用于敲除拟南芥ROS1基因的向导RNA、方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种用于敲除拟南芥ROS1基因的向导RNA、方法及应用，所述向导RNA包括如SEQ ID No:1和SEQ ID No:2的一对序列。所述方法采用如上述所述的向导RNA。本发明专利技术的技术方案能够有效敲除ROS1基因的gRNA序列，并基于此获得不同拟南芥品种的等位突变体，进一步达到鉴定成本低，时间短，且能够针对性获得不同拟南芥品种ROS1基因的相同位点突变体。南芥品种ROS1基因的相同位点突变体。南芥品种ROS1基因的相同位点突变体。

【技术实现步骤摘要】
用于敲除拟南芥ROS1基因的向导RNA、方法及应用


[0001]本专利技术涉及植物分子遗传领域，具体地，涉及用于敲除拟南芥ROS1基因的向导RNA、方法及应用。

技术介绍

[0002]ROS1是参与拟南芥DNA去甲基化的重要基因，它的突变体材料经常被用做对照材料应用于相关的研究。然而目前获得的ros1突变体的方法有两种：一种是通过正向遗传筛选到的突变体，这类突变体往往是点突变，在验证的过程中涉及到酶切过程或测序过程，不仅时间长而且成本高；另一种是能够购买到的T
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DNA插入材料，这样的材料品种单一，很难获得多种拟南芥品种下ROS1基因相同位点突变。
[0003]基于此，采用现有技术获得的ROS1突变体多为点突变或为采用T
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DNA插入材料的方式获得，存在鉴定成本高、时间长，以及很难在多种品种下获得相同位点的突变体等缺陷。

技术实现思路

[0004]针对上述现有技术，本专利技术的目的在于克服现有技术中存在的问题，从而提供一对能够有效敲除ROS1基因的gRNA序列，并基于此获得不同拟南芥品本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于敲除拟南芥ROS1基因的向导RNA，其特征在于，所述向导RNA包括如SEQ ID No:1和SEQ ID No:2的一对序列。2.一种敲除拟南芥ROS1基因的方法，其特征在于，采用如权利要求1所述的向导RNA。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法具体包括：S100、根据向导RNA设计引物对；S200、以质粒pCBC
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DT1T2作为模板，采用步骤S100所述的引物对进行PCR扩增、纯化、酶切后，与载体连接后获得重组质粒；S300、采用重组质粒转化感受态细胞后筛选、验证，获得用于敲除拟南芥ROS1基因的表达载体；S400、将步骤S300中获得的表达载体转化农杆菌并浸花后，筛选得到突变体。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S100中，所述引物对包括与SEQ ID No:1所示的序列相对应的第一引物对，以及与SEQ ID No:2所述的序列相对应的第二引...

【专利技术属性】
技术研发人员：苗伟，戴杰，张力，张阿琴，胡嘉诚，黄锦钰，
申请(专利权)人：江苏农牧科技职业学院，
类型：发明
国别省市：