疫刺激性基序N-U-R1-I^ ORN不含有TLR7/8基序。ORN优选长度为4-100，并任选地含有至少一处主链修饰。在一些实施方案中N-U-R1-Ii2可含有至少3个As或至少2个Cs。任选地，N-U-R1-Ii2 含有至少一个G或C。在一些实施方案中，ORN不是 ACCCAUCUAUUAUAUAACUC (SEQ ID NO 89)。在其它一些实施方案中，ORN基序通过非核苷酸接头与5’核糖核苷酸分隔。还在其它一些实施方案中，ORN基序通过非核苷酸接头与3’核糖核苷酸分隔。任选地，ORN基序通过非核苷酸接头与5’和3’核糖核苷酸分隔。ORN还包含可药用的运载体，其任选地是脂质运载体如N- -N，N, N三甲基铵甲基硫酸酯(DOTAP)。在其它一些实施方案中，ORN不与DOTAP复合。ORN可以是单链或双链的。在其它一些实施方案中，ORN含有至少一个AU。还在其它一些实施方案中，ORN含有至少一个⑶。在一些实施方案中，ORN为以下之一A*U*A*G*G*C*A*C(SEQ ID NO :4)、G*C*C*A氺C氺C氺G氺A氺G氺C氺C氺G本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：亚历山大·福斯巴赫，约尔格·沃尔梅尔，格雷森·B·利浦福德，
申请(专利权)人：科勒制药股份公司，科勒制药集团公司，
类型：发明
国别省市：
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