环状RNAcircUbe2cbp的应用制造技术

本发明专利技术公开了环状RNA circUbe2cbp的应用，属于生物医药技术领域。该环状RNA circUbe2cbp可应用在制备治疗或预防神经退行性疾病的药物方面，它可用于制备抑制β淀粉样蛋白的产生，也可用于治疗神经退行性疾病，特别是阿尔兹海默病。别是阿尔兹海默病。别是阿尔兹海默病。

【技术实现步骤摘要】
环状RNA circUbe2cbp的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，特别是涉及一种新的环状RNA，并提供了它在改善神经系统的神经元损伤和认知损伤方面的应用。

技术介绍

[0002]衰老是包括各种痴呆症在内的神经退行性疾病的主要危险因素。β淀粉样蛋白(Aβ)作为老年斑(SP)的主要成分，在包括阿尔茨海默病(AD)等神经退行性疾病的发病机制中发挥着重要作用。环状RNA(Circular RNAs,circRNAs)是一种新型的非编码RNA(ncRNAs)分子，由特殊的环状结构组成。环状RNA具有高度保守和组织特异性。研究发现，环状RNA在大脑中大量表达，并与AD等神经退行性疾病有关。例如，circRNA ciRS
‑
7可以海绵吸附miR
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7，从而降低泛素羧基末端水解酶L1(UCHL1)基因的表达，导致APP和β分泌酶的降解，提示ciRS
‑
7可能参与了AD的病理生理过程。此外，Zhang等利用SAMP8小鼠模型发现，circRNA相关的ceRNA网络与Aβ清除(Hmgb2)和髓鞘功能(Dio2)有关。这些研究表明环状RNA可能参与了AD等神经退行性发病。然而，circRNA在该类疾病中的作用仍然不清楚。
[0003]SAMP8是一种快速老化相关小鼠模型，表现出与年龄相关的自发性神经退行性改变，包括大脑区域Aβ生成和清除异常、tau蛋白过度磷酸化、突触可塑性受损和神经元凋亡。因此该小鼠被认为是研究AD在内神经退行性疾病重要模型。研究发现，2月龄和6月龄SAMP8小鼠海马区均存在Aβ蛋白样免疫反应颗粒样结构(β
‑
LIGS)，且随着月龄增加小鼠海马区Aβ沉积的数量和程度亦增加。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是在现有技术的基础上，提供一种新的环状RNA circUbe2cbp，它可用于制备改善神经系统的神经元损伤和认知损伤的药物。
[0005]本专利技术的技术方案如下：
[0006]环状RNA circUbe2cbp在制备治疗或预防神经退行性疾病的药物方面的应用，它对应的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]环状RNA circUbe2cbp在制备治疗或预防痴呆症、特别是阿尔茨海默病的药物方面的应用。
[0008]环状RNA circUbe2cbp可应用在制备治疗或预防神经系统的神经元损伤或认知损伤的药物、抑制神经元凋亡的药物、制备抑制β淀粉样蛋白产生的药物、或者提高神经元突触结构可塑性的药物方面。
[0009]本专利技术包括一种含有环状RNA circUbe2cbp的药物组合物，它包括有环状RNA circUbe2cbp的核苷酸序列组以及药学上可接受的载体或辅料。
[0010]药物组合物中的载体包括但不限于pHBAAV
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CMV
‑
MCS
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T2A
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ZsGreen载体或EF
‑
1aF/GFP&Puro慢病毒载体等。
[0011]本专利技术包括一种含有circUbe2cbp的核苷酸序列组的病毒或质粒。
[0012]本专利技术的药物组合物可以制成液体或固体制剂，也可以制成注射或口服制剂。
[0013]本专利技术的环状RNA circUbe2cbp可用于制备抑制β淀粉样蛋白的产生，也可用于治疗神经退行性疾病，特别是阿尔兹海默病。
[0014]在本申请中，我们发现环状RNA circUbe2cbp在快速老化小鼠(aging
‑
accelerated mouse prone 8,SAMP8)海马表达水平显著下调。Morris水迷宫(MWM)和跳台试验结果表明，过表达circUbe2cbp可延长平台象限时间和跳下平台的潜伏期，减少下跳的错误次数。新物体识别实验结果表明，过表达circUbe2cbp可增加探索新物体的时间，提示过表达circUbe2cbp可改善SAMP8小鼠认知功能。TUNEL检测结果显示，过表达circUbe2cbp组神经元凋亡较对照组明显减少。高尔基实验结果显示，与对照组相比，过表达circUbe2cbpp组海马的分支数量、突触棘密度和分支长度均明显改善，提示过表达circUbe2cbp可减轻神经元损伤，增强突触形态可塑性。这表明circUbe2cbp可能是包括AD在内神经退行性疾病的新靶点。
附图说明
[0015]图1是环状RNA circUbe2cbp在SAMP8小鼠中的表达情况；
[0016]图中，A：circUbe2cbp在小鼠各组织器官中的表达情况。B和C：circUbe2cbp在3和6月龄小鼠海马中的表达情况。D：RNase酶消化实验检测circUbe2cbp的环形结构。
[0017]图2是环状RNA circUbe2cbp对SAMP8小鼠行为学及Aβ含量的影响；
[0018]图中，A：实验时间表；B：circUbe2cbp过表达腺相关病毒(AAV)注射后的表达情况；C：Morris水迷宫检测小鼠的学习记忆能力。D和E:跳台实验检测小鼠记忆能力；F：新物体实验检测小鼠记忆能力；G：circUbe2cbp过表达慢病毒(LV)感染N2a细胞情况；H：Elisa试剂盒检测circUbe2cbp过表达对N2a细胞Aβ含量的影响；I：Western blot实验检测circUbe2cbp过表达对SAMP8小鼠海马Aβ表达的影响。
[0019]图3是过表达circUbe2cbp抑制SAMP8小鼠海马神经元凋亡、提高神经元突触结构可塑性；
[0020]图中，A和B：TUNEL实验检测circUbe2cbp过表达对SAMP8小鼠海马神经元凋亡的影响。C～E：高尔基染色实验检测circUbe2cbp过表达对SAMP8小鼠海马神经元突触长度和分枝数的影响；F和G：高尔基染色实验检测circUbe2cbp过表达对SAMP8小鼠海马神经元突触棘密度的影响。
具体实施方式
[0021]通过以下实施例对本专利技术的检测方法作进一步的说明，但这些实施例不对本专利技术构成任何限制。
[0022]实施例1：circUbe2cbp在SAMP8小鼠中表达降低
[0023]实验方法：
[0024]1、RT
‑
PCR实验：
[0025](1)组织样本的总RNA抽提：
[0026]1)实验准备：将玻璃手持匀浆器洗净，放入酸缸中泡酸后清水洗15遍，和手术剪及镊子一同放入灭菌锅高压灭菌。将氯仿、异丙醇和75％乙醇放入冰箱4℃预冷。准备无核酶
耗材。
[0027]2)称量小鼠体重，准备1.5mL离心管并做好标记，将小鼠摘眼球取血备用。直至小鼠血液流尽致死，用手术剪将其头部剪下，冰上剥离，取出海马，放入1.5mL离心管中，冰上暂存，实验结束后，将组织移至
‑
80℃保存。取出部分海马放入小号的手持匀浆器中，加入800μL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.环状RNA circUbe2cbp在制备治疗或预防神经退行性疾病的药物方面的应用，它对应的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。2.环状RNA circUbe2cbp在制备治疗或预防痴呆症的药物方面的应用，它对应的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。3.环状RNA circUbe2cbp在制备治疗或预防阿尔茨海默病的药物方面的应用，它对应的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。4.环状RNA circUbe2cbp在制备治疗或预防神经系统的神经元损伤或认知损伤的药物方面的应用，它对应的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。5.环状RNA circUbe2...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴登攀，黄金兰，钟振国，杨斯漫，苏敏，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：