一种人外周血单个核细胞的冻存保护剂及保存方法技术

技术编号:10525233 阅读:192 留言:0更新日期:2014-10-09 10:48
本发明专利技术公开了一种人外周血单个核细胞的冻存保护剂,由以下组分组成:培养基43份~53份;自体血浆30份~40份;二甲基亚砜12份~17份;人血白蛋白5%~7%;海藻糖0.17molL/~0.23mol/L。本发明专利技术公开的保存方法为,采集新鲜抗凝血液,使用人血白蛋白将外周核细胞配置成细胞悬液,然后加入等体积的冻存保护剂,混合均匀后于-90℃~-70℃的条件下保存10h~20h,然后转入液氮中保存。本发明专利技术的公开的冻存保护剂和保存方法,可以使冻存后的细胞同时具有较高的活率和较强的细胞活性,缩短CIK细胞诱导扩增的周期。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物细胞保存的
,具体涉及到一种人外周血单个核细胞的冻 存保护剂及保存方法。
技术介绍
人外周血单个核细胞指外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞、单核细胞、树 突状细胞等细胞。人外周血单个核细胞是制备细胞因子诱导的CIK细胞的种子细胞,也是 诱导生成特定淋巴细胞的种子细胞。在实际临床使用中,通常会在患者健康时提取人外周 血单个核细胞进行冻存,在需要时再对其进行诱导扩增,因此冻存前后人外周血单个核细 胞的质量和数量直接关系到诱导CIK细胞的周期和细胞质量,这就要求在人外周血单个核 细胞冻存的过程中,将细胞的损伤降到最低;使细胞在复苏后有较高的活率;复苏后细胞 形态规则,扩增周期短。 现有的人外周血单个核细胞冻存技术主要采用血清、渗透性冷冻保护剂和培养基 配制冻存液对细胞进行冻存;或者在冻存保护液中加入羟乙基淀粉,采用这种方法冻存的 细胞在回输过程中可能导致过敏性反应,并且在复苏之后细胞的虽然存活率较高但细胞活 性较低,主要表现为不规则形态的细胞较多,并且在随后诱导培养杀伤细胞过程中,扩增周 期较长。 因此要能够满足实际的需要,在人外周血单个核细胞冻存复苏之后细胞不仅要保 证有较高的活率还要有较强的细胞活性,还应尽量缩短随后的CIK细胞诱导扩增周期。 为了解决现有技术中的上述不足,本专利技术提出了一种新的解决方案。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种人外周血单个核细胞的冻存保护剂,以及使用这种冻存 保护剂保存人外周血单个核细胞的方法。 为达上述目的,本专利技术所采用的技术方案是:提供一种人外周血单个核细胞的冻 存保护剂,由以下组分组成:培养基43份?53份;自体血浆30份?40份;二甲基亚砜12 份?17份;人血白蛋白5%?7% ;海藻糖0· 17molL/?0· 23mol/L。 此外,本专利技术还公开了人外周单个核细胞的保存方法,包括以下步骤: A、采集新鲜的抗凝人外周血进行离心处理,分别提取血浆和外周血单个核细胞; 取血浆配置人血白蛋白,外周血单个核细胞采用磷酸盐缓冲液清洗数次;使用人血白蛋白 将清洗后的外周血单个核细胞制成细胞悬液; B、配置冻存保护剂,取培养基43份?53份;自体血浆30份?40份;二甲基亚砜 12份?17份混合均匀,然后加入人血白蛋白和海藻糖,人血白蛋白的终含量质量百分数为 5%?7%,海藻糖的终含量为0· 17molL/?0· 23mol/L ; C、取外周血单个核细胞的细胞悬液,加入等体积的冻存保护剂,混合均匀后 于-90°C?-70°c的条件下保存10h?24h,然后转入液氮中保存。 综上所述,本专利技术具有以下优点: 本专利技术的公开的冻存保护剂和保存方法,可以使冻存后的细胞同时具有较高的活 率和较强的细胞活性,缩短CIK细胞诱导扩增的周期。 【具体实施方式】 以下结合【具体实施方式】进一步说明本专利技术,而非限制本专利技术。 采集新鲜的EDTA抗凝人外周血加入淋巴分离管中进行离心处理,分别提取上层 的血浆和中层的外周血单个核细胞。取血浆配置人血白蛋白,外周血单个核细胞采用磷酸 盐缓冲液清洗数次;使用人血白蛋白将清洗后的外周血单个核细胞制成细胞悬液,采用台 盼蓝计数,调整细胞悬液的细胞浓度为6. 0 X 107个/ml。 在细胞悬液中加入冻存保护剂,混合均匀后在低温处保存一段时间,然后转入液 氮中保存。在实施过程中,可以将细胞悬液分成多份,每份加入的保护剂成分和剂量可以不 相同,同时可以让每份的保存条件保持一定差别,对照验证保存过程和条件对保存效果的 影响。冻存保护剂的组分、加入比例以及保存条件如表1。 表1 :实施例1?7的具体实施方案 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人外周血单个核细胞的冻存保护剂,由以下组分组成:培养基43份~53份;自体血浆30份~40份;二甲基亚砜12份~17份;人血白蛋白5%~7%;海藻糖0.17molL/~0.23mol/L。

【技术特征摘要】
1. 一种人外周血单个核细胞的冻存保护剂,由以下组分组成: 培养基43份?53份;自体血浆30份?40份;二甲基亚砜12份?17份; 人血白蛋白5%?7% ;海藻糖0· 17molL/?0· 23mol/L。2. 如权利要求1所述的保护剂,其特征在于:所述组分的组成为: 培养基50份;自体血浆35份;二甲基亚砜15份;人血白蛋白5% ;海藻糖0. 2mol/L。3. -种人外周单个核细胞的保存方法,其特征在于,包括以下步骤: A、 采集新鲜的抗凝人外周血进行离心处理,分别提取血浆和外周血单个核细胞;取血 浆配置人血白蛋白,外周血单个核细胞采用磷酸盐缓冲液清洗数次;使用人血白蛋白将清 洗后的外周血单个核细胞制成细胞悬液; B、 配置冻存保护剂,取培养基43...

【专利技术属性】
技术研发人员:张清友王翔李昌旭海泉李海燕李俊赵峻
申请(专利权)人:成都清科生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:四川;51

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1