本发明专利技术涉及生物技术领域，具体是一种治疗牙髓炎的靶向人JNK1基因的小干扰RNA序列及其应用，所述的小干扰RNA包括正义链和反义链，所述的正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述的反义链的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。本发明专利技术获得的小干扰RNA序列未见于以往公开的报道，能在JNK1基因的转录后进行干扰，降低炎症牙髓干细胞中p‑JNK的表达，特异性降低牙髓干细胞的凋亡，促进牙髓干细胞的成牙本质分化，为牙髓炎提供新的治疗方案。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，具体地说，是一种治疗牙髓炎的靶向人JNK1基因的小干扰RNA序列及其应用。
技术介绍
牙髓炎是最常见的口腔疾病之一，主要症状是疼痛，不及时治疗可引起根尖周炎、颌骨囊肿等，影响患者的口腔功能、美观、发音和心理状态，甚至成为病灶，引起低热、肾炎、心肌炎、虹膜睫状体炎、类风湿关节炎等多种疾病，影响全身健康。龋病是引起牙髓炎的主要病因之一，细菌感染及炎性细胞的浸润造成牙本质破坏，此时机体可形成修复性牙本质避免牙髓受到细菌及其毒素的刺激，以维持牙体结构的完整性，但是由于牙本质的修复速度较牙本质的破坏速度缓慢，从而导致牙体结构破坏，最终导致牙髓炎的发生。根管治疗是目前临床上最常用的治疗方法，但治疗后的牙齿脆性增加、易折裂，限制其广泛使用。因此，充分认识炎症状态下修复性牙本质的形成机理及调节机制，对于防治牙髓炎的发生和发展具有重要意义。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)又被称为应激活化蛋白激酶(stress-activated protein kinase,SAPK)是MAPK(mitogen-activated protein kinase，丝裂原活化蛋白激酶)家族主要部分，包括JNK1、JNK2和JNK3三个成员，在组织中广泛表达。在MAPK信号转导过程中JNK可由上游激酶MKK4/SEK1和JNKK2/MKK7激活，活化的JNK可经核转位进入细胞核，通过磷酸化调节转录因子的活性，产生一系列广泛而重要的生物学效应，包括炎症发生、细胞生长、增殖、分化、细胞周期阻滞及细胞凋亡等。先前的研究发现JNK激活与牙髓细胞的成牙本质分化相关。重组人牙本质涎蛋白(Recombinant human dentin sialoprotein，RH-DSP)能增强JNK的磷酸化，进而导致牙髓细胞的成牙本质分化增加。Luo等研究发现，JNK抑制剂SP600125能显著降低牙髓干细胞(dental pulp stem cells，DPSCs)的成牙本质分化能力(Luo Z,Kohli MR,Yu Q,Kim S,Qu T,and He WX,Biodentine induces human dental pulp stem cell differentiation through mitogen-activated protein kinase and calcium-/calmodulin-dependent protein kinase II pathways.J Endod.2014；40(7):937-942.)。胸腺素β-4活化的DPSCs中，JNK的磷酸化增强，当加入JNK抑制剂后，成牙本质分化水平降低。上述结果显示JNK活化可以促进DPSCs成牙本质分化。JNK与炎症和细胞凋亡密切相关，在慢性牙周炎的牙龈组织中，JNK表达增加。在脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)刺激的牙髓细胞中，茶多酚可通过抑制JNK的活化抑制炎症反应。在镉诱导的H460细胞凋亡的过程中，JNK蛋白磷酸化水平明显增高。临床中洛伐他汀治疗心血管疾病诱导巨噬细胞凋亡是通过Rac/Cdc42/JNK通路完成的。另外JNK活化后可进入线粒体，切割Bid蛋白，促进其向线粒体转移，激活Bax，促进细胞色素C的释放，从而促进细胞凋亡。RNA干扰(RNA interference，RANi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的一种生物学现象，能特异干扰靶基因的表达。其作用机制是：核糖核酸酶III家族的Dicer酶，与dsRNA结合，将其剪切成21-25nt及3’端突出的小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)，随后siRNA与RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)结合，解旋成单链，活化的RISC受已成单链的siRNA引导，序列特异性地结合到靶信使RNA(mRNA)上并将其切断，引发靶mRNA的特异性分解，从而抑制相应基因表达。目前已成为一门独立的技术，作用靶点特异性高、对细胞毒性小、相对安全，引起生物医学界所有研究领域的广泛兴趣。
技术实现思路
本专利技术的目的在于以最新的JNK1基因序列为靶点，提供一种治疗牙髓炎的新的特异性抑制人JNK1基因表达的小干扰RNA序列及其应用。本专利技术的第一方面，提供一种靶向人JNK1基因的小干扰RNA的靶标基因，所述的靶标基因的核苷酸序列为5’-GTCGGTTAGTCATTGATAG-3’，如SEQ ID NO:1所示。本专利技术的第二方面，提供一种靶向人JNK1基因的小干扰RNA，由下述正义链和反义链组成：正义链：5’-GAGUCGGUUAGUCAUUGAUAG-3’(SEQ ID NO:2)；反义链：5’-CUAUCAAUGACUAACCGACUC-3’(SEQ ID NO:3)。本专利技术的第三方面，提供上述靶向人JNK1基因的小干扰RNA的靶标基因在制备治疗牙髓炎药物中的应用。本专利技术的第四方面，提供上述靶向人JNK1基因的小干扰RNA在制备治疗牙髓炎药物中的应用。所述的靶向人JNK1基因的小干扰RNA特异性降低牙髓干细胞的凋亡，促进牙髓干细胞成牙本质分化。本专利技术的第五方面，提供一种治疗牙髓炎的药物组合物，所述的药物组合物包括上述靶向人JNK1基因的小干扰RNA和药学上可接受的载体。所述的药学上可接受的载体为药学上可接受的赋形剂，悬浮剂，填充剂和/或稀释剂。本专利技术优点在于：本专利技术获得的小干扰RNA序列未见于以往公开的报道，能在JNK1基因的转录后进行干扰，降低炎症牙髓干细胞中p-JNK的表达，特异性降低牙髓干细胞的凋亡，促进牙髓干细胞的成牙本质分化，可为治疗牙髓炎提供新的方案。附图说明图1是siRNA对牙髓干细胞JNK1蛋白的下调作用。(图示为Western blot检测JNK1蛋白表达量，依次为空白组，对照组和siRNA组；GAPDH为内参。提示该siRNA能显著降低JNK1蛋白的表达。)图2是western blot检测siRNA对牙髓干细胞在重度炎症下成牙本质分化的影响。结果表明：A为在不同浓度炎症因子TNF-a作用下，牙髓干细胞的成牙本质能力以浓度依赖方式降低，成牙本质标记物牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白1(dental matrix protein-1,DMP1)的表达以浓度依赖的方式降低。B为siRNA作用后能明显恢复牙髓干细胞在炎症刺激下的成牙本质分化能力，特别是在100ng/mlTNF-a刺激下。提示该siRNA具有促成牙本质分化能力。图3是ALP染色检测siRNA对牙髓干细胞成牙本质分化能力的影响。结果显示为A为牙髓干细胞在不同浓度TNF-a刺激下成牙本质分化培养14天后ALP染色结果明显降低。B高浓度炎症100ng/ml TNF-a作用下，与对照组相比，给与siRNA后能更明显恢复牙髓干细胞的成牙本质分化能力。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术提供的具体实施方式作详细本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种靶向人JNK1基因的小干扰RNA的靶标基因，其特征在于，所述的靶标基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
【技术特征摘要】
1.一种靶向人JNK1基因的小干扰RNA的靶标基因，其特征在于，所述的靶标基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.一种靶向人JNK1基因的小干扰RNA，其特征在于，所述的小干扰RNA包括正义链和反义链，所述的正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述的反义链的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。3.根据权利要求1所述的靶向人JNK1基因的小干扰RNA的靶标基因在制备治疗牙髓炎药物中的应用。4.根据权利要求2所述的靶向人JNK1基因的小干扰RNA在制备治疗...
【专利技术属性】
技术研发人员：张冬梅，刘晓娟，肖静雯，冯兴梅，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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