一种提高酿酒酵母异戊二烯合成能力的方法技术

本发明专利技术提供一种提高酿酒酵母合成异戊二烯能力的方法，通过酶切连接将来源于银白杨的IspS基因序列SEQ ID NO:1克隆到质粒上，转化到酿酒酵母体内，以实现在酿酒酵母中合成异戊二烯；通过GAL4过表达增强异戊二烯合成酶基因(IspS)的转录水平,并通过定向进化提高异戊二烯合成酶的催化活性。将两者结合起来，使异戊二烯的产量提高到原来的8.2倍。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种提高酿酒酵母中异戊二烯合成能力的方法，属于生物工程领域。
技术介绍
异戊二烯是合成橡胶的重要单体，其年消耗量超过100万吨。自然界有许多植物能释放异戊二烯。异戊二烯以气体形式释放到大气中，不易收集，从而难以用于工业生产。目前异戊二烯的主要来源是C5馏分。由于石油资源不可再生和石油化工带来的环境污染问题日趋严重，以微生物作为细胞工厂合成异戊二烯已经变成一个重要的研究课题。大多数微生物都具有2-甲基赤藓醇磷酸(MEP)或甲羟戊酸(MVA)途径，可以合成异戊二烯的前体物质二甲基烯丙基焦磷酸(DMAPP)。将植物来源的异戊二烯合成基因IspS转入这些微生物中，就可以使其具备合成异戊二烯的能力。目前对生物合成异戊二烯主的研究要集中在对上游MEP和MVA途径的调控，而对于下游异戊二烯合成途径的研究鲜有报道。异戊二烯合成酶作为催化异戊二烯合成的酶，其在微生物体内的表达量和催化活性都比较低。下游异戊二烯合成途径强度太弱已经成为限制异戊二烯合成能力提高的瓶颈问题。
技术实现思路
本专利技术主要目的是增强酿酒酵母合成异戊二烯的能力。一种提高酿酒酵母合成异戊二烯能力的方法，通过酶切连接将来本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高酿酒酵母合成异戊二烯能力的方法，其特征在于：通过酶切连接将来源于银白杨的IspS基因序列SEQ ID NO:1克隆到质粒上，转化到酿酒酵母体内，以实现在酿酒酵母中合成异戊二烯；并通过GAL4过表达增强IspS转录水平，以实现提高酿酒酵母合成异戊二烯能力。

【技术特征摘要】
1.一种提高酿酒酵母合成异戊二烯能力的方法，其特征在于：通过酶切连接将来源于银白杨的IspS基因序列SEQIDNO:1克隆到质粒上，转化到酿酒酵母体内，以实现在酿酒酵母中合成异戊二烯；并通过GAL4过表达增强IspS转录水平，以实现提高酿酒酵母合成异戊二烯能力。2.根据权利要求1所述的提高酿酒酵母合成异戊二烯能力的方法，其特征在于，所述IspS由SEQIDNO.1中的基因编码，并且所述IspS氨基酸序列是序列表中SEQIDNO.2的氨基酸序列。3.根据权利要求2所述的提高酿酒酵母合成异戊二烯能力的方法，其特征在于，所述质粒为p416xwp01质粒，在酿酒酵母中以附着型低拷贝质粒存在，筛选标记为URA3。4.根据权利要求1所述的提高酿酒酵母合成异戊二烯能力的方法，其特征在于，通过DNA同源重组，将含有GAL4表达盒的线性化质粒整合到酿酒酵母基因组上GAL1/7/10区域，敲除GAL1/7/10基因，同时增强GAL4的表达，以实现增强IspS转录水平。5.根据权利要求4所述的提高酿酒酵母合成异戊二烯能力的方法，其特征在于，所述含有GAL4表达盒的线性化质粒为含有KanMX筛选标记、GAL1/7/10同源臂序列、多克隆位点和GAL4表达盒。6.根据权利要求4所述的提高酿酒酵母合...

【专利技术属性】
技术研发人员：于洪巍，叶丽丹，王凡，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33