诊断炎症相关肝癌的标志物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及炎症相关肝癌的联合诊断标志物及其应用。首次提出联合应用外周血单核细胞(monocyte)或血浆中STK4蛋白和外周血单核细胞中磷酸化p65(p-p65)、磷酸STAT3(p-STAT3)及血浆中的IL-6蛋白水平作为炎症相关肝癌的标志物，为肝癌的快速、早期诊断和监测提供了理论基础和更简易的检测方法。

Marker for diagnosing inflammation related liver cancer and application thereof

The present invention relates to a combined diagnostic marker for inflammatory associated liver cancer and its use. For the first time proposed the joint application of peripheral blood mononuclear cells (monocyte) or phosphate in plasma STK4 protein and peripheral blood mononuclear cells of p65 (p-p65), phosphate (p-STAT3) STAT3 marker IL-6 protein levels in plasma and liver cancer as related to inflammation, liver cancer, early diagnosis and rapid monitoring provides the theoretical basis and method for the detection of more simple.

【技术实现步骤摘要】
诊断炎症相关肝癌的标志物及其应用
本专利技术属于疾病诊断领域，更具体地，本专利技术涉及早期大规模、特异性筛查炎症相关肝癌的诊断标志物以及针对标志物表达异常的靶点确定个体化治疗方案应用。
技术介绍
目前，癌症仍是世界上对人类健康危害最大的疾病之一，同时也是最难攻克的疾病之一，而肝癌是我国最为常见的恶性肿瘤之一。临床上确诊的肝癌患者一般都已是中晚期，肝脏功能损伤严重，即便通过手术和化疗等方法，生存率也很低。因此，早期发现早期治疗至关重要。近年来，随着生命科学领域研究的飞速发展，血清中肿瘤标志物检测如甲胎蛋白(AFP)已用于肿瘤早期诊断、评估预后及观察疗效复发及转移等方面。炎症在肿瘤形成的不同阶段发挥着决定性作用，包括肿瘤起始、促进恶性转化、侵袭和转移方面，同时炎症亦会影响免疫监视和治疗反应。许多研究证实炎症可诱发肿瘤的形成，如乙肝病毒(HBV)或丙肝病毒(HCV)感染可增加患肝癌的风险性；血吸虫、拟杆菌感染分别与膀胱癌和结肠癌相关等。虽然炎症保护性反应对维持机体的健康和正常功能至关重要，但炎症反应的非可控性持续和放大却往往会诱导肿瘤的发生发展。免疫系统的作用贯穿于炎症诱导肿瘤的整个过程。巨噬细胞、T细胞等通过复杂的促炎因子信号网络直接参与了炎症的发生发展过程，起到了促炎及促瘤作用。更重要的是，部分重要的信号分子在肝癌细胞和免疫细胞中都表达，并通过类似的信号通路调控两类细胞的功能，在炎症相关肝癌(chronicinflammationassociated-HCC)发生发展中起协同促进作用。根据临床，HCC分成非炎症相关肝癌和炎症相关肝癌两类，针对这两类肝癌，应采取不同方式的临床治疗，但现有技术中对这两类肝癌的进行区分的技术还不够理想。因此，发展一种新型诊断方法，能区别非炎症肝癌和炎症相关肝癌，在早期对炎症相关肝癌进行特异性诊断、评估；以及针对个体病人外周血单核细胞核中异常表达的靶蛋白，确定个体化治疗的方案具有重要的临床意义。
技术实现思路
本专利技术涉及炎症相关肝癌标志物的鉴定，并且联合多种标志物的表达水平，作为特异性、早期大规模筛查炎症相关肝癌、作为诊断评估指标、确定个体化治疗方案的临床应用。在本专利技术的第一方面，提供STK4蛋白和IL-6蛋白，以及可选的磷酸化p65(p-p65)、磷酸化STAT3(p-STAT3)的用途，用于作为诊断炎症相关肝癌的诊断标志物，或用于作为对肝癌分型的诊断标志物，或用于作为对肝癌分期的诊断标志物，或用于作为诊断肝癌转移的诊断标志物。在一个优选例中，所述的诊断标志物是血清诊断标志物，血浆诊断标志物或外周血单个核细胞诊断标志物。在另一优选例中，所述的诊断包括：早期诊断，预后评估。在另一优选例中，所述的对肝癌分型包括：区分非炎症的肝癌与炎症相关肝癌。在本专利技术的另一方面，提供STK4蛋白和IL-6蛋白，以及可选的磷酸化p65(p-p65)、磷酸化STAT3(p-STAT3)的用途，用于制备诊断炎症相关肝癌、对肝癌分期或诊断肝癌转移的诊断试剂。在一个优选例中，所述的诊断试剂是以血清为待测样品的诊断试剂，以血浆为待测样品的诊断试剂或以外周血单个核细胞为待测样品的诊断试剂。在本专利技术的另一方面，提供一种用于对肝癌分型(包括区分非炎症的肝癌与炎症相关肝癌)、对肝癌分期或诊断肝癌转移的试剂盒，所述试剂盒中包括：特异性检测STK4蛋白表达水平的试剂和特异性检测IL-6蛋白表达水平的试剂；以及可选的：特异性检测磷酸化p65(p-p65)水平的试剂和/或特异性检测磷酸化STAT3(p-STAT3)水平的试剂。在一个优选例中，所述的特异性检测STK4蛋白表达水平的试剂是抗STK4蛋白的抗体；和/或所述的特异性检测IL-6蛋白表达水平的试剂是抗IL-6蛋白的抗体；和/或所述的特异性检测磷酸化p65(p-p65)水平的试剂是抗p-p65蛋白的抗体；和/或所述的特异性检测磷酸化STAT3(p-STAT3)水平的试剂是抗p-STAT3蛋白的抗体。在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括：FACS流式细胞学检测试剂和/或酶联免疫吸附(ELISA)检测试剂。在本专利技术的另一方面，提供特异性检测STK4蛋白表达水平的试剂和特异性检测IL-6蛋白表达水平，以及可选的特异性检测磷酸化p65(p-p65)水平或特异性检测磷酸化STAT3(p-STAT3)水平的试剂的用途，用于制备对肝癌分型(包括区分非炎症的肝癌与炎症相关肝癌)、对肝癌分期或诊断肝癌转移的试剂盒。在本专利技术的另一方面，提供一种诊断炎症相关肝癌的方法，所述方法包括：(1)应用所述的试剂盒检测受试者血浆、血清或外周血分离出的单核细胞中STK4蛋白表达水平和IL-6蛋白表达水平；以及可地联合检测磷酸化p65(p-p65)水平及磷酸化STAT3(p-STAT3)水平；(2)分析各蛋白表达水平，若STK4蛋白显著性低表达和IL-6蛋白显著性高表达，以及可选地检测到磷酸化p65(p-p65)水平及磷酸化STAT3(p-STAT3)水平显著性高表达，表明受试者为炎症相关肝癌的高危人群或患者。在本专利技术的另一方面，提供一种对肝癌分期或诊断肝癌转移的方法，所述方法包括：(1)应用所述的试剂盒检测受试者血浆、血清或外周血分离出的单核细胞中STK4蛋白表达水平和IL-6蛋白表达水平；(2)分析各蛋白表达水平，若对比健康对照人群，STK4蛋白显著性低表达和IL-6蛋白水平小幅度提高表达，则表明肝癌为早期或中期肝癌；若对比健康对照人群，STK4蛋白无显著性降低,并且IL-6蛋白显著性高表达，则表明为晚期肝癌或发生癌转移。本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1、STK4在小鼠肝癌巨噬细胞中蛋白表达水平和肝癌小鼠血清中IL-6的含量检测。Isotype表示同型二抗染色的对照，Veh表示未经化合物及LPS处理的对照组。图2、IL-6在炎症相关肝癌患者和正常(Normal)人血浆中的蛋白表达水平检测。图3、STK4、p-p65和p-STAT3在炎症相关肝癌患者和正常人的外周血单核细胞中的蛋白表达水平检测以及相关性检测；针对表达异常的靶点，为确定个体化治疗方案提供重要指标。图4、STK4在炎症相关肝癌患者和正常人血浆中的蛋白表达水平检测。图5、STK4在低水平炎症性与高水平炎症性肝癌患者中的检测。图6、联合STK4与IL-6水平，早期筛查炎症相关肝癌的分期或是否转移的应用。具体实施方式本专利技术人经过广泛而深入的研究，首次发现丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4(STK4)和IL-6在炎症相关肝癌患者血浆、血清或外周血单个核细胞中的表达发生显著性改变，表现为与健康样本相比，STK4表达显著性降低及IL-6显著性提高，并且磷酸化p65(p-p65)水平及磷酸化STAT3(p-STAT3)水平显著性提高。基于此，本专利技术人建立了一种炎症相关肝癌、肝癌分期或肝癌转移的联合诊断方法，该方法较应用单一因素具有更好的准确性。本专利技术人首次发现，与健康人群相比，炎症相关肝癌的病人外周血的血浆中STK4含量显著降低。而且，与健康人群或动物相比，病患血浆中IL-6含量显著增高。同病患血浆中IL-6含量的绝对值相比，病患血浆中STK4的含量明显降低，与炎症相关肝癌正相关，并与肿瘤转移本文档来自技高网...

【技术保护点】
STK4蛋白和IL‑6蛋白，以及可选的磷酸化p65、磷酸化STAT3的用途，用于作为诊断炎症相关肝癌的诊断标志物，或用于作为对肝癌分型的诊断标志物，或用于作为对肝癌分期的诊断标志物，或用于作为诊断肝癌转移的诊断标志物。

【技术特征摘要】
1.STK4蛋白和IL-6蛋白，以及可选的磷酸化p65、磷酸化STAT3的用途，用于作为诊断炎症相关肝癌的诊断标志物，或用于作为对肝癌分型的诊断标志物，或用于作为对肝癌分期的诊断标志物，或用于作为诊断肝癌转移的诊断标志物。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的诊断标志物是血清诊断标志物，血浆诊断标志物或外周血单个核细胞诊断标志物。3.STK4蛋白和IL-6蛋白，以及可选的磷酸化p65、磷酸化STAT3的用途，用于制备诊断炎症相关肝癌、对肝癌分期或诊断肝癌转移的诊断试剂。4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的诊断试剂是以血清为待测样品的诊断试剂，以血浆为待测样品的诊断试剂或以外周血单个核细胞为待测样品的诊断试剂。5.一种用于对肝癌分型、对肝癌分期或诊断肝癌转移的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括：特异性检测STK4蛋白表达水平的试剂和特异性检测IL-6蛋白表达水平的试剂；以及可选的：特异性检测磷酸化p65水平的试剂和/或特异性检测磷酸化STAT3水平的试剂。6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的特异性检测STK4蛋白表达水平的试剂是抗STK4蛋白的抗体；和/或所述的特异性检测IL-6蛋白表达水平的试剂是抗IL-6蛋白的抗体；和/或所述的特异性检测磷酸化p65水平的试剂是抗p-p65蛋白的抗体；和/或所述的特异性检测磷酸化STAT3水平的试剂是抗p-STAT3蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：王红艳，李伟芸，魏滨，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：上海,31