一种生产脂肪酶的新方法技术

本发明专利技术公开了一种采用含石油烃废水生产脂肪酶新方法。采用LB培养基培养具有石油烃降解能力的细菌，按1％接种量加入含有0.5％原油的无机盐培养基中驯化3次(7天/次)，随后将驯化后的细菌按5％接种量加入含100mg/L石油烃的废水中，发酵24h后废水中脂肪酶活性10U/mL，脂肪酶含量为25克/吨。

【技术实现步骤摘要】

:本专利技术涉及一种采用含石油烃废水培养细菌生产脂肪酶的新方法。
技术介绍
:脂肪酶(lipase,triacylglycreol acylhydrolases, EC 3.1.1.3)即三酰基甘油酰基水解酶，是工业酶制剂中最重要的酶类之一，能够在油水界面催化天然底物油脂水解，生成脂肪酸、甘油和甘油单脂或二脂，同时脂肪酶还能催化酯交换、转脂、脂合成、醇解、酸解、氨解等多种化学反应，且催化效率高，催化条件简单，因此，它被广泛应用于如洗涤剂、皮革、油脂加工、造纸、日化等工业。在石油生产、加工过程中会产生大量的含石油烃废水，物理、化学和生物等多种方法被用于处理含油废水，其中活性污泥法或接触氧化法常用于生物法处理工艺，这些工艺在处理含石油烃废水时，消耗大量能源，同时导致大量的芳香烃物质挥发，造成环境污染，没有产生适当的经济价值。本专利技术的基本思想是利用含石油烃废水作为培养基生产脂肪酶。本专利技术首先从油田含油废水中富集高效嗜油细菌，经过多次分离纯化和筛选得到高效嗜油菌株，随后筛选脂肪酶高产菌株，采用脂肪酶产率高的菌株用于含油废水生产脂肪酶。
技术实现思路
本专利技术的目的是用采油废水(100mg/L?500mg/L)生产脂肪酶。本专利技术的上述目的通过以下技术方案来实现:采用无机盐培养基从含油土壤中富集微生物，并对其石油烃利用率进行评价，随后筛选石油烃利用效率和脂肪酶产率较高的菌株，采用含油废水培养菌株从而生产脂肪酶。本专利技术具有以下优点:本专利技术运用石油烃含量达100mg/L的含油废水培养细菌生产脂肪酶，产率为25yg/mL。本专利技术采用含石油烃废水培养细菌生产脂肪酶，既降低了工厂处理含油废水的工业成本、改善了人类生存的环境，又具有“变废为宝”的创新意义和极大的应用价值。【具体实施方式】下面是结合【具体实施方式】对本专利进行详细的说明。(I)获得具利用石油烃产脂肪酶细菌:将I克含油土壤加入10mL无机盐培养基，在37°C条件下培养7天后，转接I次，如此重复7次后将获得具有石油烃降解能力的细菌。随后对获得细菌菌株脂肪酶产率进行检测，筛选脂肪酶产率高的菌株。(2)利用含石油烃废水培养细菌生产脂肪酶:将上述获得的高效嗜油菌按5%接种量加入石油烃含量为100mg/L的采油废水，从含石油烃废水中分离脂肪酶，并检测其含量和活性。(3)采用硫酸铵沉淀法和离子交换层析获得粗酶液，测定发酵后脂肪酶的产率为 25 μ g/mL，测定其脂脂肪酶的活性为10U/mL。【主权项】1.权利要求1运用含油废水培养细菌生产耐高温脂肪酶，其产率达25μ g/mL。2.权利要求2权利要求1所述的含油废水为石油加工废水。3.权利要求3权利要求1所述的细菌为自然界分离获得可以利用石油烃并且生产脂肪酶的细菌。4.权利要求1权利要求1所用的细菌保藏形式为斜面试管、干燥保藏和冷冻保藏三种形式。5.权利要求4权利要求1所用细菌的投加方式为液体或者干粉形式。【专利摘要】本专利技术公开了一种采用含石油烃废水生产脂肪酶新方法。采用LB培养基培养具有石油烃降解能力的细菌，按1％接种量加入含有0.5％原油的无机盐培养基中驯化3次(7天/次)，随后将驯化后的细菌按5％接种量加入含100mg/L石油烃的废水中，发酵24h后废水中脂肪酶活性10U/mL，脂肪酶含量为25克/吨。【IPC分类】C12N9-20【公开号】CN104830818【申请号】CN201510211575【专利技术人】罗明志, 闫筱, 邓林红, 邱国华, 周欢, 张治国, 石晓灏, 刘杨, 王悦 【申请人】常州大学【公开日】2015年8月12日【申请日】2015年4月26日本文档来自技高网...

【技术保护点】
权利要求1运用含油废水培养细菌生产耐高温脂肪酶，其产率达25μg/mL。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：罗明志，闫筱，邓林红，邱国华，周欢，张治国，石晓灏，刘杨，王悦，
申请(专利权)人：常州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32