一种特异性靶向切割及高效灭活结核分枝杆菌的药物及制备方法和应用技术

本发明专利技术属于异性灭活结核分枝杆菌技术领域，具体涉及一种特异性靶向切割及高效灭活结核分枝杆菌的药物及制备方法和应用。选用HigA为靶点设计特异性脱氧核酶并将脱氧核酶与小肽进行偶联，并采用锁核酸来增强脱氧核酶的效能，提供靶向治疗结核的小肽偶联的、特异切割结核杆菌HigA mRNA的锁核酸脱氧核酶及其应用，避免了耐药菌的产生，实现对体内结核分枝杆菌及其耐药菌的清除，药物化学性质稳定，用量少，治疗周期短，该药物不仅能够杀伤活动性结核，还能够杀伤耐药结核且药物本身补诱导结核分枝杆菌发生耐药，在对抗结核病方面有着重大意义。大意义。大意义。

【技术实现步骤摘要】
一种特异性靶向切割及高效灭活结核分枝杆菌的药物及制备方法和应用


[0001]本专利技术属于异性灭活结核分枝杆菌
，具体涉及一种特异性靶向切割及高效灭活结核分枝杆菌的药物及制备方法和应用。

技术介绍

[0002]结核病是单一病原体致死率最高的疾病，每年全球大约有200万人死于结核病，有接近1000万新发病例。目前我国结核病年发病人数约为130万，因结核病死亡人数每年达13万，超过其它传染病死亡人数的总和。在各种原因导致的(如艾滋病、衰老、肿瘤等)免疫低下人群中形势更为严峻，据统计在艾滋病患者中每年有50万人死于继发的结核病。我国是结核病高流行区，总数居全球第二，是我国传染病中的第一位死因。更值得关注的是全世界有超过三分之一的人口处于潜伏性结核感染(LTBI)状态，随时都有可能活化为活动性结核。目前结核病治疗方案有：1.化学疗法2.免疫疗法3.基因疗法。
[0003]其中，1.化学疗法存在的问题：(1)对休眠的结核分枝杆菌无效：全球有20亿人存在结核杆菌的潜伏感染，通常一部分活菌会在宿主体内持续终生并随时可能活化增殖，对休眠的结核分枝本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性靶向切割及高效灭活结核分枝杆菌的锁核酸脱氧核酶，其特征是：所述锁核酸脱氧核酶对应的编码序列为如下3种的任意一种，名称和序列分别如下所示：DR1：5
’‑
GGCGAGGTCGTCAGGCTAGCTACAACGACCCAAAGGG
‑3’
，其为SEQ ID NO:1序列；DR2：5
’‑
GAAGCTGGGATCAGGCTAGCTACAACGAGCCGCAATC
‑3’
，其为SEQ ID NO:2序列；DR3：5
’‑
CGCAGCGCAATCAGGCTAGCTACAACGAGCGCATCGA
‑3’
，其为SEQ ID NO:3序列。2.根据权利要求1所述的特异性靶向切割及高效灭活结核分枝杆菌的锁核酸脱氧核酶，其特征在于：所述锁核酸脱氧核酶的活性中心域为GGCTAGCTACAACGA。3.根据权利要求1所述的特异性靶向切割及高效灭活结核分枝杆菌的锁核酸脱氧核酶，其特征在于：所述DR1编码序列5
’
端的第5,17,22,26,32位碱基上修饰有锁核酸；所述DR2编码序列5
’
端的第3,11,18,24,32位碱基上修饰有锁核酸；所述DR3编码序列5
’
端的第5,10,17,21,33位碱基上修饰有锁核酸。4.一种特异性靶向切割及高效灭活结核分枝杆菌的药物，其特征在于：包含权利要求1
‑
3任一项所述的锁核酸脱氧核酶，所述药物为锁核酸脱氧核酶与小肽偶联而成。5.根据权利要求4所述的特异性靶向切割及高效灭活结核分枝杆菌的药物，其特征在于：所述药物靶向结核分枝杆菌HigA mRNA。6.根据权利要求4
‑
5任一项所述的特异性靶向切割及高效灭活结核分枝杆菌的药物的制备方法，其特征在于：(1)以锁核酸作为脱氧核酶可替代部分的合成原料，以10
‑
23脱氧核酶结构为基本框架，提取H37Rv的DNA作为模版，设计HigA和HigB的上下游引物进行PCR扩增，用计算机软件模拟HigA
‑
mRNA的二级结构，根据模拟的结构图选择适合的待切割靶点并设计针对相应靶点的特异性锁核酸脱氧核酶；(2)按10
‑
23脱氧核酶的切割模式针对各候选靶位设计一系列不同底物结合臂长度的相应10
‑
23锁核酸脱氧核酶序列，计算各10
‑
23锁核酸脱氧核酶的底物结合臂与相应候选靶点的结合自由能ΔG，选择结合自由能在
‑
20kcal
·
mol(
‑
l)<ΔG<
‑
25kcal
·
mol(
‑
l)范围内的底物结合臂作为针对各候选靶点的10
‑
23锁核酸脱氧核酶的最适底物结合臂；(3)计算各10
‑
23锁核酸脱氧核酶自身序列杂交的杂交自由能，从中选择出自身杂交能力较弱的锁核酸脱氧核酶；(4)将筛选...

【专利技术属性】
技术研发人员：伊正君，付玉荣，郑皖怿，姜吉亮，乔晋娟，孟祥英，葛安山，
申请(专利权)人：潍坊医学院，
类型：发明
国别省市：