一种批量基因克隆的方法技术

本发明专利技术公开了一种批量基因克隆的方法。此方法包括以下步骤：将具有多个目标性状差异的两个亲本杂交构建分离群体；分离群体中随机选择的基因克隆群体与2个亲本一起基因组高通量测序，比对2个亲本基因组，获得亲本间差异等位位点。按不同目标性状，将克隆群体的测序数据归入不同的显性池与对应的隐性池，按完全匹配的方式，比对亲本间差异等位位点序列在显性池与隐性池间的匹配情况，并计算分离比。通过统计检验，获得目标性状的候选位点。然后确定目标基因座位。通过PCR扩增克隆全长目标基因，通过遗传互补实验验证目标基因功能。本发明专利技术对同一次实验获得的测序数据进行不同的分组，即可实现克隆多个基因的目的，实现了数据的充分发掘与利用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于遗传学领域，公开了。
技术介绍
自然界物种性状丰富多样，如株高、抗病性、产量等。从孟德尔时代起，就逐渐认识到了性状是由遗传因子控制，摩尔根进一步将遗传因子明确为“基因”，并指出基因位于染色体上且呈线性排列。确定基因在染色体上具体的位置(基因定位)是研究性状的基础，也是分离、克隆并利用基因的前提。经典的基因定位策略源于摩尔根的连锁理论，即染色体上相邻基因(即基因连锁)不能自由分离，而是倾向于整体向后代传递，它们所控制的性状也倾向于同时出 现。二者相邻越近，性状同时出现的可能性越大，重组性状越少。因此，由重组性状(配子)的比 例可以度量二者间的距离。若已知道其中一个基因在染色体上的位置(称这样的基因为标记基因)，就可以根据重组率推断另一个基因的位置。例如，黄色圆粒豌豆品种(基因型分别为YYRR)与绿色皱粒品种(基因型为yyrr)杂交产生F1 (基因型YyRrhF1自交可能产生YR、Yr、yR和yr 4种配子，根据F2代的性状表现可以确定它们的比例，进而计算交换率。若交换率为I %，且已知控制颜色的Y基因位于第3染色体上，那么就可以推测，控制豌豆籽粒形状的R基因位于第3染色本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种批量基因克隆的方法，其特征在于，包括以下步骤：选用在多个目标性状上有差异的材料做亲本，将两个亲本杂交构建分离群体，从分离群体中随机选择100个以上的基因型作为基因克隆群体，提取克隆群体中每个个体与两个亲本基因组一起高通量测序，并进行基因组初步直接组装；对两个亲本基因组进行比对，获得亲本间差异等位位点；按不同目标性状，将克隆群体的测序数据归入不同的显性池与对应的隐性池，按完全匹配的方式，比对亲本间差异等位位点序列在显性池与隐性池间的匹配情况，并计算分离比；通过统计检验，获得显性池与隐性池中分离比分别为3∶1和0∶1的等位位点，即获得目标性状的候选位点；扩大隐性池群体，PCR逐个检查隐性池中每...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：彭海，张静，章伟雄，
申请(专利权)人：江汉大学，
类型：发明
国别省市：