本发明专利技术公开了一种酿酒酵母（Saccharomyces?cerevisiae）及其应用，该酿酒酵母的保藏编号为CCTCC?No：M2012215，经发酵培养后谷胱甘肽产量高，有效解决微生物中酵母合成产率低及谷胱甘肽干酵母中谷胱甘肽含量低的问题，拓宽富含谷胱甘肽干酵母的应用范围，提高了产品附加价值。
【技术实现步骤摘要】
一种酿酒酵母及其应用
本专利技术属于微生物
，具体而言，涉及一株合成谷胱甘肽能力较强的酿酒酵母 i^acclmromyces cerevisiae)及其应用。
技术介绍
谷胱甘肽，gp Y-L-谷氨酰-L-半胱氨酰甘氨酸，是微生物细胞内最丰富的非蛋白巯基化合物，由L-谷氨酸、L-半胱氨酸和甘氨酸经肽键缩合而成，同时具有Y -谷氨酰基和巯基。GSH广泛存在于自然界的生物体中。在生物体内，GSH有着多种重要的生理功能， 主要为三个方面，如抗氧化、增强免疫和解毒。第一，对于维持生物体内适宜的氧化还原环境，GSH起着至关重要的作用。第二，增强免疫，在高等真核细胞中，GSH可以迅速增强机体的免疫力。第三，作为解毒剂，GSH长被用于与其它物质组合构成治疗或保健药物。近年来， 日本科学家发现GSH具有抑制艾滋病病毒的功效。谷胱甘肽在医学、食品、化妆品等领域具有广泛的市场前景。谷胱甘肽的生产方法主 要有萃取法、化学合成法、酶法和发酵法。其中发酵法是最具潜力的方法。日本在20世纪80年代已经实现了 GSH的工业化生产，我国发酵法生产谷胱甘肽起步较晚，目前仍停留在实验室试验阶段，GSH发酵过程中发酵水平不高以及下游分离纯化相关技术未取得实质性突破，使得谷胱甘肽的工业化生产在我国一直未能实现。由于谷胱甘肽在水溶液中极易被氧化，因此微生物细胞合成的谷胱甘肽一般存在于细胞中。酵母是谷胱甘肽合成最具潜力的微生物，且酵母富含蛋白质，在食品和医药工业中具有广泛的用途。生产谷胱甘肽含量高的酵母既能作为食品和医药工业的原料，同时也可以提供丰富的功能性成分谷胱甘肽，对改善人体机能具有非常重要的作用。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种合成谷胱甘肽能力较强的菌株和富含谷胱甘肽的干酵母产品，有效解决微生物中酵母合成产率低及谷胱甘肽干酵母中谷胱甘肽含量低的问题，拓宽富含谷胱甘肽干酵母的应用范围，提高产品附加价值。为了实现本专利技术，专利技术人通过大量试验反复进行菌种选育研究，并终于获得了一株合成谷胱甘肽能力较强的酿酒酵母iSaccharomyces cerevisiae)CCCG,已于2012年6月 11日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO.M2012215。形态学特征菌落白色，无光泽，扁平，呈草帽形，表面及边缘粗糙，边缘不整齐，湿润粘腻，不容易挑起；正反面，边缘与中央部位颜色一致。生理特性不仅可利用葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、糖蜜等碳源，还可利用可溶性淀粉作为碳源；具有硫酸锌抗性标记。代谢特性代谢过程能积累产生谷胱甘肽本专利技术的涉及的高产谷胱甘肽的酿酒酵母iSaccharomyces cerevisiae ) CCTCC No. M2012215是按照如下方法获得的亲本为亲株A :酿酒酵母cerevisiae CICC1251,亲株B :热带假丝酵母Candida tropicalis CICC31709,实验室保藏菌株。原生质体的制备将待融合的亲株A和亲株B在斜面培养基上活化两次(斜面培养基葡萄糖20 g/L，蛋白胨20 g/L，酵母粉10 g/L，琼脂20 g/L，pH6. 0,0.1MPa灭菌15min)，活化后接入摇瓶培养基(摇瓶培养基葡萄糖20 g/L, (NH4) 2S045 g/L，KH2PO4 I g/L, NaCl O.1 g/L, MgSO4O. 5 g/L, CaCl2 0.1 g/L，酵母粉 0. 2 g/L，0.1MPa 灭菌 15min)培养至对数生长期，5000rpm下离心收集细胞，将细胞悬浮于I mL无菌脱壁预处理液(O. 05mo I/L EDTA溶液与O. 1% β-巯基乙醇混合，用O. lmol/L柠檬酸缓冲液配制(O. lmol/L柠檬酸4. 7ml,O. lmol/L柠檬酸钠15. 3ml混合，pH5. 8),0. 22 μ m微孔滤膜过滤除菌，)中，使细胞数为IO7个/mL，30°C振荡处理15 min，5000rpm下离心收集细胞；用1% (W/V)蜗牛酶加1% (W/V)纤维素酶(1%蜗牛酶和1%纤维素酶的配制方法用O. lmol/L柠檬酸缓冲液加0. 7mol/L KCl的高渗溶液配制，然后通过0. 22 μ m微孔滤膜过滤除菌)复合酶酶解悬浮预处理过的细胞，30°C振荡处理40 60 min ;当原生质体形成率达到90%以上后，力口入 4 mL 无菌 Tris-HCl 高渗缓冲液(Tris-HCl 高渗缓冲液0. 05mol/L Tris_HCl，pH 7. 4 (50mL0.1 mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液与42mL 0.1 mol/L盐酸均匀混合后加水稀释至100 mL)，0.5mol/L鹿糖，0.05 mol/L CaCl2，然后通过0. 22 μ m微孔滤膜过滤除菌)停止酶解，将离心管上下倒置两次，摇匀后在转速3000 rpm离心5 min收集酶解后的细胞，将收集的细胞用2 mL无菌Tris-HCl高渗缓冲液悬浮，得亲株A、亲株B的原生质体。 原生质体融合上述方法制得的原生质体，以1:1的比例各取亲株A、亲株B的原生质体液0.1 mL混合后加入0.8 mL无菌Tris-HCl高渗缓冲液，离心去上清液；然后，加入2mL促融剂溶液(促融剂配置方法PEG6000(聚乙二醇)30 g，溶于100 mL Tris-HCl高渗缓冲液，0. 22 μπι微孔滤膜过滤除菌)，轻摇混合，30°C静置保温I h ；3000 rpm离心，收集沉淀，用液体高渗基本培养基(液体高渗基本培养基(g/L):葡萄糖20，(NH4)2SO4 5，KH2PO41，NaCl 0.1 , MgSO4 0. 5, CaCl2 0.1,酵母膏 0.2，蔗糖 170，0.1MPa 灭菌 15min)洗涤两次，将沉淀再悬于液体高渗基本培养基中；取0.1 mL液体高渗基本培养基菌悬液于4mL高渗基础培养基软琼脂(上层)(高渗基础培养基软琼脂(g/L):葡萄糖20，(NH4)2SO4 5，KH2PO4 1，NaCl 0.1 , MgSO4 0. 5，CaCl2 0.1，酵母膏 0.2，蔗糖 170，琼脂 10 0.1MPa灭菌15min)中，摇匀迅速倒入底层为高渗基础固体培养基(高渗基础固体培养基(g/L):葡萄糖 20，(NH4)2SO4 5，KH2PO4 1，NaCl 0.1 , MgSO4 0. 5，CaCl2 0.1，酵母膏 0. 2，蔗糖170，琼脂20 0.1MPa灭菌15min)的平板上，30°C培养4 5天。挑出平板上的单菌落，接入基础固体培养基(基础固体培养基(g/L):葡萄糖20，(NH4)2SO4 5，KH2PO4 1，NaCl0.1 , MgSO4 0. 5，CaCl2 0. 1，酵母膏0. 2，琼脂20 0.1MPa灭菌15min)的斜面试管，保藏备用。融合子的筛选将上述保藏菌株接入到在淀粉选择平板(淀粉选择平板培养基淀粉 20，(NH4)2SO4 5，KH2PO4 1，NaCl 0.1 , MgSO4 0. 5，CaCl2 0.1，酵母膏 0.2，琼月旨20 0.1MPa灭菌15min)上，经过两次淀粉选择平板的筛选，得到融合较好的菌株R2和R7(实验室编号，下同)。通过本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种酿酒酵母（Saccharomyces?cerevisiae）CCCG，其特征在于，它的保藏编号为CCTCC?No.M2012215。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡俊，王常高，林建国，胡瑛，
申请(专利权)人：湖北工业大学，
类型：发明
国别省市：
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