偶联嵌合抗原受体细胞及其用途制造技术

本公开涉及在体内和/或体外增强免疫细胞细胞反应和/或扩增和/或维持的组合物和方法。例如，施用混合的细胞群体，包括编码第一CAR的修饰的细胞和编码第二CAR的修饰的细胞，其中第一CAR的抗原结合域结合第一抗原，第二CAR的抗原结合域结合第二抗原，第一抗原区别于第二抗原。

【技术实现步骤摘要】
偶联嵌合抗原受体细胞及其用途
本公开涉及与嵌合抗原受体细胞分泌治疗剂有关的组合物和方法，及其在治疗包括癌症在内的疾病中的用途。
技术介绍
嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法在B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)和淋巴瘤等癌症中取得了良好的临床疗效。然而，实体瘤的治疗进展相对缓慢。为了使CART细胞疗法有效，患者体内CART细胞的长期维持对于肿瘤治疗中患者的良好预后很重要。例如，如果可以维持CART细胞的长期存在，那么该技术可以有效地减少肿瘤复发。癌症被称为恶性肿瘤，涉及异常细胞生长，并有可能侵袭或扩散到身体的其他部位。人类有一百多种癌症。例如乳腺癌发生在乳房的上皮组织中。由于乳腺癌细胞失去了正常细胞的特性，因此失去了乳腺癌细胞之间的联系。癌细胞剥落后，它们会通过血液和/或淋巴系统扩散到整个身体，从而危及生命。当前，乳腺癌已经成为对女性身心健康的常见威胁之一。尽管已经证明免疫疗法(例如，CART)对于治疗某些癌症是有效的，但是仍然需要改善免疫疗法，以使其有效地治疗更多的癌症，包括涉及实体瘤的癌症。
技术实现思路
本专利技术所采用的技术方案如下：由于患者可以在B细胞耗竭的情况下存活，因此可以使用CART细胞的第一抗原结合结构域结合B细胞来扩增该患者的CART细胞。因此，更多的CART细胞可以及时在患者体内扩增，从而增加了CART细胞的效力。患者中及时扩增的CART细胞可增加CART细胞与肿瘤细胞，特别是具有第二CAR结合的抗原的实体肿瘤细胞接触的机会。r>本公开描述了包括一个或多个不同抗原结合结构域的基因修饰免疫细胞群。所述基因修饰的免疫细胞可以包括至少两个不同的抗原结合结构域：用于扩展和/或维持所述基因修饰的细胞的第一抗原结合结构域，以及用于杀死靶细胞例如肿瘤细胞的第二抗原结合结构域。例如，第一抗原结合结构域结合表面标志物，例如白细胞(WBC)的细胞表面分子，而第二抗原结合结构域结合肿瘤细胞的靶抗原。在实施方案中，细胞表面分子是WBC的表面抗原。CAR可以包含第一或第二抗原结合结构域。修饰的免疫细胞包含第一和第二抗原结合结构域。在实施方案中，修饰的细胞包括(1)包含第一抗原结合结构域的第一组修饰细胞和(2)包含第二结合结构域的第二组修饰细胞。在实施方案中，修饰的细胞是包含两个不同组的修饰的细胞的混合群体。CAR可以是双特异性CAR。例如，两个抗原结合结构域在相同的CAR(双特异性CAR或串联CAR(tanCAR))上，在不同的CAR分子上，或在CAR和T细胞受体(TCR)上。单个CAR可以包括至少两个不同的抗原结合结构域，或者两个不同的抗原结合结构域各自在单独的CAR上。本公开还描述了一种或多种编码第一CAR分子和第二CAR分子或TCR的核酸。第一CAR包括第一抗原结合结构域，第二CAR或TCR包括第二抗原结合结构域。在实施方案中，第一CAR和第二CAR或TCR表达为分开的多肽，并由至少两个分开的核酸编码。在实施方案中，单个CAR至少包含本文所述的第一和第二抗原结合结构域，并由单个核酸编码。在实施方案中，两个不同的抗原结合结构域可以由一个以上的核酸编码。此外，本公开描述了包含本文所述核酸的载体和包含本文所述核酸的细胞。在实施方案中，细胞包括基因修饰的细胞，例如基因修饰的T细胞，例如CART细胞。本公开还描述了有效用于在患者中扩增和/或维持基因修饰细胞的修饰细胞群体，例如修饰T细胞的混合群体。在实施方案中，基因修饰细胞的混合群体包括至少两种不同的基因修饰细胞，第一基因修饰细胞表达用于扩增和/或维持修饰细胞的抗原结合域，第二基因修饰细胞表达用于以下目的的抗原结合域：杀死靶细胞，例如肿瘤细胞。两种抗原结合结构域是不同的分子并结合不同的抗原。在实施方案中，基因修饰细胞的混合群体还包括表达至少两个不同抗原结合结构域的第三基因修饰细胞，第一抗原结合结构域用于扩增和/或维持基因修饰细胞，第二抗原结合结构域用于杀死靶细胞。在实施方案中，混合的修饰细胞群体还包括表达至少两个不同抗原结合结构域的基因修饰细胞，第一抗原结合结构域用于扩增和/或维持修饰细胞，第二抗原结合结构域用于杀死靶细胞(其中两个不同的抗原结合结构域在同一基因修饰细胞上表达)。在实施方案中，混合的修饰细胞群体包括表达用于杀死靶细胞的抗原结合域的修饰细胞和表达至少两个抗原结合域的修饰细胞(其中两个不同的抗原结合结构域在同一修饰细胞上表达)，第一抗原结合域用于扩增和/或维持修饰T细胞，第二抗原结合结构域用于杀死靶细胞。在实施方案中，修饰细胞的混合群体包括表达用于扩增和/或维持修饰T细胞的抗原结合域的修饰细胞和表达至少两个抗原结合域的修饰细胞(其中两个不同的抗原结合结构域在同一修饰细胞上表达)，第一抗原结合域用于扩增和/或维持的，第二抗原结合结构域用于杀死靶细胞。本公开还描述了以下情况，在两种类型的修饰细胞中，用于扩展和/或维持修饰细胞中不包含编码第二抗原结合结构域的核酸序列，和/或用于结合靶细胞的修饰细胞中不包含编码第一抗原结合结构域的核酸序列。本公开描述了包含本文所述的修饰的细胞的混合群体的组合物。在实施方案中，修饰的细胞是修饰的T细胞、修饰的NK细胞、修饰的巨噬细胞或修饰的树突状细胞。在实施方案中，修饰的T细胞是CART细胞。在实施方案中，表达两个不同抗原结合结构域的修饰细胞可以是单个CART细胞。在实施方案中，单个CART细胞可以是双特异性CART细胞。在实施方案中，用于扩增和/或维持修饰的细胞的抗原结合结构域结合WBC的表面抗原，并且用于杀死靶细胞的抗原结合结构域结合肿瘤抗原。在实施方案中，WBC是B细胞。在实施方案中，B细胞的表面抗原是CD19，并且肿瘤抗原是tMUC1、TSHR、GUCY2C、ACPP、CLDN18.2(18.2)、PSMA、UPK2或其他肿瘤抗原。此外，本公开描述了本文所述的修饰细胞的组合物或混合群体在有需要的患者中增强CART细胞的扩增和/或维持的用途。CART细胞的增强的扩增和维持提高了CART细胞疗法的功效。本公开描述了一种用本文所述的混合修饰细胞群体治疗患有肿瘤的患者的方法。在实施方案中，基因修饰的细胞的混合群体在患者中扩增和/或维持修饰的细胞并有效地抑制肿瘤的生长。在实施方案中，肿瘤是实体瘤。另外，本公开描述了响应于修饰细胞的混合群体的引入而释放细胞因子。一些实施方案涉及包含分离的核酸序列的细胞，所述分离的核酸序列包含核酸序列和另外的核酸序列，所述核酸序列编码抗原受体(CAR)，所述另外的核酸序列编码包含治疗剂IL-12、IL-2、IL-6、IL-7、IL-15、IL-17、IFN-γ和IL-23中的至少一种。细胞表达并分泌治疗剂。本
技术实现思路
并非旨在确定所要求保护的主题的关键特征或基本特征，也并非旨在用于限制所要求保护的主题的范围。附图说明参照附图描述具体实施方式。在不同附图中使用相同的参考数字表示类似或相同的项目。图1A-1C显示了CD19CAR和GUCY2CCAR在相应的T细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.修饰的细胞群体，其特征在于：包含至少两种免疫细胞，其中所述第一免疫细胞包含第一核酸序列，该第一核酸序列包括编码第一CAR的核酸序列，所述第二免疫细胞包含第二核酸序列，该第二核酸序列包括编码第二CAR的核酸序列，其中所述第一CAR和所述第二CAR分别包含细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，并且所述第一CAR用于细胞群体的扩增和/或维持，所述第二CAR用于使第二免疫细胞与靶细胞结合。/n

【技术特征摘要】
20191108 US 62/932,5871.修饰的细胞群体，其特征在于：包含至少两种免疫细胞，其中所述第一免疫细胞包含第一核酸序列，该第一核酸序列包括编码第一CAR的核酸序列，所述第二免疫细胞包含第二核酸序列，该第二核酸序列包括编码第二CAR的核酸序列，其中所述第一CAR和所述第二CAR分别包含细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，并且所述第一CAR用于细胞群体的扩增和/或维持，所述第二CAR用于使第二免疫细胞与靶细胞结合。


2.根据权利要求1所述的修饰的细胞群体，其特征在于：所述第一CAR结合表面标志物抗原，第二CAR结合实体瘤或血液瘤抗原。


3.根据权利要求1或2所述的修饰的细胞群体，其特征在于：所述第一CAR包括SEQIDNO：5、6、或36，和/或第二CAR包括SEQIDNO：8、11、或29-35之一的序列。


4.根据权利要求3所述的修饰的细胞群体，其特征在于：所述第一免疫细胞不包含第二核酸序列，和/或第二免疫细胞不包含第一核酸序列，和/或修饰的细胞群体还包括表达至少两种不同抗原结合结构域的第三基因修饰细胞，第一抗原结合结构域用于扩增和/或维持基因修饰细胞，第二抗原结合结构域用于杀死靶细胞。


5.根据权利要求3所述的修饰的细胞群体，其特征在于：所述的细胞群体包括修饰的NK细胞群体、修饰的T细胞群体、修饰的巨噬细胞群体或修饰的树突状细胞群体。


6.根据权利要求1或2所述的修饰的细胞群体，其特征在于：所述的细胞群体包含至少两种T细胞，其中所述第一T细胞包含第一核酸序列，该第一核酸序列包括编码第一CAR的核酸序列，所述第二T细胞包含第二核酸序列，该第二核酸序列包括编码第二CAR的核酸序列，所述第一CAR包括SEQIDNO：5、6、或36，所述第二CAR包括SEQIDNO：8、11、或29-35之一的序列，其中所述第一CAR和所述第二CAR分别包含细胞外结构域、跨膜结构域、细胞内结构域。


7.根据权利要求6所述的修饰的细胞群体，其特征在于：所述第二T细胞的数量不少于第一T细胞的数量。


8.根据权利要求7所述的修饰的细胞群体，其特征在于：所述第一T细胞和/或第二T细胞包含第三核酸序列，所述第三核酸序列包含编码以下各项中的一种或多种的核酸序列：IL-1P、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-1Ra、IL-2R、IFN-γ、MIP-1n、MIP-IP、MCP-1、TNFα、GM-CSF、GCSF、CXCL9、CXCL10、CXCR因子、VEGF、RANTES、EOTAXIN、EGF、HGF、FGF-P、CD40、CD40L、铁蛋白。


9.根据权利要求8所述的修饰的细胞群体，其特征在于：所述第一T细胞和/或第二T细胞包含第三核酸序列，所述第三核酸序列包含(1)编码IL-6的核酸序列和/或(2)编码IFN-γ的核酸序列。


10.根据权利要求6所述的修饰的细胞群体，其特征在于：所述第一T细胞和/或第二T细胞经工程化改造，当T细胞被激活时表达和分泌IL-6和/或INF-γ。


11.根据权利要求9所述的修饰的细胞群体，其特征在于：所述第一T细胞和/或第二T细胞包含串联的(1)编码IL-6的核酸序列和/或(2)编码IFN-γ的核酸序列。


12.根据权利要求9所述的修饰的细胞群体，其特征在于：所述第一T细胞和/或第二T细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖磊，蒲程飞，曹志远，
申请(专利权)人：上海斯丹赛生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31