特异靶向拟南芥ILK2基因的sgRNA序列及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种特异靶向拟南芥ILK2基因的sgRNA序列及其应用；所述sgRNA序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术根据sgRNA导向序列设计合成两条单链oligo DNA序列，退火形成双链，与Cas9载体连接，利用农杆菌介导的遗传转化技术，将sgRNA编码序列和CRISPR系统引入拟南芥中，Cas9蛋白会在sgRNA的引导下剪切目标序列，实现ILK2基因的敲除。本发明专利技术提供的sgRNA序列，可通过CRISPR‑Cas9系统敲除或编辑ILK2基因，以解析拟南芥ILK2基因的功能。

SgRNA sequence of specific target Arabidopsis thaliana ILK2 gene and application thereof

The invention discloses a specific target sgRNA sequence of ILK2 gene from Arabidopsis thaliana and its application; the nucleotide sequence of the sgRNA sequence is shown as SEQ ID NO.1. According to the sgRNA sequence oriented design and synthesis two monocatenarian oligo DNA sequence, annealed to form double chains, connected with Cas9 vector by Agrobacterium mediated genetic transformation technologies, the sgRNA encoding sequence and CRISPR system into the Arabidopsis Cas9 protein in sgRNA under the guidance of cutting target sequence, ILK2 gene knockout. The sgRNA sequence provided by the invention, through the CRISPR Cas9 system knockout or edit the ILK2 gene in Arabidopsis ILK2 gene function analysis.

【技术实现步骤摘要】
特异靶向拟南芥ILK2基因的sgRNA序列及其应用
本专利技术属于基因工程
，具体而言，涉及一种特异靶向拟南芥ILK2基因的sgRNA序列及其应用。
技术介绍
ZFN、TALEN和CRISPR基因打靶技术是基因编辑的核心技术，相比于前两种技术繁琐的构建程序，比如每一个位点需要构建一对相应的核酸酶，并且高度依赖目标上下游序列，CRISPR/Cas9系统对特异位点的识别靠小的sgRNA的引导，sgRNA区可以由一系列针对不同基因的多个sgRNA组成，每个针对特异位点的sgRNA只有二十个碱基，整个载体较小，CRIEPR载体更加容易构建，其基因编辑也更加高效。CRISPR/Cas9原是细菌和古细菌应对外源病毒侵害的防御系统，现已广泛应用于人类细胞、小鼠、斑马鱼、水稻等进行基因改造。它由导向序列sgRNA和核酸酶Cas9两种元件组成，sgRNA可通过碱基互补识别基因组中特定序列从而引导核酸酶Cas9对其进行切割造成双链DNA断裂(Double-strandbreaks，DSB)，当宿主细胞通过非同源重组方式进行修复，发生非同源重组末端连接(Non-homologousendjoinin本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种敲除拟南芥ILK2基因的sgRNA序列，其特征在于，所述sgRNA序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种敲除拟南芥ILK2基因的sgRNA序列，其特征在于，所述sgRNA序列的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.一种用于编码如权利要求1所述sgRNA序列的DNA序列，其特征在于，所述DNA序列如SEQIDNO.2所示。3.一种用于敲除拟南芥ILK2基因的载体，其特征在于，所述载体为含有能表达特异性靶向ILK2基因第一外显子的核苷酸序列的如SEQIDNO.2所示的sgR...

【专利技术属性】
技术研发人员：左开井，王俊，吕萌荔，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海,31