用于抑制PLP1表达的组合物和方法技术

本文提供了抑制PLP1表达的寡核苷酸。还提供了包含寡核苷酸的组合物及其用途，特别是与治疗与PLP1表达相关联的疾病、病症和/或病状相关联的用途。相关联的用途。相关联的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于抑制PLP1表达的组合物和方法
[0001]相关申请交叉引用
[0002]本申请要求2020年8月4日提交的美国临时专利申请序列号63,061,040和2021年2月19日提交的美国临时专利申请序列号63/151,445的权益。其全部内容通过此引用并入本文。

技术介绍

[0003]髓磷脂蛋白脂质蛋白(PLP)是在来自中枢神经系统(CNS)的髓鞘中发现的最丰富的蛋白质。tetraspan蛋白在髓磷脂的结构和功能中起主要作用，并且对于少突胶质细胞和轴突之间的通讯是重要的(Gruennfelder等人，《解剖学杂志(J ANAT)》，219:33
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43(2011))。蛋白质起到神经保护作用；它是将蛋白质适当隔离到髓磷脂室中所必需的，据称对轴突的轴突
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神经胶质代谢和长期支持很重要(Werner等人，《神经科学杂志(J NEUROSCI)》，27:7717
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30(2007))。
[0004]PLP1基因的表达以空间
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时间方式调节(Wight和Dobrettova，《细胞和分子生命科学(CELL MOL LIFE SCI)》，61:810
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21(2004))。在发育的活跃髓鞘形成期，在少突胶质细胞中产生高水平。其表达必须严格调节，如通过与PLP1的表达相关联的X连锁遗传疾病所证明的。
[0005]在人类中，含有PLP1基因的染色体区域的区段性缺失(Raskind等人，《美国人类遗传学杂志(AM J HUM GENET)》，49:1355
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60(1991)；Inoue等人，《美国人类遗传学杂志》，71:838
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853(2002))和复制(Sistermans等人，《神经学(NEUROLOGY)》，50:1749
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54(1998)；Inoue等人，《神经病学年鉴(ANN NEUROL)》，45:624
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32(1999)；Mimault等人，《美国人类遗传学杂志》，65:360
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69(1999)；Hodes等人，《美国人类遗传学杂志》67:14
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22(2000))或更高的拷贝数(Wolf等人，《脑(BRAIN)》128:743
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51(2005))可以导致髓鞘形成病症佩梅病(Pelizaeus
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Merzbacher disease)(PMD)或相关的等位基因病症、即痉挛性截瘫2型(SPG2)。
[0006]需要靶向PLP1基因以防止此类疾病的策略。

技术实现思路

[0007]本公开至少部分地基于以下发现：包括如本文所述的合成RNAi寡核苷酸的小型干扰RNA(siRNA)可用于沉默编码与脑组织中的神经疾病或病症相关联的蛋白质的mRNA,如在神经元和神经胶质细胞(包括少突胶质细胞、小胶质细胞和星形胶质细胞)中表达的mRNA。令人惊讶地发现，在不存在细胞特异性或组织特异性靶向配体或递送媒介物(如病毒载体、脂质体或脂质纳米颗粒)的情况下，此类RNAi寡核苷酸有效地沉默在神经胶质细胞(如少突胶质细胞)中表达的mRNA。还发现，当与药学上可接受的载剂一起配制时，此类RNAi寡核苷酸提供了用于直接施用于受试者的脑脊液(CSF)的组合物，如通过鞘内、脑室内或小脑内延髓池施用。出乎意料的是，在将RNAi寡核苷酸单次或重复施用到非人灵长类动物的CFS中后，此类RNAi寡核苷酸在各种脑区域中表现出靶mRNA(PLP1)表达的持久敲低，可达84天。
[0008]本公开部分地基于双链寡核苷酸(例如，RNAi寡核苷酸)降低中枢神经系统(CNS)中PLP1表达的发现。因此，鉴定了PLP1mRNA内的靶序列，并且产生了与这些靶序列结合并抑制PLP1 mRNA表达的RNAi寡核苷酸。如本文所证实的，RNAi寡核苷酸抑制CNS的不同区域中的鼠Plp1表达和/或猴和人PLP1表达。不受理论的束缚，本文所述的RNAi寡核苷酸可用于治疗与PLP1表达相关联的疾病、病症或病状(例如，佩梅病(PMD)和/或痉挛性截瘫2型(SPG2)。在一些实施例中，本文所述的RNAi寡核苷酸可用于治疗与异常PLP1表达(例如，由PLP1基因复制或有害的PLP1突变等位基因的表达导致的PLP1过表达)相关联的疾病、病症或病状。在一些实施例中，本文所述的RNAi寡核苷酸可用于治疗与PLP1基因中的突变相关联的疾病、病症或病状。
[0009]由于PLP1复制是与PMD相关联的常见突变，因此具有鼠Plp1基因的复制的小鼠模型被用于证明本文所述的RNAi寡核苷酸的功效。靶向鼠Plp1的RNAi寡核苷酸不仅降低了Plp1 mRNA和蛋白质的水平，而且还逆转了在复制模型中诱导的星形胶质细胞增生和髓鞘形成障碍。值得注意的是，由于PLP1对于正常的脑功能是必需的，因此证实RNAi寡核苷酸不完全消除Plp1表达，而是降低与野生型小鼠中表达的那些相似的Plp1水平。不希望受理论的束缚，这些结果指示本文所述的RNAi寡核苷酸不仅可用于治疗与PLP1表达相关联的疾病、病症或病状，而且还可用于维持足够水平的PLP1表达以支持有益的脑功能并避免不希望的副作用。
[0010]还已经证实靶向PLP1的RNAi寡核苷酸减少神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达，所述神经胶质纤维酸性蛋白是一种星形胶质细胞增生的标志物。当星形胶质细胞对CNS中的损伤和疾病作出响应时，就发生星形胶质细胞增生。如本文所述,GFAP表达的增加在具有Plp1的复制的小鼠模型中发生，指示CNS中的损伤。如本文所证实，靶向PLP1的RNAi寡核苷酸不仅减少该小鼠模型中的PLP1表达，而且还减少GFAP。不希望受理论的束缚，在已经接受或正在接受用本公开的RNAi寡核苷酸治疗的受试者中监测GFAP的表达水平可用于监测治疗结果、监测与PLP1表达相关联的疾病、病状或病症的进展和/或用于确定对用本公开的RNAi寡核苷酸治疗的响应性。
[0011]因此，在一些方面，本公开提供了一种用于减少PLP1表达的RNAi寡核苷酸，所述寡核苷酸包括有义链和反义链，其中所述有义链和反义链形成双链体区域，其中所述反义链包括与SEQ ID NO:171
‑
188中任一者的PLP1mRNA靶序列的互补性区域，并且其中所述互补性区域的长度为至少15个连续核苷酸。
[0012]在一些方面，本公开提供了一种用于减少PLP1表达的RNAi寡核苷酸，所述寡核苷酸包括有义链和反义链，其中所述有义链和所述反义链形成双链体区域，其中所述反义链包括与SEQ ID NO:212
‑
231中任一者的PLP1 mRNA靶序列的互补性区域，并且其中所述互补性区域的长度为至少15个连续核苷酸。
[0013]在前述或相关方面中的任一个中，有义链的长度为15至50个核苷酸。在一些实施例中，有义链的长度为18至36个核苷酸。
[0014]在前述或相关方面中的任一个中，反义链的长度本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于减少PLP1表达的RNAi寡核苷酸，所述寡核苷酸包括有义链和反义链，其中所述有义链和所述反义链形成双链体区域，其中所述反义链包括与SEQ ID NO:171
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188和212
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231中任一者的PLP1 mRNA靶序列的互补性区域，并且其中所述互补性区域长度为至少15个连续核苷酸。2.根据权利要求1所述的RNAi寡核苷酸，其中(i)所述有义链长度为15至50个核苷酸或长度为18至36个核苷酸，和/或(ii)所述反义链长度为15至30个核苷酸或长度为22个核苷酸。3.根据权利要求1至2中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中所述反义链和所述有义链形成长度为至少19个核苷酸、任选地长度为至少20个核苷酸的双链体区域。4.根据权利要求1至3中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中所述互补性区域长度为至少19个连续核苷酸。5.根据权利要求1至4中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中所述互补性区域(i)与所述PLP1 mRNA靶序列的长度相差不超过3个核苷酸，或(ii)与所述PLP1 mRNA靶序列完全互补。6.根据权利要求1至5中任一项所述的寡核苷酸，其中所述有义链的3'端包括被阐述为S1
‑
L
‑
S2的茎
‑
环，其中S1与S2互补，并且其中L在S1和S2之间形成长度为3
‑
5个核苷酸的环，并且任选地其中L是三环或四环。7.根据权利要求6所述的RNAi寡核苷酸，其中所述四环包括序列5'
‑
GAAA
‑
3'。8.根据6至7中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中L的所述核苷酸中的一个或多个包括2'
‑
O
‑
甲基修饰，任选地，其中L的每个核苷酸包括2'
‑
O
‑
甲基修饰。9.根据6至8中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中所述S1和S2为长度1
‑
10个核苷酸并且具有相同的长度，任选地其中S1和S2各自为长度6个核苷酸。10.根据权利要求6至9中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中所述茎
‑
环包括序列5'
‑
GCAGCCGAAAGGCUGC
‑
3'(SEQ ID NO:190)。11.根据权利要求1至10中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中所述反义链包括长度为一个或多个核苷酸的3'突出端序列，任选地其中所述3'突出端序列长度为2个核苷酸，并且进一步任选地其中所述3'突出端序列为GG。12.根据权利要求1至11中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括至少一个经修饰的核苷酸。13.根据权利要求12所述的RNAi寡核苷酸，其中所述经修饰的核苷酸包括2'
‑
修饰，任选地其中所述2'
‑
修饰是选自2'
‑
氨基乙基、2'
‑
氟、2'
‑
O
‑
甲基、2'
‑
O
‑
甲氧基乙基和2'
‑
脱氧
‑
2'
‑
氟
‑
β
‑
d
‑
阿拉伯糖核酸的修饰。14.根据权利要求12至13中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中包括所述寡核苷酸的所有核苷酸都是经修饰的，任选地其中所述修饰是选自2'
‑
氟和2'
‑
O
‑
甲基的2'
‑
修饰。15.根据权利要求13至14中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中(i)所述有义链的约10
‑
15％、10％、11％、12％、13％、14％或15％的所述核苷酸包括2'
‑
氟修饰；(ii)所述反义链的约25
‑
35％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％的所述核苷酸包括2'
‑
氟修饰；和/或(iii)所述寡核苷酸的约15
‑
25％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％或25％的所述核苷酸包括2'
‑
氟修饰。16.根据权利要求13至14中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中(i)所述有义链包括36个
核苷酸，其中位置从5'至3'编号为1
‑
36，其中位置8
‑
11包括2'
‑
氟修饰；和/或(ii)所述反义链包括22个核苷酸，其中位置从5'至3'编号为1
‑
22，并且其中位置2、3、4、5、7、10和14包括2'
‑
氟修饰。17.根据权利要求15至16中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中所述寡核苷酸的其余核苷酸包括2'
‑
O
‑
甲基修饰。18.根据权利要求1至17中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包括至少一个修饰的核苷酸间键，任选地其中所述至少一个修饰的核苷酸间键是硫代磷酸酯键。19.根据权利要求1至18中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中所述反义链的所述5'核苷酸的糖的4'
‑
碳包括磷酸酯类似物，任选地其中所述磷酸酯类似物是氧基甲基膦酸酯、乙烯基膦酸酯或丙二酰基膦酸酯，并且进一步任选地其中所述磷酸酯类似物是包括4'
‑
氧基甲基膦酸酯的4'
‑
磷酸酯类似物。20.根据权利要求1至19中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中所述寡核苷酸的至少一个核苷酸与一种或多种靶向配体缀合，其中所述一种或多种靶向配体选自碳水化合物、氨基糖、胆固醇、多肽、脂质和N
‑
乙酰半乳糖胺(GalNAc)部分。21.根据权利要求20所述的RNAi寡核苷酸，其中所述GalNac部分是单价GalNAc部分、二价GalNAc部分、三价GalNAc部分或四价GalNAc部分。22.根据权利要求1至21中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中(i)所述有义链包括选自SEQ ID NO:76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108和110中任一者的核苷酸序列；和/或(ii)所述反义链包括选自SEQ ID NO:77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109和111中任一者的核苷酸序列；或(iii)所述有义链和反义链包括选自由以下组成的群组的核苷酸序列：(a)分别为SEQ ID NO:76和77；(b)分别为SEQ ID NO:78和79；(c)分别为SEQ ID NO:80和81；(d)分别为SEQ ID NO:82和83；(e)分别为SEQ ID NO:84和85；(f)分别为SEQ ID NO:86和87；(g)分别为SEQ ID NO:88和89；(h)分别为SEQ ID NO:90和91；(i)分别为SEQ ID NO:92和93；(j)分别为SEQ ID NO:94和95；(k)分别为SEQ ID NO:96和97；(l)分别为SEQ ID NO:98和99；(m)分别为SEQ ID NO:100和101；(n)分别为SEQ ID NO:102和103；(o)分别为SEQ ID NO:104和105；(p)分别为SEQ ID NO:106和107；(q)分别为SEQ ID NO:108和109；以及
(r)分别为SEQ ID NO:110和111。23.根据权利要求1至21中任一项所述的RNAi寡核苷酸，其中：(i)所述有义链包括选自SEQ ID NO:112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146和191中任一者的核苷酸序列；和/或(ii)所述反义链包括选自SEQ ID NO:113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141...

【专利技术属性】
技术研发人员：B，
申请(专利权)人：戴瑟纳制药公司，
类型：发明
国别省市：