免疫球蛋白纯化制造技术

本发明专利技术报导纯化免疫球蛋白的方法，其中该方法包括在免疫球蛋白单体形式不结合至阳离子交换材料的条件下，将包含免疫球蛋白单体形式和聚合形式的缓冲水溶液用于阳离子交换材料，并在与阳离子交换材料接触后从溶液回收免疫球蛋白单体形式。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫球蛋白纯化本专利技术属于多肽纯化领域。报导了通过将溶液中的免疫球蛋白从杂质，尤其是从免疫球蛋白聚合形式(aggregated form)分离而提供免疫球蛋白单 体形式的方法。背景纟支术蛋白质，尤其;UL疫球蛋白在当今的医学领域中起着重要作用。对于人的应用，每一种治疗蛋白质必须满足独特的标准。为确保生物药剂对人 的安全性，尤其要除去可导致严重伤害的核酸、病毒和宿主细胞蛋白质。 为满足这些质量管理规格标准，必须在生产过程之后进行一个或多个纯化 步骤。其中，纯度、生产量和产量在确定合适的纯化方法中起着重要作用。 已良好地建立不同的方法并且已将其广泛地用于蛋白质的纯化，例如使用^:生物蛋白质的亲和层析(例如A蛋白或G蛋白亲和层析)、离子交换 层析(例如，阳离子交换(磺丙基树脂或羧甲基树脂)、阴离子交换(氨乙基 树脂)和混合模式的离子交换)、亲硫吸附(例如使用P-巯基乙醇和其他SH 配体)、疏水性相互作用或芳香族化合物吸附层析(例如使用苯基-琼脂糖、 氮杂-arenophilic树脂或间-氨基苯基硼酸)、金属螯合亲和层析(例如使用 Ni(II)-和Cu(II)-亲和材料)、大小排阻层析和电泳方法(例如凝胶电脉、毛 细管电泳)(Vijayalakshmi， M.A.， Appl. Biochem. Biotech. 75 ( 1998) 93-102)。Necina, R.等人，Biotechnol. Bioeng. 60 (1998) 689-698报导了通过表 现为高电荷密度的离子交换介质从细胞培养物上清液直接捕获人单克隆抗 体。在WO 89/05157中，报导了通过直接对细胞培养基进行阳离子交换处 理以纯化产物免疫球蛋白的方法。Danielsson， A.等人，J. Immun. Meth. 115(1988)， 79-88描述了从小鼠腹水一步纯化单克隆IgG抗体的方法。Mhatre， R.等人，(J. Chrom. A 707 (1995) 225-231)探究了通过阳离子 交换层析和pH梯度洗脱对抗体Fab片段进行纯化。WO 94/00561报导了人单克隆抗猕猴抗体和产生该抗体的细胞系。在 WO 2004/024866中报导了通过离子交换层析纯化多肽的方法，其中使用 梯度洗涤从一种或多种污染物中分离出目的多肽。Schwarz， A.等人 (Laborpraxis 21 (1997) 62-66)报导了使用CM-HyperD-柱对单克隆抗体 的纯化。WO 2004/076485报导了使用A蛋白和离子交换层析进行抗体纯化的 方法。在EP 0 530 447中报导了通过组合三个层析步骤纯化IgG单克隆抗 体的方法。在US 4,983,722中报导了从抗体制品中除去A蛋白。重组单克隆抗体方法常使用阴离子交换层析来结合痕量级杂质和潜在 污染物(如DNA、宿主细胞蛋白质和病毒)，而容许蛋白质流通(Knudsen， H丄.，等人，J. Chrom. A 907 (2001) 145-154 )。WO 95/16037报导了通过A蛋白阳离子交换层析进行的从杂种杂交瘤 纯化抗EGF-R/抗-CD3双特异性单克隆抗体。在EP 1 084 136中报导了通 过使用离子交换层析从抗体多聚体分离其单体。US 5,429,746涉及使用疏 水作用层析组合层析来纯化抗体分子蛋白质。在US 4，604，208中报导了用来进行流体过滤，尤其是进行带电荷的微 粒污染的肠胃外液体或生物液体过滤的阴离子修饰微孔膜。WO 03/040166 报导了设计用于除去包含蛋白质的流体中的痕量杂质的膜和装置。在US 6,716,598中报导了回收多肽的方法。在US 2006/0194953中报法,专利技术简述本专利技术包含免疫球蛋白纯化领域的多个方面。 一方面是纯化免疫球蛋 白的方法，其包括在免疫球蛋白单体形式不结合至阳离子交换材料的M6下，将包含免疫球蛋白单体形式和聚合形式的緩冲水溶液用于阳离子交换 材料，并在与阳离子交换材料接触后从溶液回收免疫球蛋白单体形式的步 骤。在一个实施方案中，该步骤是以流通模式进行的层析步骤。在一个实施方案中，本专利技术的方法包括阳离子交换步骤之前或之后的 进一步的步骤，其是在免疫球蛋白不结合至阴离子交换材料的条件下，将 包含免疫球蛋白单体形式和/或聚合形式的緩冲水溶液用于阴离子交换材料，并从阴离子交换材料的流通液(flow-through)回收免疫球蛋白。在 一个实施方案中，该步骤是以流通模式进行的层析步骤。在另一实施方案中，本专利技术的方法包括阴离子交换步骤之前或之后的 进一步的步骤，其是在免疫球蛋白结合至亲和柱的条件下，将包含免疫球 蛋白单体形式和聚合形式的緩冲7jc溶液用于亲和柱，并从亲和柱回收免疫 球蛋白单体形式和聚合形式。在一个实施方案中，该步骤是以结合-和-洗脱模式进行的层析步骤。在本专利技术发法的另一实施方案中包括作为阳离子交换步骤的方法，其 包括在免疫球蛋白单体形式不结合至膜阳离子交换材料的条件下，将包含 免疫J求蛋白单体形式和聚合形式的緩冲水溶液用于膜阳离子交换材料，并 从膜阳离子交换材料的流通液回收免疫球蛋白单体形式的步骤。在一个实 施方案中，该阳离子交换材料M阳离子交换材料。在另一实施方案中， 膜阳离子交换材料是Mustang S、 Mustang C、 Sartobind S或 Sartobind C。在另一实施方案中，膜阳离子交换材料是用磺酸基团或羧 甲基基团修饰的基于聚醚砜的膜或基于再生纤维素的膜。在一个实施方案 中，溶液具有pH4-pH8的pH值，优选pH5-pH8。在另一实施方案中， 溶液具有1 mS/cm- 15 mS/cm的电导率，优选4.0 mS/cm-10.0 mS/cm的电 导率。另一实施方案包含通过获得浓缩溶液的方法从流通液回收免疫球蛋白 单体形式，该方法选自沉淀、盐析、超滤、渗滤、冷冻干燥、亲和层析或 溶剂体积减少。该回收优选通过超滤、冷冻干燥或溶剂体积减少。在另 一实施方案中，从膜阳离子交换材料的流通液获得该免疫球蛋白，且至少95%的免疫球蛋白为单体形式。在另一实施方案中，至少90%的免 谅拔恭A並汰报《X娃厶5卩B寇孚吞扭i h^ —水恋^.女金罢.键)+7lc^:液为包含磷酸或其盐、柠檬酸或其盐，或组氨酸或其盐的溶液。在另一实 施方案中，緩沖水溶液包含氯化钠或氯化钾。在另一实施方案中，层析步骤是柱层析或盒式层析(cassette chromatography )。 专利技术详述本专利技术包含纯化免疫球蛋白的方法，其包括在免疫球蛋白单体形式不 结合至阳离子交换材料的条件下，将包含免疫球蛋白单体形式和聚合形式 的緩冲水溶液用于阳离子交换材料，并在与阳离子材料接触后(即除去阳 离子交换材料后)从溶液或上清液回收免疫球蛋白单体形式的步骤。本申请中所用的术语离子交换材料或其语法同义词指携带共价结合带电荷的取代基的固定高分子量基质。为了获得总体电中性，将非共价结合的抗衡离子通过离子相互作用结合至带电荷的取代基。离子交换材料 具有将其非共价结合的抗衡离子与周围溶液的带相似电荷的结合配偶体或离子交换的能力。根据其可交换的抗衡离子的电荷，离子交换材料被称 为阳离子交换材料或阴离子交换材料。本文档来自技高网...

【技术保护点】
从包含免疫球蛋白单体形式和聚合形式的溶液获得免疫球蛋白单体形式的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：　ａ）在所述免疫球蛋白单体形式不结合至阳离子交换材料的条件下，将包含所述免疫球蛋白单体形式和聚合形式的缓冲水溶液用于所述阳离子交换材料， 并在与所述阳离子交换材料接触后从所述溶液回收所述免疫球蛋白单体形式。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】EP 2007-6-1 07010840.21.从包含免疫球蛋白单体形式和聚合形式的溶液获得免疫球蛋白单体形式的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤a)在所述免疫球蛋白单体形式不结合至阳离子交换材料的条件下，将包含所述免疫球蛋白单体形式和聚合形式的缓冲水溶液用于所述阳离子交换材料，并在与所述阳离子交换材料接触后从所述溶液回收所述免疫球蛋白单体形式。2. 权利要求1的方法，其特征在于所述步骤a)是以流通模式进行的 层析步骤，其包含在所述免疫球蛋白单体形式不结合至阳离子交换材料的 条件下，将包含所述免疫球蛋白单体形式和聚合形式的緩沖水溶液用于阳 离子交换材料，并在与所述阳离子交换材料接触后从所述溶液回收所述免 疫球蛋白单体形式。3. 权利要求1或2的方法，其特征在于所迷方法在步骤a )之前包括 以下步骤b) 在所述免疫球蛋白不结合至所述阴离子交换材料的条件下，将包 含所述免疫球蛋白单体形式和聚合形式的緩冲水溶液用于阴离子交换材 料，并在与所述阴离子交换材料接触后从所述溶液回收所述免疫球蛋白单 体形式和聚合形式。4. 权利要求3的方法，其特征在于所述步骤b)是以流通模式进行的层析步骤，其包含在所述免疫球蛋白不结合至所述阴离子交换材料的M下，将包含所述免疫球蛋白单体形式和聚合形式的緩沖水溶液用于阴离子交换材料，并在与所述阴离子交换材料接触后从所述溶液回收所述免疫球 蛋白单体形式和聚合形式。5. 权利要求1-4中任一项的方法，其特征在于所述方法在步骤a)之 后包括以下步骤c) 在所述免疫球蛋白不结合至所述阴离子交换材料的条件下，将包含 所述免疫球蛋白单体形式的緩冲水溶液用于阴离子交换材料，并在与所述阴离子交换材料接触后从所述溶液回收所述免疫球蛋白单体形式。6. 权利要求5的方法，其特征在于所述步骤c)是以流通模式进行的 层析步骤，其包含在所述免疫球蛋白不结合至所述阴离子交换材料的条件 下，将包含所述免疫球蛋白单体形式的緩冲水溶液用于阴离子交换材料， 并在与所述阴离子交换材料接触后从所述溶液回收所述免疫球蛋白单体形式。7. 权利要求1-6中任一项的方法，其特征在于所述方法在步骤a)之 前或步骤b)之前包括以下进一步的步骤d)在所述免疫球蛋白结合至所述亲和柱的条件下，将包含所述免疫 球蛋白单体形式和聚合形式的緩冲水溶液用于亲和柱...

【专利技术属性】
技术研发人员：R法尔肯施泰因，C吉赛尔，
申请(专利权)人：弗哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]