一对靶向斑马鱼Forkhead box n1基因的Talen识别序列及其mRNA制备方法技术

本发明专利技术公开了一对靶向斑马鱼Forkhead box n1基因的Talen识别序列及用于靶向敲除斑马鱼Forkhead box n1基因的mRNA的制备方法。所述Talen识别序列对的基因序列分别如序列表SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述mRNA的制备方法包括以下步骤a)组装并合成权利要求1所述的Talen识别序列对；b)根据a)的所述的Talen识别序列对，构建靶向Forkhead box n1基因的基因敲除效应蛋白Talen的表达载体；c)将步骤b)获得的载体通过脂质体转染，在293T细胞内检测蛋白表达情况；d)将步骤b)获得的载体通过过体外转录，获得所述的用于靶向敲除斑马鱼Forkhead box n1基因的mRNA。本发明专利技术方法获得的mRNA，可以用于敲除斑马鱼Forkhead box n1基因，制备斑马鱼胸腺发育研究模型。与现有技术相比，成本低，设计简单，成功率高，具有明显的效果。

【技术实现步骤摘要】
一对靶向斑马鱼Forkheadboxn1基因的Talen识别序列及其mRNA制备方法
本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及利用基因打靶技术敲除斑马鱼Forkheadboxn1基因的方法。
技术介绍
胸腺是T细胞发育成熟的关键中枢器官，可分泌多种胸腺激素及激素类物质。ForkheadBox(Fox)转录因子家族是一组组翼状螺旋/叉头型转录因子家族，在人类中共发现20多种Forkhead基因，该转录因子在胚胎发育中，特别是内胚层发育器官中发挥着关键调控作用Forkheadboxn1在哺乳动物中参与了胸腺的形成、发育、成熟和退化各个阶段，人类和小鼠Foxn1基因突变或缺失可以引起胸腺发育严重障碍或缺失(李红然与张连军等,2010)。而对斑马鱼胸腺发育研究中发现，在Foxn1抑制的胚胎中，胸腺原基减少，T细胞的发育受损，揭示Foxn1在斑马鱼胸腺形成的遗传调控网络中的中心作用(MaandWangetal.,2012)。因此构建Foxn1基因敲除的斑马鱼对进一步阐明胸腺发育、维持机制具有重要意义。传统的基因敲除技术依赖于细胞内自然发生的同源染色体的随机交换，但在体细胞内，基因同源重组的效率本文档来自技高网...

【技术保护点】
一对靶向斑马鱼Forkhead box n1基因的Talen识别序列，其特征在于，所述识别序列对的基因序列分别如序列表SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

【技术特征摘要】
1.一对靶向斑马鱼Forkheadboxn1基因的Talen识别序列核苷酸，其特征在于，所述识别序列对的基因序列分别如序列表SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。2.一对用于合成靶向敲除斑马鱼Forkheadboxn1基因的Talen蛋白的表达载体对，所述表达载体含有权利要求1所述的识别序列核苷酸。3.根据权利要求2所述的表达载体对，其特征在于，所述载体为pCS2-Foxn1-FOK1-L和pCS2-Foxn1-FOK1-R，分别对应所述靶标序列两段的识别序列核苷酸。4.一种用于靶向敲除斑马鱼Forkheadboxn1基因的mRNA制备方法，其特征在于，包括以下步骤:a)组装并合成权利要求1所述的Talen识别序列对；b)根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐安龙，王晓敏，郭亚楠，游雷鸣，王磊，任政华，陈尚武，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东;44