定向克隆的方法技术

本文描述了将插入DNA片段在靶载体中定向克隆的方法。该方法包含将靶载体、插入DNA片段、限制酶和DNA连接酶混合以产生重组DNA分子的步骤。

Directed cloning method

This paper describes a method for directional cloning of inserted DNA fragments in target vectors. The method comprises the steps of mixing target vectors, insertion of DNA fragments, restriction enzymes, and DNA ligase to produce recombinant DNA molecules.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】定向克隆的方法序列表与本申请相关的序列表以代替纸制副本的文本格式来提供，并且在此以引用的方式并入本说明书中。含有序列表的文本文件的名称为Sequence_listing_SDS1_0004PCT.txt(序列表SDS1_0004PCT)。该文本文件约为27KB，创建于2014年9月15日。
本专利技术涉及重组技术。具体来说，本专利技术涉及定向克隆的方法。
技术介绍
分子克隆是一种用来构建重组DNA分子的方法。形成重组DNA的组分包括克隆载体、小DNA片段、复合酶和活细胞。克隆载体为在活细胞内进行复制的DNA分子。小DNA片段含有将被克隆的基因。在克隆过程中，使用不同的方法将基因和载体结合以形成重组DNA分子。然后，将重组DNA分子转化为活细胞，然后对活细胞进行筛选和复制。然而，传统的分子克隆技术涉及不同条件下的多种方法。因此，需要一种简单、高效、便宜的将DNA片段分子克隆至靶分子的方法。
技术实现思路
本文描述了将插入DNA片段(insertDNAsegment)定向克隆至载体的方法。不同的实施例包括提供靶载体和插入脱氧核糖核酸(DNA)片段。可以在容器中将靶载体和插入DNA片段与一定量本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种定向克隆的方法，所述方法包括：提供靶载体和插入脱氧核糖核酸(DNA)片段；和在容器中混合所述靶载体、所述插入DNA片段、一定量的限制酶和一定量的DNA连接酶，以：在第一温度下切割所述靶载体，和在第二温度下将所述插入DNA片段的至少一部分连接至所述靶载体，其中所述第一温度与所述第二温度相同或基本相同。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种定向克隆的方法，所述方法包括：提供靶载体和插入脱氧核糖核酸(DNA)片段；和在容器中混合所述靶载体、所述插入DNA片段、一定量的限制酶和一定量的DNA连接酶，以：在第一温度下切割所述靶载体，和在第二温度下将所述插入DNA片段的至少一部分连接至所述靶载体，其中所述第一温度与所述第二温度相同或基本相同。2.根据权利要求1所述的方法，其中将所述插入DNA片段与所述靶载体的所述连接包括将所述插入DNA片段连接至所述靶载体，以产生包括所述靶载体的至少一部分和所述插入DNA片段的所述至少一部分的重组DNA分子。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述重组DNA分子为表达载体。4.根据权利要求2所述的方法，其中所述插入DNA片段包括所述插入DNA片段的所述至少一部分和包括所述限制酶的识别位点的DNA序列。5.根据权利要求2所述的方法，还包括：在所述第一温度下切割所述插入DNA片段以产生所述插入片段的所述至少一部分。6.根据权利要求2所述的方法，其中当混合所述靶载体、所述插入DNA片段、所述一定量的限制酶、所述一定量的DNA连接酶的时候，所述容器中的所述靶载体分子基本上为闭环质粒。7.根据权利要求1所述的方法，其中对所述靶载体、所述插入DNA片段、所述一定量的限制酶、所述一定量的DNA连接酶的所述混合包括在单一容器内混合所述靶载体、所述插入DNA片段、所述一定量的限制酶、所述一定量的DNA连接酶。8.根据权利要求1所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴昭，
申请(专利权)人：上海斯丹赛生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31