CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体及其应用，所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域和信号转导结构域；所述抗原结合结构域包括抗CD19单链抗体和抗CD20单链抗体。本发明专利技术的抗CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体对CD19阳性和/或CD20阳性细胞具有靶向活性，表达抗CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体的T细胞对CD19抗原表达量少或不表达的肿瘤细胞、CD20抗原表达量少或不表达的肿瘤细胞均具有杀伤作用，有利于避免免疫逃逸现象，降低了疾病复发的可能性。

【技术实现步骤摘要】
CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体及其应用
本专利技术属于生物医药
，涉及CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体及其应用。
技术介绍
近年来，随着肿瘤免疫学理论和临床技术的发展，嵌合抗原受体T细胞疗法(ChimericantigenreceptorT-cellimmunotherapy，CAR-T)成为最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一。嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，CAR)由肿瘤相关抗原结合区、胞外铰链区、跨膜区以及胞内信号转导区组成。通常，CAR分子包含的抗体单链片段可变区(singlechainfragmentvariable，scFv)对肿瘤相关抗原(tumorassociatedantigen，TAA)具有特异性结合作用，其通过铰链和跨膜区与信号传导分子的胞质结构域偶联。目前，CAR-T细胞疗法已经广泛应用于治疗B细胞恶性肿瘤，靶向CD19的CAR-T细胞是CAR-T疗法治疗B细胞恶性肿瘤的先驱，为治疗B细胞恶性肿瘤提供了有效方案。然而，医学诊断表明，很多肿瘤细胞并不表达专一、特异的肿瘤抗原。例如，某些血液肿瘤中的肿瘤细胞并不表达CD19分子，而表达CD20分子，仅利用靶向CD19分子的CAR-T细胞治疗效果不佳，一段时间后部分患者出现了肿瘤复发现象。肿瘤异质性已成为阻碍细胞疗法应用于实体肿瘤治疗的一大障碍。因此，有必要开发双靶向CD19和CD20分子的嵌合抗原受体，提高CAR-T细胞对肿瘤细胞的靶向和清除作用。
技术实现思路
针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供了CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体及其应用，所述嵌合抗原受体可以同时靶向CD19和CD20分子，在治疗血液恶性疾病方面具有广阔的前景。为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域和信号转导结构域；所述抗原结合结构域包括抗CD19单链抗体和抗CD20单链抗体。本专利技术中，与单靶点嵌合抗原受体相比，抗CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体对CD19阳性和/或CD20阳性细胞具有更强的靶向活性，对CD19抗原表达量少或不表达的肿瘤细胞、CD20抗原表达量少或不表达的肿瘤细胞均具有高效的靶向作用，有利于避免免疫逃逸现象。优选地，所述抗CD19单链抗体包括SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；SEQIDNO:1：DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPPRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSAYTFGQGTKLEIKSGGGGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRHGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNQYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLDLQMNSLRVEDTAVYYCARRSITWYGGFDIWGQGTMVTVSSAQTTAPSVYPLAP。优选地，所述抗CD20单链抗体包括SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；SEQIDNO:2：DIQMTQSPSTMSTSVGDRVSVNCKASQNVGTNVAWYQQKPGKSPKGLIYSASFRYSGVPSRFTGSGSGTDFTLTIFNVQPDDLAEYFCQQYNNYPLTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSSEGSTKGEVQVEESGGGLVQPGGSMRLSCVASGFSFNNYWMNWVRQSPGKGLEWVAEIRLKSNNYATHYVDSVKGRFTISRDDSKSSVYLQMNNLRAEDTGIYYCTGWDDYAMDHWGQGISVTVSS。优选地，所述抗CD19单链抗体和抗CD20单链抗体通过连接肽连接。优选地，所述跨膜结构域包括CD28和/或CD8α。优选地，所述信号转导结构域包括CD3ζ、4-1BB、CD28、TLR1、TLR2、CD27、OX40或DAP10中的任意一种或至少两种的组合。优选地，所述嵌合抗原受体还包括信号肽。优选地，所述信号肽包括CD8α信号肽。优选地，所述嵌合抗原受体由CD8α信号肽、抗CD19单链抗体、连接肽、抗CD20单链抗体、CD8α铰链区和跨膜区、TLR1和CD3ζ串联组成。优选地，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示；SEQIDNO:3：MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPPRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSAYTFGQGTKLEIKSGGGGQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRHGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNQYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLDLQMNSLRVEDTAVYYCARRSITWYGGFDIWGQGTMVTVSSAQTTAPSVYPLAPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSTMSTSVGDRVSVNCKASQNVGTNVAWYQQKPGKSPKGLIYSASFRYSGVPSRFTGSGSGTDFTLTIFNVQPDDLAEYFCQQYNNYPLTFGGGTKLEIKGSTSGSGKPGSSEGSTKGEVQVEESGGGLVQPGGSMRLSCVASGFSFNNYWMNWVRQSPGKGLEWVAEIRLKSNNYATHYVDSVKGRFTISRDDSKSSVYLQMNNLRAEDTGIYYCTGWDDYAMDHWGQGISVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNIPLEELQRNLQFHAFISYSGHDSFWVKNELLPNLEKEGMQICLHERNFVPGKSIVENIITCIEKSYKSIFVLSPNFVQSEWCHYELYFAHHNLFHEGSNSLILILLEPIPQYSIPSSYHKLKSLMARRTYLEWPKEKSKRGLFWANLRAAINIKLTEQAKKRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR。第二方面，本专利技术提供了一种编码基因，所述编码基因编码第一方面所述的嵌合抗原受体。优选地，所述编码基因包括抗CD19单链抗体编码序列和抗CD20单链抗体编码序列。优选地，所述抗CD19单链抗体编码序列包括SEQIDNO:4所示的核酸序列；SEQIDNO:4：gacatccagatgacccagagccccagcaccct本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域和信号转导结构域；/n所述抗原结合结构域包括抗CD19单链抗体和抗CD20单链抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种CD19和CD20双靶点嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域和信号转导结构域；
所述抗原结合结构域包括抗CD19单链抗体和抗CD20单链抗体。


2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述抗CD19单链抗体包括SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；
优选地，所述抗CD20单链抗体包括SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。


3.根据权利要求1或2所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述抗CD19单链抗体和抗CD20单链抗体通过连接肽连接。


4.根据权利要求1-3任一项所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述跨膜结构域包括CD28和/或CD8α；
优选地，所述信号转导结构域包括CD3ζ、4-1BB、CD28、TLR1、TLR2、CD27、OX40或DAP10中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述嵌合抗原受体还包括信号肽；
优选地，所述信号肽包括CD8α信号肽；
优选地，所述嵌合抗原受体由CD8α信号肽、抗CD19单链抗体、连接肽、抗CD20单链抗体、CD8α铰链区和跨膜区、TLR1和CD3ζ串联组成；
优选地，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示。


5.一种编码基因，其特征在于，所述编码基因编码权利要求1-4任一项所述的嵌合抗原受体；
优选地，所述编码基因包括抗CD19单链抗体编码序列和抗CD20单链抗体编码序列；
优选地，所述抗CD19单链抗体编码序列包括SEQIDNO:4所示的核酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤朝阳，秦乐，吴迪，冯世忠，冯嘉昆，杨乐旋，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：广东昭泰体内生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44