【技术实现步骤摘要】
一种CHO细胞组合糖类补料培养基
本专利技术涉及生物
，具体属于CHO细胞培养基领域。
技术介绍
中国仓鼠卵巢细胞（CHO）已被广泛的用于治疗性抗体的商业生产，随着对治疗性抗体需求的不断激增，CHO细胞使用的普遍性会持续存在。通过动物细胞培养产生基因工程外源蛋白是获得治疗目的的单克隆抗体的常用方法，但是由于其表达量低于原核和酵母表达系统，因此提高外源基因在CHO细胞中的表达效率十分重要。优化培养基是提高细胞活性，激活表达通路的重要方式。当前针对CHO细胞无血清培养基的研究，主要方法是在基础培养基如DMEM/F12的基础上，添加蛋白水解物，胰岛素、转铁蛋白、生长因子、维生素、脂类、微量元素等。现有技术中已有多种培养基优化的研究基础，以优化培养基组分、添加剂、补料、浓度等为几个主要研究方向，其中，培养温度变化是提高外源蛋白表达的重要方式，US20170356022A1发现在指数生长极端之后将生产培养物冷却到30-33℃的温度T生产，低于细胞系通常培养的温度，可以提高目的蛋白的稳定性；CN107974432A，发现在...
【技术保护点】
1.一种CHO细胞培养方法，其特征在于：培养过程中采用补料培养基在不同培养温度节点添加，所述温度节点依次为30℃-34℃-37℃-34℃-32℃，其中培养基中的糖类选自如下糖类中的一种或多种，单糖：葡萄糖，半乳糖，核糖，果糖，木糖；二糖：麦芽糖，麦芽酮糖，异麦芽糖，甘露二糖，纤维二糖，黑曲霉二糖；多糖：葡聚糖，纤维素，淀粉，糖原，支链淀粉，凝胶多糖，香菇多糖，酵母多糖，右旋糖酐。/n
【技术特征摘要】
1.一种CHO细胞培养方法，其特征在于：培养过程中采用补料培养基在不同培养温度节点添加，所述温度节点依次为30℃-34℃-37℃-34℃-32℃，其中培养基中的糖类选自如下糖类中的一种或多种，单糖：葡萄糖，半乳糖，核糖，果糖，木糖；二糖：麦芽糖，麦芽酮糖，异麦芽糖，甘露二糖，纤维二糖，黑曲霉二糖；多糖：葡聚糖，纤维素，淀粉，糖原，支链淀粉，凝胶多糖，香菇多糖，酵母多糖，右旋糖酐。
2.根据权利要求1所述的CHO细胞培养方法，所述培养过程的温度变化节点位于特定的培养时间，0-48h培养温度为30℃，48-80h培养温度为34℃，80-120h培养温度为37℃，120h-140h培养温度为34℃，140h-336h培养温度为32℃。
3.根据权利要求2所述的CHO细胞培养方法，所述的温度变化方式为，从30℃提升到33℃的提升方式为：30℃12h，31℃12h，32℃12h，33℃12h；从34℃提升到36℃的提升方式为：34℃12h，35℃10h，36℃10h；从37℃降低到35℃的下降方式为：37℃13h，36℃13h，35℃14h；从34℃降低到33℃的下降方式为：34℃10h，33℃10h。
4.根据权利要求3所述的CHO细胞培养方法，所述的补料培养基1-5中的糖的种类和浓度是不同的，所述添加方式为（单位mg/L）：
补料1
补料2
补料3
补料4
补料5
对比例1
30℃
34℃
37℃
34℃
32℃
葡萄糖
1000
3000
8000
3000
2000
半乳糖
200
500
3000
800
600
麦芽糖
500
1000
2000
1600
1500
甘露二糖
500
500
500
800
1000
葡聚糖
1500
1800
2000
2000
2000
淀粉
800
700
600
500
400
对比例2
葡萄糖
1000
3000
8000
3000
2000
核糖
200
500
1000
800
800
麦芽糖
500
1000
2000
1600
1500
纤维二糖
200
300
400
300
200
葡聚糖
1500
1800
2000
2000
2000
纤维素
500
500
400
400
300
对比例3
半乳糖
200
500
3000
800
600
果糖
2000
1800
1600
1500
1400
麦芽酮糖
100
400
600
500
500
甘露二糖
500
500
500
800
1000
纤维素
500
500
400
400
300
糖原
2000
1800
1600
1500
1400
对比例4
核糖
200
500
1000
800
800
果糖
2000
1800
1600
1500
1400
异麦芽糖
1000
1000
1000
800
600
纤维二糖
200
300
400
300
200
支链淀粉
700
800
900
800
700
纤维素
500
500
400
400
300
对比例5
果糖
2000
1800
1600
1500
1400
木糖
1000
2000
3000
4000
3000
麦芽酮糖
100
400
600
500
500
纤维二糖
200
300
400
300
200
葡聚糖
1500
1800
2000
2000
2000
凝胶多糖
100
200
300
400
500
。
5.根据权利要求4所述的CHO细胞培养方法，所述的补料培养基中还包括脂类、氨基酸、维生素、无机盐等。
6.根据权利要求5所述的CHO细胞培养方法，所述的补料培养基中还包括组合培养基成分（单位mg/L）：
补料1
补料2
补料3
补料4
补料5
亚麻酸
0.04-0.12
0.04-0.12
0.04-0.12
0.04-0.12
0.04-0.12
亚油酸
0.08-0.27
0.08-0.27
0.08-0.27
0.08-0.27
0.08-0.27
胆固醇
1.5-7.5
1.5-7.5
1.5-7.5
1.5-7.5
1.5-7.5
花生四烯酸
0.001-0.007
0.001-0.007
0.001-0.007
0.001-0.007
0.001-0.007
孕酮
0.02-0.15
0.02-0.15
0.02-0.15
0.02-0.15
0.02-0.15
棕榈酸
0.15-0.30
0.15-0.30
0.15-0.30
0.15-0.30
0.15-0.30
胰岛素
0.01-0.05
0.01-0.05
0.01-0.05
0.01-0.05
0.01-0.05
甘氨酸
28-84
28-84
28-84
28-84
28-84
L-异亮氨酸
80-250
80-250
80-250
80-250
80-250
L-亮氨酸
85-270
85-270
85-270
85-270
85-270
L-组氨酸
45-13...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖志华，
申请(专利权)人：上海奥浦迈生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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