一种制备脂肪酶抑制剂奥利司他的方法技术

本发明专利技术属于分离工程技术领域，公开了一种制备脂肪酶抑制剂奥利司他的方法。该方法以发酵后的链霉菌菌丝体为原料，经过细胞破碎后恒温震荡提取制备后恒温震荡提取得到利普司他汀粗提物，利普司他汀粗提物氢化得到奥利司他粗品，经大孔树脂静止吸附、梯度洗脱和浓缩干燥的过程得到奥利司他纯品。本发明专利技术工艺简单，生产周期短，生产成本低，所用试剂不会对环境造成污染，得率较高，适合于工业化生产，具有一定的社会、经济效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分离工程
，涉及一种制备奥利司他的方法，具体涉及一种利用混合溶剂超声波法初提链霉菌菌丝体中的利普司他汀，将利普司他汀粗提物氢化后，利用大孔树脂提取得到奥利司他纯品的方法。
技术介绍
伴随着科技的飞速发展、物质生活条件的改善和丰富膳食的获得，肥胖症已逐渐成为当今世界一大多发性疾病。当人体进食热量多于消耗热量时，多余热量以脂肪的形式储存于体内，久而久之造成肥胖。无明显病因可寻者成为单纯性肥胖，具有明确病因者称之为继发性肥胖。随着人们物质生活水平的不断提高，单纯性肥胖正逐渐成为一种较为常见的病症。不仅影响美观而且可能诱发多种疾病如非胰岛素依赖型糖尿病、心脏病、脑血管疾病、呼吸系统疾病、某些癌症。因此对它的防治有着十分重要的临床意义。科学家们从未停止过对新的安全性较高的治疗肥胖药物的研究和开发。目前，应用的减肥药主要分为食欲抑制剂、产热剂、消化吸收阻滞剂、激素调控剂四大类。利普司他汀是Stretomyces toxytricini (毒三素链霉菌)的代谢产物，能选择性抑制肠道中的胰脂肪酶的活性，减少脂肪的水解和吸收；其四羟基衍生物奥利司他已被 Roche公司开发为减肥药物，于1997年得到美国FDA认证。目前已在全球100多个国家上市，拥有900多万的使用者，占全球2/3的减肥药市场份额。是目前上市的减肥药物中，唯一一个作为非中枢神经系统作用上市的治疗肥胖症的药物。奥利司他是一种安全的肥胖治疗药物，不仅可以减轻患者体重，而且可以改善血脂浓度、降低血压、改善血糖控制、降低患心血管等疾病的危险；该药物可降低吸收大约30%的脂肪，确保患者能减轻体重。人体对奥利司他的吸收率低于1%，因此不会引起全身性副作用；奥利司他抑制食物中脂肪的吸收，会导致油样便，服用者的轻重程度随饮食中脂肪含量的不同而不同，患者可通过调整饮食结构，减少脂肪的摄入量。正是由于奥利司他具有高效、安全、毒副作用小等优点，在中国上市的短时间内， 市场份额迅速上升，已成为减肥药品市场的一线产品，课题组通过大量的实验研究，确定了应用大孔树脂提取利普司他汀及制备奥利司他的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种利用超声波法初提链霉菌菌丝体中的利普司他汀，将利普司他汀粗提物氢化后，利用大孔树脂及混合洗脱溶剂提取得到奥利司他纯品的方法。为达到上述目的，可通过如下技术方案实现一种制备奥利司他的方法，包括以下几个步骤A、将链霉菌发酵后得到的利普司他汀产生菌菌丝体，清洗后悬浮在萃取剂中，控制pH值在4. (T9. O之间进行微生物细胞破碎，得到含有利普司他汀的混合物；B、将含有利普司他汀的混合物振荡提取，得到含有利普司他汀的提取液；C、将含有利普司他汀的提取液离心，收集上清液，将上清液减压浓缩至无液体，得到利普司他汀粗提品；D、将利普司他汀粗提品溶于溶剂中，在钯催化剂作用下进行催化加氢得到奥利司他，重结晶得到奥利司他粗品；E、用溶剂溶解奥利司他粗品，采用大孔树脂静止吸附疒5h，再用两种洗脱剂共同进行梯度洗脱，最后浓缩干燥后得到奥利司他纯品。本专利技术中的原料利普司他汀产生菌菌丝体，是利用链霉菌发酵生产利普司他汀发酵液中的菌丝体，本专利技术对链霉菌的种类并无具体要求，只要是能够发酵生产利普司他汀的链霉菌都可以应用。作为举例，本专利技术的实施例中采用购自美国农业研究菌种保藏中心的链霉菌 Stretomyces toxytricini NRRL 15443 的发酵液。步骤A中，采用超声仪进行微生物细胞破碎。其中的萃取剂为甲醇、乙醇、甲醇水溶液、乙醇水溶液、氯化钠与甲醇、氯化钠与乙醇或其水溶液，其中甲醇或乙醇体积浓度为109^100% (100%即纯溶剂)，氯化钠的浓度为 O. 01 O. lmol/L，优选 O. 03 O. 09mol/L。其中利普司他汀产生菌菌丝体与萃取剂的质量体积比为I :l(T200g/mL，优选I : 10 100g/mL,进一步优选 I :10 50g/mL。步骤A中菌丝体的清洗可直接采用去离子水。步骤B中，优选采用摇瓶柜进行振荡提取，调节摇瓶柜的温度1(T20°C (优选 15°C)，转速100 300rpm (优选180rpm)，提取时间为I. 0 4. Oh。步骤C中，提取液在1 10°C、3000 5000r/min下离心2 30min进行提取,优选的离心条件为4°C、4000r/min、10min。离心得到的上清液在15 251下减压浓缩，优选在201 下减压浓缩。步骤D中，用于溶解利普司他汀粗品的的溶剂选自甲醇或乙醇中的一种或两种。步骤E中，用于溶解奥利司他的溶剂选自甲醇或氯化钠的甲醇水溶液；所述氯化钠甲醇水溶液中氯化钠的浓度为0. 03、. 09mol/L,甲醇体积分数为30% 70%，优选 40% 60%。步骤E中，采用大孔树脂进行静止吸附，其中大孔树脂优选采用大孔树脂D101、安伯莱特XAD-2大孔树脂或安伯莱特XAD-16大孔树脂。大孔树脂在使用前可先按常规处理方法进行预处理。步骤E中溶解奥利司他的溶剂选自甲醇、氯化钠的甲醇水溶液；所述氯化钠甲醇水溶液中氯化钠的浓度为0. 03 0. 09mol/L,甲醇体积分数为30% 70%，优选40% 70%。步骤E中在用大孔树脂进行静止吸附前，先采用溶剂对大孔树脂进行平衡，该溶剂可采用甲醇、氯化钠的甲醇溶液、氯化钠的甲醇水溶液；所述氯化钠的甲醇溶液和氯化钠的甲醇水溶液中，氯化钠的浓度为0. 0Γ0. lmol/L，优选0. 03、. 09mol/L ;所述氯化钠的甲醇水溶液中甲醇的体积分数为30% 90%，优选40% 70%。步骤E中的两种洗脱剂选自①甲醇体积分数309Γ90%的甲醇水溶液、②氯化钠浓度为0. 0Γ0. lmol/L及甲醇体积分数为309Γ90%的氯化钠甲醇水溶液、③氯化钠浓度为0. 0Γ0. lmol/L及乙醇体积分数为309Γ90%的氯化钠乙醇水溶液、④乙醇体积分数 309Γ90%的乙醇水溶液中的任意两种，两种洗脱剂的体积比为1:9、1。优选条件下，洗脱剂①与洗脱剂④不同时使用。其中洗脱剂②优选采用氯化钠摩尔浓度为O. 03、. 09mol/ L及甲醇体积分数为409Γ70%的氯化钠甲醇水溶液，洗脱剂③优选采用氯化钠摩尔浓度为O.03 0. 09mol/L及乙醇体积分数为35% 65%的氯化钠乙醇水溶液。有益效果利用该提取方法制备奥利司他，具有工艺简单、生产周期短、提取率高、操作简单和生产成本低等特点，所用试剂不会对环境造成污染，得率较高，易于实现工业化，为脂肪酶抑制剂利普司他汀的生产提供了可行的制备工艺，具有一定的社会、经济效 .、Mo具体实施方式实施例中的原料利普司他汀产生菌的菌丝体采用链霉菌Stretomyces toxytriciniNRRL 15443 (购自美国农业研究菌种保藏中心)按现有发酵制备利普司他汀的方法进行发酵。实施例I新鲜培养的利普司他汀产生菌的菌丝体，取Ig湿菌体，用去离子水清洗，悬浮在 30mL乙醇中，乙醇的体积浓度为70%，pH为6. 5，用KQ-100型超声机进行微生物细胞破碎 15min，得到含有利普司他汀的混合物，将破碎后的混合物，用HYG- II a型摇瓶柜振荡(调节摇瓶柜的温度15°C，转速 180rpm本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备脂肪酶抑制剂奥利司他的方法，其特征在于包括以下几个步骤：A、将链霉菌发酵后得到的利普司他汀产生菌菌丝体，清洗后悬浮在萃取剂中，控制pH值在4.0~9.0之间进行微生物细胞破碎，得到含有利普司他汀的混合物；B、将含有利普司他汀的混合物振荡提取，得到含有利普司他汀的提取液；C、将含有利普司他汀的提取液离心，收集上清液，将上清液减压浓缩至无液体，得到利普司他汀粗提品；D、将利普司他汀粗提品溶于溶剂中，在钯催化剂作用下进行催化加氢得到奥利司他，重结晶得到奥利司他粗品；E、用溶剂溶解奥利司他粗品，采用大孔树脂静止吸附2~5h，再用两种洗脱剂共同进行梯度洗脱，最后浓缩干燥后得到奥利司他纯品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：石利平，李玲，尹晓龙，吉民，徐春涛，万新强，
申请(专利权)人：江苏阿尔法药业有限公司，
类型：发明
国别省市：