【技术实现步骤摘要】
一种绵羊子宫内膜上皮细胞系的建立方法及应用
本专利技术属于生物
，尤其涉及一种绵羊子宫内膜上皮细胞系的建立方法及应用。
技术介绍
子宫内膜上皮细胞在胚胎与母体“对话”的过程中充当了极其重要的角色，对动物繁育至关重要。作为卵巢激素作用的靶组织，子宫内膜与胚胎附植密切相关，在胚胎着床和子宫内膜容受性建立的过程中，发生了重要的形态和功能变化，在生殖生理的研究中占重要地位。子宫内膜在妊娠过程中受各种因素调节的复杂机制仍未研究清楚，因此需要建立一个体外模型来研究其复杂的内膜功能。永生化细胞系概念的提出为模型的建立提供理论基础，在体外实现细胞的永生化有多种方法，但最为研究者所接受的方法是通过导入外源hTERT来实现细胞的永生化，并且该方法已经得到大量基础实验的验证，但各个试验在导入外源基因的方式和方法上各不相同，其中大都使用商品化的真核表达载体携带外源hTERT基因来转染细胞。而使用普通商品化载体转染细胞不仅整合效率低且载体和外源基因容易被沉默，导致目的基因不能正常表达，并且会影响细胞正常的生理状态。专利技...
【技术保护点】
1.一种绵羊子宫内膜上皮细胞系的建立方法，其特征在于：包括利用通用PB转座子载体将hTERT基因导入绵羊子宫内膜上皮细胞中。/n
【技术特征摘要】
1.一种绵羊子宫内膜上皮细胞系的建立方法，其特征在于：包括利用通用PB转座子载体将hTERT基因导入绵羊子宫内膜上皮细胞中。
2.根据权利要求1所述的一种绵羊子宫内膜上皮细胞系的建立方法，其特征在于：所述导入方法包括脂质体转染法。
3.根据权利要求2所述的一种绵羊子宫内膜上皮细胞系的建立方法，其特征在于：待细胞转染2–4天后，用嘌呤霉素筛选阳性克隆，当未转染质粒细胞完全死亡且出现阳性克隆细胞团后，挑取暗视野下激发绿色荧光的细胞单克隆，于嘌呤霉素浓度减半、37℃、5％的CO2培养箱内进行扩大培养；选取阳性克隆细胞培养、分选，获取传代50次以上的永生化绵羊子宫内膜上皮细胞系。
4.根据权利要求3所述的一种绵羊子宫内膜上皮细胞系的建立方法，其特征在于：所述嘌呤霉素浓度为5μg/mL。
5.根据权利要求2所述的一种绵羊子宫内膜上皮细胞系的建立方法，其特征在于：所述脂质体转染的具体方法包括：
(1)转染前接种第3代原代培养的绵羊子宫内膜上皮细...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡广东，谷新利，郝科兴，王静，凌芳，黄涛，龙德智，陈慧慧，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65
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