一种检测外周血有核细胞胞内蛋白质的方法技术

本发明专利技术涉及外周血有核细胞胞内蛋白质的检测方法，该方法先利用固定液将有核细胞固定，再利用破膜剂对有核细胞破膜的同时裂解红细胞，简化实验步骤，提高红细胞裂解效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种目标蛋白质的检测方法，属于细胞生物学领域。
技术介绍
外周血细胞中包含淋巴细胞、粒细胞等有核细胞和大量 的红细胞。细胞免疫荧光标记结合荧光显微镜、流式细胞仪等设备的方法是对外周血有核细胞胞内蛋白质含量分析的方法之一。这种方法在抗体标记过程中，抗体识别容易受到外周血中残留红细胞的影响。通常情况下，对外周血有核细胞胞内蛋白质进行免疫荧光标记时会采用下面几种方法1、采用特异性抗体分离出需要的有核细胞，再进行固定、标记。这种方法成本高，实验时间长。2、采用红细胞裂解液，去除红细胞，而后对有核细胞进行固定、标记。这种方法在裂解红细胞的同时可能会对有核细胞产生破坏，影响后续实验。由此可见如何有效去除红细胞是这种实验的关键问题之一。
技术实现思路
针对现有技术不足，本专利技术要解决的技术问题是在外周血有核细胞固定之后，抗体标记之前能有效的去除外周血中的大量红细胞,实现快速、简单的对外周血有核细胞内蛋白质进行免疫荧光标记。该方法能够广泛的应用于医学诊断、蛋白质检测、分子生物学研究领域。尤其是本专利技术涉及，包括如下步骤I)在外周血样品中加入5倍体积固定液，室温作用30分钟；2)室温离本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测外周血有核细胞胞内蛋白质的方法，其特征在于包括如下步骤：1)在外周血样品中加入5倍体积固定液，室温作用30分钟；2)室温离心(500g)5分钟，去上清；3)加入洗液对细胞沉淀进行洗涤，室温条件下离心(500g)5分钟，去除上清，保留沉淀；4)加入5倍外周血样品体积的破膜剂，混匀细胞沉淀，室温作用15min；5)室温离心(500g)5分钟，去上清；6)加入洗液洗涤细胞，室温离心(500g)5分钟，去除上清，保留细胞沉淀；7)重复步骤6)；8)在细胞沉淀中加入目标蛋白质特异性抗体，混匀后37℃条件下作用30min；9)加入洗液洗涤细胞，保留细胞沉淀，去除未结合的特异性抗体；10)重复步骤9...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王治东，陈英，张学清，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所，
类型：发明
国别省市：