灵芝tRFs在哮喘治疗中的制药用途制造技术

灵芝tRFs在哮喘治疗中的制药用途，本发明专利技术通过实验证明，源自灵芝属中药的tRFs对转化生长因子

【技术实现步骤摘要】
灵芝tRFs在哮喘治疗中的制药用途


[0001]本专利技术属于哮喘治疗领域，具体涉及灵芝tRFs在哮喘治疗中的制药用途。

技术介绍

[0002]支气管哮喘(简称哮喘)是一种严重危害人类健康的常见病、多发病。依据王辰院士的调查，我国面临极为严峻的哮喘疾病负担。国内20岁以上人群哮喘患病率为4.2％，20岁以上总患病人数约有4579万，高达71.2％的哮喘患者此前未得到过明确诊断，更有95％未规范治疗。
[0003]气道重塑是哮喘的重要特征，在发病早期已经存在，导致不可逆性气流受限，是引起药物治疗反应欠佳的重要原因。气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells，ASMC)表型失衡在哮喘气道重塑中扮演重要角色。正常人群ASMC主要表现为“收缩型”，可以正常收缩和有效舒张，以维持正常的气道阻力。感染、过敏原和环境因素等损害，诱导ASMC从正常的“收缩型”向异常的“增殖/合成型”转换，表现为ASMC的过度增殖、肥大及异常收缩、分泌等，导致持续性气道高反应性(airway hyperresponsiveness，AHR)和不可逆性气流受限，加剧气道炎症，形成“恶性循环”。因此，通过靶向“增殖/合成型”ASMC表型，有望逆转气道重塑，为提升哮喘总体临床疗效、实现根本治愈提供新的依据。
[0004]目前，一些研究表明，非编码RNA(non coding RNA)如微小RNA通过在几乎所有真核生物中靶向RNA转录或转录后过程的不同方面而具有不同的调节作用。Lin Zhang等人(Cell research 2012,22,107
‑
126)提出，食物中的外源植物微小RNA可被哺乳动物的消化道吸收并通过血流输送到各个器官，从而调节哺乳动物基因的表达。灵芝(Ganoderma lucidum)为多孔菌科真菌，入肺经，补益肺气，温肺化痰，止咳平喘。灵芝毒性较小，但灵芝注射液可能会引起过敏反应。灵芝多糖、三萜、甾体等化合物已分别提取，并应用于抗菌、抗炎、抗癌、抗衰老、免疫调节等药物研发，但仍未广泛应用于临床。因此，当前对各种无人体毒副作用的药物和治疗方法存在需求。

技术实现思路

[0005]解决的技术问题：本专利技术提出灵芝tRFs在哮喘治疗中的制药用途，申请人通过前期ASMC细胞活力实验筛选出灵芝tRFs，并得到活性最好的灵芝tRF_31，分别在哮喘小鼠模型和TGF
‑
β1诱导的ASMC细胞模型中进行验证。结果显示灵芝tRF_31可抑制哮喘小鼠气道重塑，逆转TGF
‑
β1诱导的“增殖/合成型”ASMC。这可为灵芝tRF_31用于哮喘的治疗提供理论依据。
[0006]技术方案：灵芝属真菌RNA分子在制备预防或治疗哮喘药物中的应用。
[0007]上述RNA分子分离自或源自赤芝Ganoderma lucidum(Curtis:Fr.)P.Karst。
[0008]上述RNA分子源自灵芝属中药的转运RNA分子片段(tRNA fragment，tRFs)。
[0009]上述灵芝tRFs的序列包含选自SEQ ID NO.1
‑
6中的任一序列或其功能变体或其同源物。
[0010]上述tRFs分子是双链RNA分子，其包含选自SEQ ID NO.1
‑
6中任一所述的反义序列或其功能变体或其同源物，及SEQ ID NO.7
‑
12中任一所述的互补正义序列。
[0011]上述双链RNA分子或其功能变体或其同源物还包含3'悬突。
[0012]上述双链RNA分子或其功能变体或其同源物，其中所述双链RNA分子或其功能变体或其同源物的反义链和/或正义链的核苷酸序列包含至少一个经过化学修饰的核苷酸；其中，所述化学修饰选自1
‑
甲基、2
‑
甲基、5
‑
甲基、7
‑
甲基、N2
‑
甲基、N6
‑
甲基、N2,N2
‑
二甲基、2'
‑
O
‑
甲基、N6
‑
异戊烯基、2
‑
甲硫基
‑
N6
‑
异戊烯基、N6
‑
苏糖氨甲酰基、N6
‑
甲基
‑
N6
‑
苏糖氨甲酰基、2
‑
硫基、4
‑
硫基、N4
‑
乙酰基、5
‑
甲酰基、3
‑
(3
‑
氨基
‑3‑
羧丙基)、5
‑
甲氧基、5
‑
氧乙酸、5
‑
氧乙酸甲酯、5
‑
甲氧基羰基甲基、5
‑
甲氧基羰基甲基
‑
2'
‑
O
‑
甲基、5
‑
甲氧基羰基甲基
‑2‑
硫基、5
‑
氨基甲基
‑2‑
硫基、5
‑
甲基氨基甲基、5
‑
甲基氨基甲基
‑2‑
硫基、5
‑
氨基甲酰基甲基、5
‑
氨基甲酰基甲基
‑
2'
‑
O
‑
甲基、5
‑
羧基甲基氨基甲基、5
‑
羧基甲基氨基甲基
‑
2'
‑
O
‑
甲基、5
‑
羧基甲基氨基甲基
‑2‑
甲基、5
‑
牛磺酸甲基和5
‑
牛磺酸甲基
‑2‑
硫基中的至少一种。
[0013]一种预防或治疗哮喘的药物，有效成分含有上述的源自灵芝属中药的转运RNA分子中的至少一种或其功能变体或其同源物，以及任选的药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。
[0014]上述药物组合物还包含核酸稳定剂。
[0015]一种预防和治疗哮喘的递送载体，其包含所述的双链RNA分子或其功能变体或其同源物，以及任选的药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。
[0016]具体来说，(1)建立TGF
‑
β1诱导的ASMC细胞模型：检测灵芝tRFs的细胞活力和抗增殖作用，选择灵芝tRF_31干预，通过炎症、纤维化、增殖等指标检测，从细胞水平进一步明确灵芝tRF_31具有平衡ASMC表型的作用。(2)建立屋尘螨致小鼠哮喘动物模型：以屋尘螨滴鼻方法构建哮喘小鼠模型，明确灵芝tRF_31滴鼻给药对哮喘气道重塑的抑制作用。
[0017]研究的实验方法主要包括以下几个部分：
[0018]1.建立TGF
‑
β1诱导的ASMC细胞模型及灵芝tRFs的活性筛选
[0019]体外培养原代人A本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.灵芝属真菌RNA分子在制备预防或治疗哮喘药物中的应用。2.根 据 权 利 要 求 1 所 述 的 应 用 ，其 特 征 在 于 ，所述RNA分子分离自或源自赤芝Ganoderma lucidum (Curtis: Fr.) P. Karst。3.根 据 权 利 要 求 1 所 述 的 应 用 ，其 特 征 在 于 ，所述RNA分子源自灵芝属中药的转运RNA分子片段（tRNA fragment，tRFs）。4.根 据 权 利 要 求 3所 述 的 应 用 ，其 特 征 在 于 ，所述灵芝tRFs的序列包含选自SEQ ID NO.1
‑
6中的任一序列或其功能变体或其同源物。5.根 据 权 利 要 求 4所 述 的 应 用 ，其 特 征 在 于 ，所述tRFs分子是双链RNA分子，其包含选自SEQ ID NO.1
‑
6中任一所述的反义序列或其功能变体或其同源物，及SEQ ID NO. 7
‑
12中任一所述的互补正义序列。6.根 据 权 利 要 求 5所 述 的 应 用 ，其 特 征 在 于 ，所述双链RNA分子或其功能变体或其同源物还包含3'悬突。7. 根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述双链RNA分子或其功能变体或其同源物，其中所述双链RNA分子或其功能变体或其同源物的反义链和/或正义链的核苷酸序列包含至少一个经过化学修饰的核苷酸；其中，所述化学修饰选自1
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甲基、2
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甲基、5
‑
甲基、7
‑
甲基、N2
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甲基、N6
‑
甲基、N2,N2
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二甲基、2'
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O
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甲基、N6
‑
异戊烯基、2
‑
甲硫基
‑
N6
‑
异戊烯基、N6
‑
苏糖氨甲酰基、N6
‑
甲基
‑
N6
‑
苏糖氨甲酰基、2
‑
硫基、...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜志宏，马元，任飞，
申请(专利权)人：澳门科技大学，
类型：发明
国别省市：