表达有嵌合受体的T细胞制造技术

提供了一种表达有嵌合受体的T细胞，所述嵌合受体特异性识别BCMA,并且内源性TCR分子沉默和内源性MHC分子沉默。还提供了所述T细胞在用于制备治疗BCMA阳性的肿瘤的药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达有嵌合受体的T细胞
本专利技术属于免疫细胞治疗领域，具体涉及肿瘤免疫疗法，尤其是一种基因工程修饰的免疫效应细胞。
技术介绍
近年来肿瘤免疫疗法得到了广泛的关注，目前过继免疫治疗所应用的T细胞主要来源于患者自身，经过体外修饰改造后回输到患者体内，由于患者的个体差异较大，使得治疗效果和安全性不易控制，且费用昂贵。另外，由于细胞制备需要一定的周期，在病人病情危急、或者患者自身的条件限制不适宜从体内抽出外周血进行免疫细胞治疗等情况时，则自体细胞治疗不能适用。同种异体的免疫效应细胞是指从同一物种的其他个体获得的细胞，不仅能够克服T细胞来源质量差的问题，使得所有晚期肿瘤患者都能接受免疫细胞疗法，而且能够使细胞产品更好地应用于自动化生产，降低生产费用，并确保产品的一致性。但是，由于供体和受体之间的免疫遗传学差异，供体T淋巴细胞进入受体病人体内后，会将病人体内的正常细胞或者组织误认为外源靶标进行攻击，从而产生移植物抗宿主反应(GVHD)；另一方面，异体细胞作为外源移植物，也可能受到病人体内的免疫细胞识别和攻击，进而抑制或者清除异体细胞，产生宿主抗移植物反应(HVGR)。专利PCT/EP2016/055332中，Cellectis公司敲除异体T细胞中的TCR受体和CD52得到了通用型CAR-T细胞，该技术虽然降低了GVHD风险，但不能抑制HVGR的产生，存在一定的安全性风险。专利CN201710983276.X中，精准生物公司同时敲除包括TRAC，B2M和CIITA基因得到通用型CAR-T细胞，但存在细胞制备效率低等问题。因此需要开发一种可以降低GVHD以及HVGR免疫排斥反应、且不易被宿主NK细胞攻击的嵌合受体修饰的同种异体T细胞。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种表达有嵌合受体的T细胞，该T细胞不仅能抑制GVHD风险和HVGR风险，且不易被NK细胞攻击。在本专利技术的第一方面，提供了一种表达有嵌合受体的T细胞，所述嵌合受体特异性识别BCMA，所述T细胞内源性TCR分子沉默和内源性MHC分子沉默。在具体实施方式中，所述TCR分子沉默是指编码TCR的α和β链中的一种或两种链的基因发生沉默。在具体实施方式中，所述TCR分子沉默是指编码TCR的α链的基因(即TRAC基因)发生沉默，在本文中编码TCR的α链的基因也被称为TRAC基因。在具体实施方式中，所述TCR分子沉默是指编码TCR的α链恒定区的基因发生沉默。在具体实施方式中，所述TCR分子沉默是指编码TCR的α链恒定区的基因的第一个外显子发生沉默。在具体实施方式中，所述MHC分子沉默是指MHCI类分子沉默。在具体实施方式中，所述MHC分子是指HLA分子。优选的，所述MHC分子为I类的HLA分子。优选的所述HLA分子选自编码HLA-A、HLA-B、HLA-C，B2M和CIITA分子中的至少一种。更优选的，所述HLA分子为B2M分子，在本文中编码B2M基因也被称为B2M基因。在具体实施方式中，采用基因编辑技术使内源性TCR分子沉默和内源性MHC分子沉默。在具体实施方式中，对编码TCR的α和/或β链恒定区域的基因进行基因编辑使编码TCR的α和β链中的一种或两种链的基因发生沉默。在具体实施方式中，对编码TCR的α链的基因进行基因编辑。优选的，对编码TCR的α链的恒定区域的基因进行基因编辑。更优选的，对编码TCR的α链恒定区的基因的第一外显子进行基因编辑。在具体实施方式中，所述MHC分子选自HLA-A、HLA-B、HLA-C，B2M和CIITA分子中的至少一种。在一优选方案中，所述MHC分子为B2M分子。在具体实施方式中，对编码B2M的恒定区域的基因进行基因编辑使B2M分子沉默；优选的，对编码B2M恒定区的基因的第一外显子进行基因编辑使B2M分子沉默。在具体实施方式中，所述的基因编辑技术选自CRISPR/Cas9技术、人工锌指核酸酶(ZincFingerNucleases，ZFN)技术、转录激活样效应因子(transcriptionactivator-likeeffector,TALE)技术或TALE-CRISPR/Cas9技术；优选的，采用CRISPR/Cas9技术。在具体实施方式中，采用CRISPR/Cas9技术进行B2M分子沉默时，选取的gRNA的序列如SEQIDNO：1所示。在具体实施方式中，采用CRISPR/Cas9技术对进行TCR的α链沉默时，选取的gRNA的序列如SEQIDNO：2、27、28、或29所示。在具体实施方式中，进行B2M分子沉默时，选取的gRNA的序列如SEQIDNO：1所示，进行TCR的α链沉默时，选取的gRNA的序列如SEQIDNO：2所示。在具体实施方式中，所述嵌合受体选自嵌合抗原受体(CAR)或T细胞抗原耦合器(TAC)。在具体实施方式中，所述嵌合受体为嵌合抗原受体(CAR)在具体实施方式中，所述嵌合抗原受体包括：(i)特异性结合BCMA的抗体或其片段、CD28或者CD8的跨膜区、CD28的共刺激信号结构域、和CD3δ；或(ii)特异性结合BCMA的抗体或其片段、CD28或者CD8的跨膜区、CD137的共刺激信号结构域、和CD3δ；或(iii)特异性结合BCMA的抗体或其片段、CD28或者CD8的跨膜区、CD28的共刺激信号结构域、CD137的共刺激信号结构域、和CD3δ。在具体实施方式中，所述嵌合受体为TAC，包括：(a)胞外结构域:所述胞外结构域包括具有抗原结合结构域的抗体结构域，和与CD3结合的单链抗体；(b)跨膜区；(c)胞内结构域，所述胞内结构域连接蛋白激酶LCK。在具体实施方式中，所述特异性结合BCMA的抗体或其片段为scFv或VHH。在具体实施方式中，所述特异性结合BCMA的抗体含有SEQIDNO：10所示的HCDR1、SEQIDNO：11所示的HCDR2、SEQIDNO：12所示的HCDR3、以及SEQIDNO：13所示的LCDR1、SEQIDNO：14所示的LCDR2、SEQIDNO：15所示的LCDR3；在一具有实施方式中，所述抗体具有SEQIDNO：17所示的重链可变区和SEQIDNO：18所示的轻链可变区；在一具体实施方式中，所述特异性结合BCMA的抗体具有SEQIDNO：3所示的序列。在具体实施方式中，所述嵌合受体的序列含有SEQIDNO：4、5、6、或7所示的序列。在具体实施方式中，与内源性的TCR和内源性MHC具有活性且表达有嵌合受体的T细胞相比，所述T细胞的体外肿瘤细胞杀伤能力没有降低。在具体实施方式中，所述T细胞应用于同种异体时，具有低同种异体反应活性，且不易被NK细胞所排斥。在具体实施方式中，所述T细胞具有降低的移植物抗宿主反应(GVHD)以及降低的宿主抗移植物反应(HVGR)。在本专利技术的第二方面，提供了第一方面所述的T细胞的用途，用于制备治疗BCMA阳性的肿瘤的药物；在具体实施方式中，所述BCMA阳性的肿瘤本文档来自技高网...

【技术保护点】
表达有嵌合受体的T细胞，所述嵌合受体特异性识别BCMA，其特征在于，所述T细胞内源性TCR分子沉默和内源性MHC分子沉默。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180921 CN 2018111178754;20180928 CN 201811140870表达有嵌合受体的T细胞，所述嵌合受体特异性识别BCMA，其特征在于，所述T细胞内源性TCR分子沉默和内源性MHC分子沉默。


如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述TCR分子沉默是指编码TCR的α和β链中的一种或两种链的基因发生沉默；
优选地，所述TCR分子沉默是指编码TCR的α链的基因(即TRAC基因)发生沉默；
更优选地，所述TCR分子沉默是指编码TCR的α链恒定区的基因发生沉默；
进一步优选地，所述TCR分子沉默是指编码TCR的α链恒定区的基因的第一个外显子发生沉默。


如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述MHC分子是指HLA分子。


如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述HLA分子选自HLA-I类和/或HLA-II类，包含HLA-A、HLA-B、HLA-C，B2M和CIITA分子中的至少一种。


如权利要求4所述的T细胞，其特征在于，所述HLA分子为I类的HLA分子。


如权利要求4所述的T细胞，其特征在于，所述HLA分子为B2M分子。


如权利要求1-6任一所述的T细胞，其特征在于，采用基因编辑技术使内源性TCR分子沉默和内源性MHC分子沉默。


如权利要求7所述的T细胞，其特征在于，所述的基因编辑技术选自CRISPR/Cas技术、人工锌指核酸酶(ZincFingerNucleases，ZFN)技术、转录激活样效应因子(transcriptionactivator-likeeffector,TALE)技术或TALE-CRISPR/Cas技术；优选的，采用CRISPR/Cas技术；更优选地，采用CRISPR/Cas9技术。


如权利要求8所述的T细胞，其特征在于，采用CRISPR/Cas9技术进行B2M分子沉默时，选取的gRNA的序列如SEQIDNO：1所示。


如权利要求8所述的T细胞，其特征在于，采用CRISPR/Cas9技术进行TCR的α链分子沉默时，选取的gRNA的序列如SEQIDNO：2、27、28、或29所示。


如权利要求9或10所述的T细胞，其特征在于，进行B2M分子沉默时，选取的gRNA的序列如SEQIDNO：1所示，进行TCR的α链分子沉默时，选取的gRNA的序列如SEQIDNO：2所示。


如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，所述嵌合受体选自嵌合抗原受体(CAR)或T细胞抗原耦合器(...

【专利技术属性】
技术研发人员：李宗海，廖朝晖，
申请(专利权)人：佧珐药业有限公司，
类型：发明
国别省市：爱尔兰;IE