一种NK滋养层细胞及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种NK滋养层细胞及其应用，所述NK滋养层细胞表达细胞因子组合物，所述细胞因子组合物包括CD86、CD19、IL‑21、CD137L和CD64；所述CD86包括SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。本发明专利技术还提供了一种重组载体、一种重组慢病毒、所述NK滋养层细胞的制备方法和一种NK细胞培养基。通过构建重组载体，包装得到重组慢病毒后，再导入宿主细胞的基因组内，制备得到的NK滋养层细胞可以持续分泌刺激NK细胞增殖与分化的相关蛋白，实现了NK细胞的高效率、低成本扩增，制备方法简单高效，具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种NK滋养层细胞及其应用
本专利技术属于NK细胞培养
，尤其涉及一种NK滋养层细胞及其应用。
技术介绍
自然杀伤细胞(Naturalkillercell，NK细胞)来源于骨髓淋巴样干细胞，广泛存在于淋巴器官和外周组织中，在正常外周血中占淋巴细胞总数的5％～10％，脾脏中占1％～2％，淋巴结和骨髓中也有NK细胞的存在。NK细胞是机体防御感染和防止细胞恶性转化的重要免疫细胞，参与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节等重要的生理过程。目前，NK细胞在肿瘤治疗中的价值逐步得到了重视，但NK细胞的获取较为困难限制了其在免疫治疗方面的发展。CN107267454A公开了一种脐血NK细胞的体外扩增方法及其试剂盒与应用，通过活化培养脐血NK细胞，再添加唑来膦酸和重组IL-2因子对所得脐血NK细胞增殖培养14～35天，即可获得大量的NK细胞。然而，由于脐血和外周血中细胞差异极大，该方法仅适用于脐血，无法应用于外周血中，应用范围较小。目前，NK细胞的培养主要包括滋养层细胞培养和纯因子细胞培养，二者都存在成本极高的问题。如何提供一种成本较低的NK细胞的培养方法，已成为亟待解决的问题。
技术实现思路
针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种NK滋养层细胞及其应用，构建的重组细胞的细胞膜可以表达CD86、CD19、IL-21-CD8α、CD137L和CD64，协同刺激NK细胞长期保持增殖能力，提高扩增效率，诱导NK细胞的分化与成熟，方法简单高效，容易操作，可应用于NK细胞的相关研究中，具有广阔的应用前景。为达此目的，本专利技术采用如下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种NK滋养层细胞，所述NK滋养层细胞表达细胞因子组合物，所述细胞因子组合物包括CD86、CD19、IL-21、CD137L和CD64；所述CD86包括SEQIDNo.1所示的氨基酸序列。SEQIDNo.1：MGLSNILFVMAFLLSGAAPLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYMGRTSFDSDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVLANFSQPEIVPISNITENVYINLTCSSIHGYPEPKKMSVLLRTKNSTIEYDGIMQKSQDNVTELYDVSISLSVSFPDVTSNMTIFCILETDKTRLLSSPFSIELEDPQPPPDHIPWITAVLPTVIICVMVFCLILWKWKKKKRPRNSYKCGTNTMEREESEQTKKREKIHIPERSDEAQRVFKSSKTSSCDKSDTCF。本专利技术中，CD86和CD19可以激活并提升NK细胞对肿瘤细胞和肿瘤相关的巨噬细胞和B细胞的杀伤能力，增殖得到的NK细胞的免疫功能更好；IL-21为活化的T细胞分泌的细胞因子，具有促进骨髓前体细胞增殖以及促进NK细胞增殖、分化和增强细胞毒活性的作用；CD137L属于TNF超家族，与其配体结合后，可以产生共刺激信号促进NK细胞增殖；CD64可以增强NK细胞的ADCC(Antibody-dependentcell-mediatedcytotoxicity，抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用)效应。通过构建表达上述蛋白的重组细胞与分离得到的NK细胞共同培养，可以在体外诱导NK细胞的增殖、分化与成熟，提高了扩增效率，降低了生产成本，应用价值很高。优选地，所述CD19包括SEQIDNo.2所示的氨基酸序列。优选地，所述IL-21通过与CD8α跨膜区融合形成IL-21-CD8α表达在所述NK滋养层细胞表面。优选地，所述IL-21-CD8α包括SEQIDNo.3所示的氨基酸序列。优选地，所述CD137L包括SEQIDNo.4所示的氨基酸序列。优选地，所述CD64包括SEQIDNo.5所示的氨基酸序列。SEQIDNo.2：MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLVVKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLTWSRESPLKPFLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKAWQPGWTVNVEGSGELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVWAKDRPEIWEGEPPCLPPRDSLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSWTHVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNLTMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVSAVTLAYLIFCLCSLVGILHL。SEQIDNo.3：MRSSPGNMERIVICLMVIFLGTLVHKSSSQGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDSGSYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC。SEQIDNo.4：MEYASDASLDPEAPWPPAPRARACRVLPWALVAGLLLLLLLAAACAVFLACPWAVSGARASPGSAASPRLREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE。SEQIDNo.5：MWFLTTLLLWVPVDGQVDTTKAVITLQPPWVSVFQEETVTLHCEVLHLPGSSSTQWFLNGTATQTSTPSYRITSASVNDSGEYRCQRGLSGRSDPIQLEIHRGWLLLQVSSRVFTEGEPLALRCHAWKDKLVYNVLYYRNGKAFKFFHWNSNLTILKTNISHNGTYHCSGMGKHRYTSAGISVTVKELFPAPVLNASVTSPLLEGNLVTLSCETKLLLQRPGLQLYFSFYMGSKTLRGRNTSSEYQILTARREDSGLYWCEAATEDGNVLKRSPELELQVLGLQLPTPVWFHVLFYLAVGIMFLVNTVLWVTIRKELKRKKKWDLEISLDSGHEKKVISSLQEDRHLEEELKCQEQKEEQLQEGVHRKEPQGAT。第二方面，本专利技术提供了一种重组载体，所述重组载体用于制备第一方面所述的NK滋养层细胞。优选地，所述重组载体包括CD86编码序列、CD19编码序列、IL-21-CD8α编码序列、CD137L编码序列或C本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种NK滋养层细胞，其特征在于，所述NK滋养层细胞表达细胞因子组合物，所述细胞因子组合物包括CD86、CD19、IL-21、CD137L和CD64；/n所述CD86包括SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种NK滋养层细胞，其特征在于，所述NK滋养层细胞表达细胞因子组合物，所述细胞因子组合物包括CD86、CD19、IL-21、CD137L和CD64；
所述CD86包括SEQIDNo.1所示的氨基酸序列。


2.根据权利要求1所述的NK滋养层细胞，其特征在于，所述CD19包括SEQIDNo.2所示的氨基酸序列；
优选地，所述IL-21通过与CD8α跨膜区融合形成IL-21-CD8α表达在所述NK滋养层细胞表面；
优选地，所述IL-21-CD8α包括SEQIDNo.3所示的氨基酸序列；
优选地，所述CD137L包括SEQIDNo.4所示的氨基酸序列；
优选地，所述CD64包括SEQIDNo.5所示的氨基酸序列。


3.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体用于制备权利要求1或2所述的NK滋养层细胞；
优选地，所述重组载体包括CD86编码序列、CD19编码序列、IL-21-CD8α编码序列、CD137L编码序列或CD64编码序列中的任意一种或至少两种组合。


4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述CD86编码序列包括SEQIDNo.6所示的核酸序列；
优选地，所述CD19编码序列包括SEQIDNo.7所示的核酸序列；
优选地，所述IL-21-CD8α编码序列包括SEQIDNo.8所示的核酸序列；
优选地，所述CD137L编码序列包括SEQIDNo.9所示的核酸序列；
优选地，所述CD64编码序列包括SEQIDNo.10所示的核...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵礼军，熊建民，
申请(专利权)人：河南省华隆生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41