一种人工抗原呈递细胞及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种人工抗原呈递细胞及其制备方法和应用，所述人工抗原呈递细胞表达膜蛋白MICA、IL‑12、CD19和CD86。本发明专利技术采用MICA、IL‑12、CD19和CD86的组合构建人工抗原呈递细胞进行重编程NK细胞培养，实现了短时间内培养获得大量重编程NK细胞的效果，所述重编程NK细胞肿瘤细胞毒性强，在免疫治疗领域具有重要的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种人工抗原呈递细胞及其制备方法和应用
本专利技术属于生物
，涉及一种人工抗原呈递细胞及其制备方法和应用。
技术介绍
近年来细胞免疫疗法在癌症治疗中展现出了巨大的潜力，被认为是最有希望攻克癌症的方法，其中，基于T细胞的免疫治疗技术受到了广泛关注，是目前的研究热点。然而，主要组织相容性复合体(MHC)极大地限制了T细胞免疫治疗的应用范围。与MHC限制的T细胞不同，NK细胞不需要进行HLA配型，因此可以作为异源性的现货细胞药品对病人进行免疫治疗，在临床上具有重要的应用前景。研究人员也在研究T细胞的激活分化机制，尝试对其进行基因改造，获得具有增强的抗肿瘤活性的T细胞。Li等人将小鼠T细胞重编程成为NK样细胞(inducedT-to-naturalkillercells，ITNK细胞)(Li,P.etal.ReprogrammingofTcellstonaturalkiller-likecellsuponBcl11bdeletion.Science329,85-89(2010).)，并于近年采用CRISPR/Cas9技术成功地将人T细胞重编程成为ITNK细胞。但是NK细胞、重编程NK细胞均面临着无法持续增殖的问题。在体外实现重编程NK细胞的大规模扩增是亟待解决的关键问题。近年来，使用基因工程技术构建的人工抗原呈递细胞(滋养层细胞)越来越多地应用于NK细胞的体外扩增。但是重编程NK细胞不同于NK细胞，其具有T细胞和NK细胞双重功能，目前尚无有效的体外扩增和活化重编程NK细胞的方法。
技术实现思路
针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供了一种人工抗原呈递细胞及其制备方法和应用，所述人工抗原呈递细胞表达多种活化重编程NK细胞的配体，显著提高了重编程NK细胞的数量和活性。为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种人工抗原呈递细胞，所述人工抗原呈递细胞表达膜蛋白MICA、IL-12、CD19和CD86。本专利技术中，将MICA、IL-12、CD19和CD86表达于K562表面构建人工抗原呈递细胞，通过与重编程NK细胞表面的受体结合用于活化重编程NK细胞，显著提高了重编程NK细胞的扩增数量和肿瘤细胞毒性。优选地，所述IL-12通过与CD28跨膜区形成融合蛋白、表达在所述人工抗原呈递细胞表面。优选地，所述MICA包括SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；SEQIDNO:1：MGLGPVFLLLAGIFPFAPPGAAAEPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLTEVHLDGQPFLRCDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETKEWTMPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLKSGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASGFYPWNITLSWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICQGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAAAIFVIIIFYVRCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTSDHRDATQLGFQPLMSDLGSTGSTEGA。优选地，所述IL-12包括如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；SEQIDNO:2：MWPPGSASQPPPSPAAATGLHPAARPVSLQCRLSMCPARSLLLVATLVLLDHLSLARNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAGGGGSMCHQQLVISWFSLVFLASPLVAIWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYY。优选地，所述CD28跨膜区包括SEQIDNO:3所示的氨基酸序列；SEQIDNO:3：IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV。优选地，所述CD19包括SEQIDNO:4所示的氨基酸序列；SEQIDNO:4：MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLVVKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLTWSRESPLKPFLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKAWQPGWTVNVEGSGELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVWAKDRPEIWEGEPPCLPPRDSLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSWTHVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNLTMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVSAVTLAYLIFCLCSLVGILHL。优选地，所述CD86包括SEQIDNO:5所示的氨基酸序列；SEQIDNO:5：MGLSNILFVMAFLLSGAAPLKIQAYFNETADLPCQFANSQNQSLSELVVFWQDQENLVLNEVYLGKEKFDSVHSKYMGRTSFDSDSWTLRLHNLQIKDKGLYQCIIHHKKPTGMIRIHQMNSELSVLANFSQPEIVPISNITENVYINLTCSSIHGYPEPKKMSVLLRTKNSTIEYDGIMQKSQDNVTELYDVSISLSVSFPDVTSNMTIFCILETDKTRLLSSPFSIELEDPQPPPDHIPWITAVLPTVIICVMVFCLILWKWKKKKRPRNSYKCGTNTMEREESEQTKKREKIHIPERSDEAQRVFKSSKTSSCDKSDTCF。第二方面，本专利技术提供了一种表达载体，所述表达载体包括MICA编码基因、IL-12和CD28跨膜区融合蛋白编码基因、CD19编码基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人工抗原呈递细胞，其特征在于，所述人工抗原呈递细胞表达膜蛋白MICA、IL-12、CD19和CD86。/n

【技术特征摘要】
1.一种人工抗原呈递细胞，其特征在于，所述人工抗原呈递细胞表达膜蛋白MICA、IL-12、CD19和CD86。


2.根据权利要求1所述的人工抗原呈递细胞，其特征在于，所述IL-12通过与CD28跨膜区形成融合蛋白、表达在所述人工抗原呈递细胞表面。


3.根据权利要求1或2所述的人工抗原呈递细胞，其特征在于，所述MICA包括SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；
优选地，所述IL-12包括如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；
优选地，所述CD28跨膜区包括SEQIDNO:3所示的氨基酸序列；
优选地，所述CD19包括SEQIDNO:4所示的氨基酸序列；
优选地，所述CD86包括SEQIDNO:5所示的氨基酸序列。


4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括MICA编码基因、IL-12和CD28跨膜区融合蛋白编码基因、CD19编码基因和CD86编码基因。


5.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体包括病毒载体；
优选地，所述病毒载体包括慢病毒载体、逆转录病毒载体或腺相关病毒载体中的任意一种，优选为慢病毒载体。


6.一种重组慢病毒，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤朝阳，秦乐，吴迪，冯世忠，冯嘉昆，杨乐旋，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：广东昭泰体内生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44