一种家蚕天然免疫蛋白Hemolin及其纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种家蚕天然免疫蛋白Hemolin及其纯化方法，属于蛋白纯化技术领域。本发明专利技术以蚕蛹作为原料，通过不同的离心方法，超滤，得到含有免疫蛋白的组分，将含有目的蛋白的上清溶液然经过AKTAexplorer10蛋白纯化系统中简单的层析技术分离纯化得到目的蛋白Hemolin。本发明专利技术主要是利用了Superdex200和Superdex75凝胶层析，这为天然免疫蛋白的纯化提出了一种全新的解决方法，具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及,属于蛋白质

技术介绍
Hemolin作为昆虫所特有的一种防御蛋白，在研究昆虫的免疫机制中有重要的意义。目前对其结构和功能的研究都取得了一定的成果，但是对其在体外的功能研究较少，所以本实验通过简单的纯化得到较纯的Hemolin,进一步研究该蛋白的结构和功能奠定基础, 也可以在此基础上对它的结构做更深入的探索。因为基因工程产品的组分复杂、对产品的纯度要求较高且蛋白在纯化过程中存在聚集变性的趋势，所以它的制备和纯化比一般产品要困难的多。虽然人们普遍使用制备型 HPLC进行基因工程产物的最后一步纯化，但由于HPLC具有对软硬件的要求较高，前期投入大，纯化量有限，价格昂贵，分析生物大分子和无机离子困难，流动相消耗大且有毒性的居多等缺点。而Superdex 75蛋白纯化系统具有纯化量大、流速快，负载量较大，层析条件易控制，非特异性吸附小等优点。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的是提供， 该方法以家蚕杆状病毒感染的蚕蛹为原料，通过多种离心方法得到含有天然免疫蛋白的溶液；将母液进行活性测定后，将活性高的母液脱糖，脱糖溶液与母液按10:1比例通过宏吸的方法过300K膜包本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种家蚕天然免疫蛋白Hemolin，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种家蚕天然免疫蛋白Hemolin,其氨基酸序列如SEQ ID NO. I所示。2.—种如权利要求I所述的家蚕天然免疫蛋白Hemolin的纯化方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤 (I)家蚕免疫蛋白母液的制备； (2)家蚕天然免疫蛋白的分离纯化。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(I)中所述家蚕免疫蛋白母液的制备具体包括 a.保存于_20°C的蚕蛹与4°C预冷的灭菌ddH20以1:3的重量百分比混合，在冰上匀衆2 min,将匀楽:液置于冰上停留5 min,重复9次； b.于15000rpm,4°C离心Ih,弃去上清,用水重悬沉淀,再于15000 rpm, 4°C离心Ih,如此重复5次，最后一次用4层纱布过滤； c.过滤后的上清液取200mL与水按I:I的体积混合,用O. 22 μ m膜包过滤,重复10次，上清溶液恢复到200mL的体积； d.步骤c所得上清液于50000rpm,10°C离心40min后，出现的黑团用超滤液重悬进行区带离心；取样品300ml进行蔗糖密度梯度离心3h; e.将步骤d离心3h后所得的上清液用质量体积浓度为60%蔗糖溶液下样，按35mL/管收集，并在每管中取3mL做比活測定。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤d中所述样品的蔗糖密度梯度离心为铺制pH 7. 4的磷酸盐缓冲液200ml，样品300ml，30%蔗糖400ml，55%蔗糖充满，22000rpm密度梯度离心3h。5.如权利要求3或4所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张耀洲，杜瑶瑶，刘玲玲，陈剑清，舒特俊，
申请(专利权)人：天津耀宇生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：