用于治疗前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶KEXIN(PCSK9)基因相关障碍的方法和组合物技术

本发明专利技术涉及抑制受试者中PCSK9基因表达的方法，以及使用靶向PCSK9基因的RNAi试剂例如双链RNAi试剂来治疗患有脂质障碍例如高脂血症的受试者的治疗性和预防性方法。症的受试者的治疗性和预防性方法。

【技术实现步骤摘要】
用于治疗前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶KEXIN(PCSK9)基因相关障碍的方法和组合物
[0001]本申请是申请日为2016年8月25日和专利技术名称为“用于治疗前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶KEXIN(PCSK9)基因相关障碍的方法和组合物”的201680062334.9号专利技术专利申请的分案申请。
[0002]相关申请
[0003]本申请要求2015年8月25日提交的美国临时专利申请号62/209,526的优先权权益，该申请的全部内容通过引用结合在此。
[0004]本申请涉及2012年12月5日提交的美国临时申请号61/733,518；2013年3月15日提交的美国临时申请号61/793,530；2013年10月4日提交的美国临时申请号61/886,916；2013年10月17日提交的美国临时申请号61/892,188；2013年12月5日提交的PCT申请号PCT/US 2013/073349；以及2015年6月5日提交的美国专利申请号14/650,128。前述专利申请的每个的全部内容特此通过引用结合在此。
[0005]序列表
[0006]本申请含有已经以电子方式以ASCII格式提交并且特此通过引用以其全文结合的序列表。所述ASCII复本创建于2016年8月24日，命名为121301
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04420_SL.txt及大小为188,218字节。

技术介绍

[0007]前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin 9(PCSK9)是枯草杆菌蛋白酶丝氨酸蛋白酶家族的一个成员。其他八种哺乳动物枯草杆菌蛋白酶蛋白酶PCSK1
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PCSK8(也称为PC1/3、PC2、弗林蛋白酶、PC4、PC5/6、PACE4、PC7、和S1P/SKI
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1)是加工分泌途径中的很多种蛋白质并且在多样的生物学过程中起作用的前蛋白转化酶(Bergeron,F.(2000)J.Mol.Endocrinol.[分子内分泌杂志]24,1
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22,Gensberg,K.,(1998)Semin.Cell Dev.Biol.[细胞及发育生物学讨论会文集]9,11
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17,Seidah,N.G.(1999)Brain Res.[大脑研究]848,45
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62,Taylor,N.A.,(2003)FASEB J.[美国实验生物学会联合会期刊]17,1215
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1227，以及Zhou,A.,(1999)J.Biol.Chem.[生物化学杂志]274,20745
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20748)。
[0008]已经提出PCSK9在胆固醇代谢中起作用。类似于胆固醇生物合成酶和低密度脂蛋白受体(LDLR)，PCSK9 mRNA表达通过在小鼠中通过饲喂膳食胆固醇被下调(Maxwell,K.N.,(2003)J.Lipid Res.[脂质研究杂志]44,2109
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2119)，通过他汀药物在HepG2细胞中被上调(Dubuc,G.,(2004)Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.[动脉硬化、血栓形成和血管生物学]24,1454
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1459)，并且在固醇调节元件结合蛋白转基因小鼠中被上调(SREBP)(Horton,J.D.,(2003)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]100,12027
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12032)。此外，已经发现PCSK9错义突变与常染色体显性高胆固醇血症形式(Hchola3)相关(Abifadel,M.等人(2003)Nat.Genet.[自然遗传学]34,154
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156,Timms,K.M.,(2004)Hum.Genet.[人类遗传学]114,349
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353,Leren,T.P.(2004)Clin.Genet.[临床遗传学]65,419
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422)。PCSK9还可以在决定一般人群中的LDL胆固醇水平中起作用，因为单核苷酸多态性(SNP)与日本人群的胆
固醇水平相关(Shioji,K.,(2004)J.Hum.Genet.[人类遗传学杂志]49,109
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114)。
[0009]常染色体显性高胆固醇血症(ADH)是单基因疾病，其中患者表现出升高的总胆固醇水平和LDL胆固醇水平、肌腱黃色瘤、和早熟性动脉粥样硬化(Rader,D.J.,(2003)J.Clin.Invest.[临床研究杂志]111,1795
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1803)。ADH和隐性形式，常染色体隐性高胆固醇血症(ARH)的发病机制(Cohen,J.C.,(2003)Curr.Opin.Lipidol.[当代脂质视点]14,121
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127)是由于经由肝脏的LDL摄取缺陷。ADH可以由阻止LDL摄取的LDLR突变引起，或者由在LDL上的蛋白质(结合LDLR的载脂蛋白B)的突变引起。ARH由ARH蛋白的突变引起，ARH蛋白对于经由它与网格蛋白的相互作用而内吞LDLR
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LDL复合物是必需的。因此，如果PCSK9突变是HChola3家族病的病因，那么PCSK9很可能在受体介导的LDL摄取中起作用。
[0010]过表达研究指出PCSK9在控制LDLR水平并因此在控制经由肝脏的LDL摄取中的作用(Maxwell,K.N.(2004)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]101,7100
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7105,Benjannet,S.等人(2004)J.Biol.Chem.[生物化学杂志]279,48865
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48875,Park,S.W.,(2004)J.Biol.Chem.[生物化学杂志]279,50630
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50638)。在小鼠中，腺病毒介导的小鼠或人PCSK9过表达3或4天导致总胆固醇水平和LDL胆固醇水平的升高，而在LDLR敲除动物中未见到这种作用(Maxwell,K.N.(2004)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]101,7100
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7105,Benjannet,S.等人(2004)J.Biol.Chem.[生物化学杂志]279,48865
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48875,Park,S.W.,(2004)J.Biol.Chem.[生物化学杂志]279,50630
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50638)。另外，PCSK9过表达导致肝脏LDLR蛋白的严重降低，但不影响LDLR mRNA水平、SREBP蛋白水平或SREBP蛋白的细胞核与细胞质比例。
[0011]虽然高胆固醇血症本身是无症状的，但是长期的血清胆固醇升高可导致动脉粥样硬化。经过几十年，慢性升高的胆固醇促成动脉中动脉粥样硬化斑块形成，动脉粥样硬化可导致涉及动脉的进行性狭窄或甚至完全闭塞。另外，更小的斑块可能破裂并引起凝块形成和血流阻断，从而导致例如心肌梗死和/或中风。如果本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种药物组合物，包含双链核糖核酸(RNAi)试剂或其盐，其中该双链RNAi试剂包含形成双链区域的正义链和反义链，其中该正义链包含5
’‑
csusagacCfuGfudTuugcuuuugu
‑3’
(SEQ ID NO:687)的核苷酸序列，并且该反义链包含5
’‑
asCfsaAfAfAfgCfaAfaAfcAfgGfuCfuagsasa
‑3’
(SEQ ID NO:688)的核苷酸序列，其中a、g、c和u分别是2
′‑
O
‑
甲基(2
′‑
OMe)A、G、C和U；Af、Gf、Cf和Uf分别是2'
‑
氟A、G、C和U；dT是2'
‑
脱氧胸苷；以及s为硫代磷酸酯键，其中该双链核糖核酸RNAi试剂共轭至N
‑
乙酰半乳糖胺(GalNAc)3配体，以及其中所述药物组合物为用于皮下注射的单位剂型，其每个单位剂型足以(i)抑制人受试者中前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin(PCSK9)基因的表达至少3个月，(ii)降低人受试者的血清中低密度脂蛋白(LDLc)的水平至少3个月，(iii)治疗人受试者的高脂血症至少3个月或(iv)治疗人受试者的高胆固醇血症至少3个月，其中所述药物组合物的每个单位剂型包含275mg至325mg的固定剂量的所述双链RNAi试剂或其盐。2.如权利要求1所述的药物组合物，其中该(GalNAc)3配体共轭至该双链核糖核酸RNAi试剂的正义链的3'末端。3.如权利要求1或2所述的药物组合物，其中该(GalNAc)3配体是4.如权利要求3所述的药物组合物，其中该双链核糖核酸RNAi试剂共轭至该(GalNAc)3配体，如以下示意图中所示并且，其中X是O或S。5.如权利要求4所述的药物组合物，其中该X是O。
6.如权利要求1
‑
5中任一项所述的药物组合物，其中该双链RNAi试剂存在于非缓冲溶液中的组合物中。7.如权利要求6所述的药物组合物，其中该非缓冲溶液是盐水或水。8.如权利要求1
‑
5中任一项所述的药物组合物，其中该双链RNAi存在于缓冲溶液中的组合物中。9.如权利要求8所述的药物组合物，其中该缓冲溶液包含乙酸盐、柠檬酸盐、醇溶谷蛋白、碳酸盐或磷酸盐或其任何组合。10.如权利要求8所述的药物组合物，其中该缓冲溶液是磷酸盐缓冲盐水(PBS)。11.如权利要求1
‑
10中任一项所述的药物组合物，其中该固定剂量为300mg。12.如权利要求1
‑
11中任一项所述的药物组合物，其中该固定剂量以每季度一次的间隔给予。13.如权利要求1
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11中任一项所述的药物组合物，其中该固定剂量以每半年的间隔给予。14.药物组合物在制备用于：(i)抑制人受试者中前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin 9(PCSK9)基因的表达，或(ii)降低人受试者的血清中低密度脂蛋白胆固醇(LDLc)的水平，或(iii)治疗人受试者的高脂血症，或(iv)治疗人受试者的高胆固醇血症的药物中的用途，其中该药物组合物包含双链核糖核酸(RNAi)试剂或其盐，其中该双链RNAi试剂包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：阿尔尼拉姆医药品有限公司，
类型：发明
国别省市：