调节T细胞功能和反应的方法技术

本公开涉及产生表现出增强的记忆T细胞表型的T细胞的方法，该方法包括：调节T细胞群以增强HMGY的表达和/或功能。在实施方案中，该方法可以包括将编码HMGY的多核苷酸引入T细胞群体，其与不包含该多核苷酸的T细胞相比，HMGY的表达更高，并且该T细胞群体的记忆T细胞表型与不包含多核苷酸的T细胞相比增强了。在实施方案中，该方法可以包括引入编码与HMGY相关的一个或多个基因的多核苷酸，例如，与HMGY相关的信号传导途径的上游或下游基因和/或与HMGY相关的转录因子。

【技术实现步骤摘要】
调节T细胞功能和反应的方法
本公开涉及用于扩增和维持基因修饰的细胞的组合物和方法，及其在治疗包括癌症在内的疾病中的用途。
技术介绍
基因靶向某些恶性肿瘤的T细胞已显示出巨大的临床成果。在CAR-T细胞疗法期间，医生会抽取患者的血液并获取其细胞毒性T细胞。在实验室中对细胞进行改造，以攻击特定癌症。基因组编辑技术的最新进展使科学家能够调节T细胞中的基因表达，以增强效应子功能或绕过肿瘤免疫抑制和代谢不利的肿瘤微环境。因此，需要调节T细胞以改进免疫疗法。
技术实现思路
实施方案涉及产生表现出增强的记忆T细胞表型的T细胞的方法，该方法包括：调节T细胞群以增强HMGY的表达和/或功能。例如，该方法可以包括将编码HMGY的多核苷酸引入T细胞群体，其与不包含多核苷酸的T细胞相比，HMGY的表达更高，并且该T细胞群体的记忆T细胞表型与不包含多核苷酸的T细胞相比增强了。在实施方案中，该方法可以包括引入编码与HMGY相关的一个或多个基因的多核苷酸，例如，与HMGY相关的信号传导途径的上游或下游的基因和/或与HMGY相关的转录因子。一些实施方案涉及产生表现出增强的记忆T细胞表型的T细胞的方法，该方法包括：将编码HMGY的多核苷酸引入T细胞群中，其中与不包含所述多核苷酸的T细胞相比，HMGY的表达更高。与不包含多核苷酸的T细胞相比，增强了T细胞群体的记忆T细胞表型。在实施方案中，与不包含多核苷酸的T细胞相比，CD62L和/或CCR7基因表达水平增强。在一些实施方案中，该方法进一步包括培养并测量T细胞群的扩增。在一些实施方案中，与不包含多核苷酸的T细胞相比，T细胞群体的扩增增强了。本
技术实现思路
不旨在标识所要求保护的主题的关键特征或必要特征，也不旨在用于限制所要求保护的主题的范围。附图说明参照附图描述具体实施方式。在不同附图中使用相同的参考数字表示类似或相同的项目。图1显示了HMGY在各种细胞中的表达。图2和图3为流式细胞术结果，显示了各种细胞中标志物CD62L和CCR7的表达。图4和5为流式细胞术结果，显示了各种细胞的标志物KLRG和CD137的表达。图6和7为流式细胞术结果，显示了各种细胞的扩增。具体实施方式除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。尽管可以在本公开的实践或测试中使用与本文描述的那些类似或等同的任何方法和材料，但是描述了优选的方法和材料。出于本公开的目的，以下术语定义如下。本文使用冠词“一(a)”和“一个(an)”指的是一个或多于一个(即，指的是至少一个)该冠词的语法对象。举例来说，“元件”表示一个元件或多于一个元件。所谓“约”是指数量，水平，数值，数量，频率，百分比，尺寸，大小，数量，重量或长度相对于参考数量，水平，数值，数量，频率，百分比，尺寸，大小，数量，重量或长度变化多达20％,15％,10％,9％,8％,7％,6％，4％,3％,2％或1％。如本文所用，术语“激活”或“活化”是指已经充分刺激以诱导可检测的细胞增殖的细胞的状态。激活还可以与诱导的细胞因子产生和可检测的效应子功能相关联。术语“活化/激活的T细胞”特别指正在进行细胞分裂的T细胞。术语“抗体”以最广义使用，是指单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)，多克隆抗体，多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出所需的生物学活性或功能即可。本公开内容中的抗体可以以多种形式存在，包括例如多克隆抗体；多克隆抗体、单克隆抗体、Fv、Fab、Fab'和F(ab')2片段；以及单链抗体和人源化抗体(Harlow等，1999，In:UsingAntibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,NY；Harlow等，1989，In:Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarbor,NewYork；Houston等人；1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA85：5879-5883；Bird等人，1988，Science242：423-426。术语“抗体片段”是指全长抗体的一部分，例如，抗体的抗原结合或可变区。抗体片段的其他实例包括Fab，Fab'，F(ab')2和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子；由抗体片段形成的多特异性抗体。术语“Fv”是指包含完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。该片段由紧密结合，非共价结合的一个重链和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。通过这两个结构域的折叠，产生六个高变环(3个环来自H链，3个环来自L链)，这些氨基酸贡献了氨基酸残基以进行抗原结合并赋予抗体抗原结合特异性。但是，即使单个可变域(或仅包含对抗原具有特异性的三个互补决定区(CDR)的Fv的一半)也具有识别和结合抗原的能力，尽管亲和力低于整个结合位点(二聚体)。如本文所用，“抗体重链”是指以天然存在的构型存在于所有抗体分子中的两种类型的多肽链中的较大者。如本文所用，“抗体轻链”是指以天然存在的构型存在于所有抗体分子中的两种类型的多肽链中的较小者。κ和λ轻链是指两种主要的抗体轻链同种型。术语“合成抗体”是指使用重组DNA技术产生的抗体，例如由噬菌体表达的抗体。该术语还包括通过合成编码抗体的DNA分子和DNA分子的表达以获得抗体或获得编码抗体的氨基酸而产生的抗体。使用本领域可获得且众所周知的技术获得合成DNA。术语“抗原”是指引起免疫应答的分子，其可以涉及抗体产生或特异性免疫活性细胞的活化或两者。抗原包括任何大分子，包括所有蛋白质或肽，或来源于重组或基因组DNA的分子。例如，包含编码引起免疫应答的蛋白质或肽的核苷酸序列或部分核苷酸序列的DNA，因此编码如本文所用的术语“抗原”。抗原不需要仅由基因的全长核苷酸序列编码。可以从包括组织样本，肿瘤样本，细胞或生物流体的生物样本产生，合成或衍生抗原。如本文所用，术语“抗肿瘤作用”是指与肿瘤体积减少，肿瘤细胞数目减少，转移数目减少，肿瘤细胞增殖减少，肿瘤细胞减少有关的生物学作用。肿瘤细胞的存活，具有肿瘤细胞的受试者的预期寿命的增加，或与癌症状况相关的各种生理症状的改善。首先，也可以通过肽，多核苷酸，细胞和抗体在预防肿瘤发生方面的能力来表现出“抗肿瘤作用”。术语“自身抗原”是指被免疫系统错误地识别为外源的内源性抗原。自身抗原包括细胞蛋白，磷蛋白，细胞表面蛋白，细胞脂质，核酸，糖蛋白，包括细胞表面受体。术语“自体”用于描述来自同一受试者的材料，稍后将其重新引入受试者。术语“同种异体”用于描述衍生自相同物种的不同受试者的移植物。例如，供体受试者可以与受体受试者相关或不相关，但供体受试者具有与受体受试者相似的免疫系统标志物。术语“异种”用于描述源自不同物种的受试者的移植物。例如，供体受试者来自与受体受试者不同的物种，供体受试者和受体受试者可以在遗传上和免疫学上不相容。...

【技术保护点】
1.一种产生表现出增强的记忆T细胞表型的T细胞的方法，该方法包括：将编码高迁移率基团Y(HMGY)的多核苷酸引入T细胞群，其中与不包含多核苷酸的T细胞相比，HMGY的表达更高，并增强了T细胞群的记忆T细胞表型。/n

【技术特征摘要】
20190724 CN 20191067016861.一种产生表现出增强的记忆T细胞表型的T细胞的方法，该方法包括：将编码高迁移率基团Y(HMGY)的多核苷酸引入T细胞群，其中与不包含多核苷酸的T细胞相比，HMGY的表达更高，并增强了T细胞群的记忆T细胞表型。


2.根据权利要求1所述的方法，其中包含HMGY多核苷酸的T细胞群体与不包含所述多核苷酸的T细胞相比，CD62L和/或CCR7的基因表达水平增强。


3.根据权利要求1所述的方法，其中所述多核苷酸包含SEQIDNO：61或SEQIDNO：61和63的核苷酸，并且HMGY过表达。


4.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括：使所述T细胞群与所述T细胞群结合的抗原接触。


5.根据权利要求4所述的方法，其中所述包含HMGY多核苷酸的T细胞群与不包含HMGY多核苷酸的T细胞相比，CD137和/或KLRG的基因表达水平降低。


6.根据权利要求1所述的方法，其中所述增强的记忆T细胞表型包括CD62L和/或CCR7的基因表达水平的增加和/或所述增强的记忆T细胞表型包括CD137和/或KLRG的基因表达水平的降低。


7.根据权利要求1所述的方法，其中所述T细胞群包含抗原结合分子。


8.根据权利要求7所述的方法，其中抗原结合分子是嵌合抗原受体(CAR)，其包含抗原结合结构域，跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。


9.根据权利要求8所述的方法，其中与肿瘤抗原结合的抗原结合结构域选自：TSHR，CD19，CD123，CD22，CD30，CD171，CS-1，CLL-1，CD33，EGFRvIII，GD2，GD3，BCMA，TnAg，PSMA，ROR1，FLT3，FAP，TAG72，CD38，CD44v6，CEA，EPCAM，B7H3，KIT，IL-13Ra2，间皮素，IL-11Ra，PSCA，PRSS21，VEGFR2，LewisY，CD24，PDGFR-beta，SSEA-4，CD20，叶酸受体α，ERBB2(Her2/neu)，MUC1，EGFR，NCAM，Prostase，PAP，ELF2M，EphrinB2，IGF-1受体，CAIX，LMP2，gp100，bcr-abl，酪氨酸酶，EphA2，岩藻糖基GM1，sLe，GM3，TGS5，HMWMAA，o-乙酰-GD2，叶酸受体β，TEM1/CD248，TEM7R，CLDN6，GPRC5D，CXORF61，CD97，CD179a，ALK，聚唾液酸，PLAC1，GloboH，NY-BR-1，UPK2，HAVCR1，ADRB3，PANX3，GPR20，...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒲程飞，沈晓钢，肖磊，
申请(专利权)人：上海斯丹赛生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31