血小板聚集抑制剂组合物制造技术

本发明专利技术涉及血小板聚集抑制剂组合物。具体地，本发明专利技术提供药物组合物，包含至少一种下列(a)-(d)的多肽作为活性组分：(a)包含SEQ?ID?NO:1的氨基酸序列的多肽；(b)包含在上述(a)的氨基酸序列中含一个或多个氨基酸缺失、插入、取代或添加的氨基酸序列并具有血小板聚集抑制活性和/或血小板粘附抑制活性的多肽；(c)包含SEQ?ID?NO:3的氨基酸序列的多肽；以及(d)包含在上述(c)的氨基酸序列中含一个或多个氨基酸缺失、插入、取代或添加的氨基酸序列并具有血小板聚集抑制活性和/或血小板粘附抑制活性的多肽。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及具有血小板聚集抑制活性和/或血小板粘附抑制活性的多肽，或药物组合物，例如，包含表达产物(重组多肽)作为活性组分的血小板聚集抑制组合物，所述表达产物由编码该多肽的多核苷酸表达。本专利技术进一步涉及对胶原蛋白具有结合能力的多肽，或包含该多肽作为活性组分的药物组合物。本专利技术还涉及筛选在药物化合物中作为活性组分的化合物(例如，激动剂)的方法，所述化合物促进血小板聚集抑制活性。进而，本专利技术涉及具有血小板聚集抑制活性的新 型多肽以及编码该多肽的多核苷酸。
技术介绍
血小板聚集是由血管内皮细胞的损伤和其他多种因素造成的。当冠状导管、脑导管、或外周导管被血小板血栓堵塞时，分别导致心肌梗塞，脑梗塞或慢性动脉阻塞。这种血小板活化(刺激聚集)之后血栓病的例子包括动脉硬化，缺血性脑梗塞，包括心肌梗塞和心绞痛的缺血性心脏病，慢性动脉阻塞和静脉血栓。具有抑制血小板聚集作用的药物用作带有上述各种疾病作为并发症的缺血性疾病的预防药，以及继高血压、肺高压、脑梗塞、肺梗塞和蛛网膜下腔出血之后的病理状况的预防药。此外，上述药物用于预防经皮腔内冠状动脉成型术(PTCA)和支架放置后的血栓形成，并还在通过将具有抑制血小板聚集作用的这样一种药物施加至支架上或包埋在支架本身中，以封装所述药物，从而用作支架放置后再狭窄的预防剂。同时，蚊子用其尖锐的口针刺进皮肤，所述口针在吸血时抵达外周血管，并频繁重复被称作探查的刺入和拔出行为，以找到外周血管。据信，蚊子同时分泌唾液，其中含有促进血管舒张使得容易探测到血管的物质。由于上述探查，外周血管通常受损，变成充血。一般而言，血管受损时，暴露出血管内皮下方组织中的胶原，二磷酸腺苷(ADP)从破损细胞释放，凝血因子活化形成凝血酶。凝血酶强烈活化血小板，诱导血小板附着、血小板聚集和颗粒释放，最终通过形成纤维蛋白使血液凝结，形成坚实的血栓(止血机制)。已经知道蚊子的唾液含有抑制这种止血机制的物质(参见非专利文献I)。蚊子的唾液腺蛋白，经最详细的研究是腺苷三磷酸双磷酸酶(apyrase)。该酶为血小板聚集抑制物质，第一次是在埃及斑蚊(Aedesaegypti)的唾液里得到鉴定。腺苷三磷酸双磷酸酶抑制血小板聚集，导致从受损血管内皮细胞、红血球和附着的血小板释放的ADP降解成AMP ( 一磷酸腺苷)，并显示抗止血作用。为了阐明除蚊子之外各种吸血性昆虫的吸血行为，似乎有必要分析它们唾液物质的功能。据预测众多唾液物质参与抑制血小板聚集，例如，已报道来自骚扰锥蝽(Triatomainfestans)的蛋白具有血小板聚集抑制活性(参见专利文献I和2)。在来自斯氏按蚊(Anopheles stephensi)的唾液腺的蛋白中，已鉴定出具有血液凝结抑制活性的蛋白，但还没有鉴定出具有血小板聚集抑制活性的蛋白(参见专利文献3)。此外，已经报道了来自斯氏按蚊唾液腺的cDNA文库克隆的33种新型蛋白，但该报道并未描述具有血小板聚集抑制活性的蛋白，并且它们中很多的功能尚未知晓(参见非专利文献2) ο本专利技术人先前报道了从斯氏按蚊唾液腺克隆的、具有富含GE(GlyGlu)序列的蛋白(AAPP)(参见非专利文献3)。该蛋白具有810个碱基的可读框(ORF)，并且是28. 5kDa的蛋白，据推导由269个氨基酸残基组成。其后发现该蛋白类似于非专利文献2公开的30kDa的抗原(GenBank检索号AY226454)，但在非专利文献2和3中对蛋白的作用和功能(活性)没有描述。 JP 2004-121091-A 公布 JP 2004-121086-A 公布 JP 2003-116573-A 公布 Riberio, J. M.，J. Exp. Biol. , 108，1-7 (1984))Valenzuela,J. G.等，“开发斯氏按蚊的唾液腺转录体和蛋白体(Exploring the salivary gland transcriptome and proteome ofthe Anophelesstephensi mosquito)，，，Insect Biochemistry Hiroyuki Watanabe 等，Medical Entomology andZoology 55Suppl.，pp41, 19(2004)
技术实现思路
本专利技术提供新型药物组合物，尤其是血小板聚集抑制剂和/或血小板粘附抑制剂。本专利技术进一步提供包含对胶原具有结合能力的蛋白作为活性组分的新型药物组合物。本专利技术还提供筛选物质诸如激动剂的方法，所述筛选方法确定该物质的血小板聚集抑制活性和/或血小板粘附抑制活性。与本专利技术人早先报道的对蛋白(AAPP)的研究分开的进一步广泛研究的结果是，本专利技术人在斯氏按蚊唾液腺中发现了具有血小板聚集抑制活性和/或血小板粘附抑制活性的新型蛋白，成功地分离并鉴定出编码该蛋白的DNA，并且最新发现该蛋白具有血小板聚集抑制活性和/或血小板粘附抑制活性。本专利技术提供特征为下列1-14项的专利技术。第I项.药物组合物，包含至少一种下列(a)-(d)的多肽作为活性组分(a)包含SEQ ID NO: I的氨基酸序列的多肽；(b)包含氨基酸序列并具有血小板聚集抑制活性和/或血小板粘附抑制活性的多肽，所述氨基酸序列在上述(a)的氨基酸序列中包含一个或多个氨基酸缺失、插入、取代或添加；(c)包含SEQ ID NO :3的氨基酸序列的多肽；以及(d)包含氨基酸序列并具有血小板聚集抑制活性和/或血小板粘附抑制活性的多肽，所述氨基酸序列在上述(C)的氨基酸序列中包含一个或多个氨基酸缺失、插入、取代或添加。第2项.包含表达产物作为活性组分的药物组合物，所述表达产物由至少一种下列(e)-(j)的多核苷酸表达(e)包含SEQ ID NO: 2的DNA序列或其互补序列的多核苷酸；(f)在严格条件下与上述(e)的多核苷酸杂交并能够表达具有血小板聚集抑制活性和/或血小板粘附抑制活性的多肽的多核苷酸； (g)包含与上述(e)的多核苷酸具有80%或更高的同源性的DNA序列并能够表达具有血小板聚集抑制活性和/或血小板粘附抑制活性的多肽的多核苷酸；(h)包含SEQ ID NO:4的DNA序列或其互补序列的多核苷酸；(i)在严格条件下与上述(h)的多核苷酸杂交并能够表达具有血小板聚集抑制活性和/或血小板粘附抑制活性的多肽的多核苷酸；和(j)包含与上述(h)的多核苷酸具有80%或更高的同源性的DNA序列并能够表达具有血小板聚集抑制活性和/或血小板粘附抑制活性的多肽的多核苷酸。第3项.根据第I或2项的药物组合物，其中所述血小板聚集抑制活性和/或血小板粘附抑制活性是对由胶原诱导的血小板聚集的抑制活性和/或对血小板粘附至胶原的抑制活性。第4项.根据第I或2项的药物组合物，其中所述药物组合物对胶原具有结合能力。第5项.血小板聚集抑制剂和/或血小板粘附抑制剂，其包含第I项所述的多肽，或第2项所述的由多核苷酸表达的表达产物。第6项.为血小板聚集抑制活性和/或血小板粘附抑制活性筛选激动剂的方法，其中第I项所述的多肽的血小板聚集抑制活性和/或血小板粘附抑制活性的水平在对象物质存在或缺乏下测量，并将对象物质存在下的测量值与对象物质缺乏下的测量值比较，以选出增强抑制作用的对象物质作为激动剂。第7项.为血小板聚本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的多肽，其由SEQ？ID？NO:3的氨基酸序列组成。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：吉田荣人，周藤俊树，
申请(专利权)人：学校法人自治医科大学，大塚制药株式会社，
类型：发明
国别省市：