一种转基因修饰的Daudi细胞及其制备方法、应用技术

本发明专利技术提供了一种转基因修饰的Daudi细胞，修饰有目标基因片段，所述目标基因片段表达mbIL‑21。以灭活的所述转基因修饰的Daudi细胞作为滋养细胞，与单个核细胞共培养得到的NK细胞时，扩增倍数达到1500倍以上；CD3

【技术实现步骤摘要】
一种转基因修饰的Daudi细胞及其制备方法、应用
本专利技术涉及基因工程和细胞生物学领域，尤其是指一种转基因修饰的Daudi细胞及其制备方法、应用。
技术介绍
NK细胞作为固有免疫系统的核心成员，是一群不同于T、B细胞的CD3-CD56+大颗粒淋巴细胞亚群。NK细胞无需抗原致敏就可直接杀伤肿瘤和病毒感染的靶细胞，而且无MHC限制性，应答速度快，在机体抗肿瘤和抗感染免疫早期即可发挥作用。NK细胞识别“敌”与“我”无需通过抗原克隆，而是通过其表面的活化性受体和抑制性受体进行调节，两者间的平衡及相互作用决定NK的细胞激活及静息。NK细胞主要来自于外周血中，而外周血中NK细胞仅占单个核细胞的5-20％，这极大限制了NK细胞在临床级别上的使用。因此，有必要建立一种高效扩增NK细胞的体系为过继性细胞免疫治疗铺平道路。以往的NK细胞扩增方式都是在体外体系中添加细胞因子IL-2，IL-15等促使NK细胞生长，然而这种方法培养出来的细胞数目少纯度低，稳定性也差，且成本较高。最近十年，人们利用基因工程技术将膜结合IL-2，IL-15，IL-18等嵌本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种转基因修饰的Daudi细胞，其特征在于，修饰有目标基因片段，所述目标基因片段表达mbIL-21。/n

【技术特征摘要】
1.一种转基因修饰的Daudi细胞，其特征在于，修饰有目标基因片段，所述目标基因片段表达mbIL-21。


2.如权利要求1所述的转基因修饰的Daudi细胞，其特征在于，所述目标基因片段还表达IL-15、IL-21、4.1-BBL、CD86、CD314、CD16、IL-18、IL-12、CD14中的一种或几种。


3.一种权利要求1或2任一所述的转基因修饰的Daudi细胞的制备方法，其特征在于，包括依次执行的以下步骤：
S1：将目标基因片段插入质粒中，得到重构质粒载体；
S2：将所述重构质粒载体重组至慢病毒中，得到重组慢病毒；
S3：通过所述重组慢病毒转染Daudi细胞，得到转基因修饰的Daudi细胞；
所述目标基因片段包含用于表达mbIL-21的核苷酸序列和/或相应的互补序列，所述用于表达mbIL-21的核苷酸序列为：SEQIDNO：1。


4.如权利要求3所述的转基因修饰的Daudi细胞的制备方法，其特征在于，在所述步骤S2中，所述慢病毒的具体重组方法为：
先按照0.1-0.8×106个/ml的浓度往对数生长期的慢病毒中加入DMEM完全培养基，混匀，置于37℃培养箱中培养，直至慢病毒细胞汇合度达60-70％，得慢病毒悬液；
按照1-6μg/ml的量往所述慢病毒悬液中加入所述重构质粒载体，混匀后，放入37℃、5％CO2培养箱中培养6-12h；弃去旧的DMEM完全培养基，加入新的DMEM完全培养基后再培养24-72h；收集上清液。


5.如权利要求4所述的转基因修饰的Daudi细胞的制备方法，其特征在于，在所述步骤S3中，所述Daudi细胞的具体转染方法为：按照0.2-5×106个/ml的浓度往Daudi细胞中加入无血清培养基，再加入所述重组慢病毒，混合后，在37℃、5％CO2培养箱中培养24-72h，得转基因修饰的Daudi...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭子宽，张涤平，葛四海，谢思伦，
申请(专利权)人：深圳市赛欧细胞生物科技有限公司，北京科霖恩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44