核酸提取方法和核酸提取筒技术

本公开内容提供了用于在同一区室中执行下列步骤的核酸提取方法，所述步骤包括：在含有核酸的样品上实施超声波处理；通过使用吸附载体吸附样品中包含的物质；通过拦截在电泳现象中移动的核酸来浓缩核酸。根据该核酸提取方法，可以在同一区室中进行超声波处理、吸附处理和电泳处理。因此，可以除去为了每种处理而将样品从一个区室转移到另一个区室的操作。

【技术实现步骤摘要】
核酸提取方法和核酸提取筒背景一般而言，本公开内容涉及核酸提取方法和核酸提取筒(cartridge)。更具体而言，本公开内容涉及用于从样品中提取核酸的方法，所述方法是通过对样品实施超声处理、从样品中吸附外源物质等的处理，在同一通道中对核酸进行电泳处理；还涉及适用于所述方法的核酸提取筒。核酸扩增反应方法例如PCR(聚合酶链式反应)方法和LAMP(环介导等温扩增)方法适用于生物技术的多个领域。例如，在医学领域进行的基于DNA和/或RNA碱基序列的诊断，而DNA评估(如鉴别遗传改造的植物)则在农业领域得以实际应用。在核酸扩增反应中，为了能够检测核酸，以高效率扩增样品中极小量的核酸。如果包含在样品中的核酸的量非常小，则在一些情况下，所述量可能小于检测下限。此外，如果包含在样品中的核酸浓度非常低，则在一些情况下不能检测到核酸，因为具有可导入到反应区域中的量的样品中未含有足以扩增的核酸。可以通过使用下文描述的有效方法，解决在此情况下产生的问题。核酸在导入反应区域前，是经过精制、浓缩和提取的。如普遍已知的，过去由于提取核酸的方法包括使用酚、氯仿或乙醇的方法，使用柱或过滤器的方法，以及使用磁性二氧化硅珠的方法。柱子和过滤器是用于吸附核酸的。例如，日本专利公开号2005-080555公开了用于浓缩核酸的方法，通过使用能够吸附核酸的多孔载体。此外，用于在毛细管电泳现象中浓缩核酸的方法公开在“On-linesamplepreconcentrationincapillaryelectrophoresis:Fundamentalsandapplications.”JournalofChromatographyA.第1184期(2008)第504-541页中。概述在过去的方法中使用酚、氯仿或乙醇，但是必须利用有害的有机溶剂，花费大量精力进行离心分离处理等。此外，在使用用于吸附核酸的柱或过滤器的方法中，柱或过滤器对阻塞状态是敏感的，导致了操作不便，该操作不便会产生问题。理想的是提供这样的核酸提取方法，所述方法允许进行简单的操作，并且能够在短时间内从样品中高效提取核酸。为了解决上述问题，本公开内容提供了用于在同一区室(cell)中执行下列步骤的核酸提取方法，所述步骤包括：对含有核酸的样品实施超声波处理；通过使用吸附载体吸附所述样品中包含的物质；和通过拦截(damming)在电泳现象中移动的所述核酸来浓缩所述核酸。如上所述，核酸提取方法能够在同一区室中执行超声波处理、吸附处理和电泳处理。超声波核酸提取方法允许消除针对每一步处理的将样品从区室内转移(translocate)到另一个区室的操作。此外，理想的是使用阳离子交换树脂或沸石作为吸附载体。此外，理想的是使用强酸性阳离子交换树脂作为阳离子交换树脂。此外，理想的是在样品掺混珠状颗粒之后进行超声波处理。此外，理想的是所述物质均为除核酸以外的各种外源物质(foreignsubstance)。此外，理想的是对样品实施超声波处理的步骤是在使用缓冲溶液稀释样品后，对样品实施超声波处理的步骤，和所述缓冲溶液的pH具有在4.0至8.0范围内的值。此外，理想的是缓冲溶液含有增稠剂。此外，理想的是增稠剂含有聚乙二醇和/或羟乙基纤维素。应注意的是，上述区室主要表示后文描述的用于提取核酸的筒。此外，上述外源物质主要表示在分析样品所含的核酸时检测到的具体物质。具体物质包括各种非必需蛋白质、肽、糖、盐和金属离子等。此外，为了解决上述问题，本公开内容还提供了核酸提取筒，包括：通道，所述通道允许含有核酸的样品导入到所述通道中；分别位于所述通道每一端的电极；拦截部分，其构造将所述通道分为负极侧区域和正极侧区域，并拦截所述核酸；设置在所述负极侧区域中的吸附载体，其吸附包含在所述样品中的物质；和超声波产生部分，其构造为用于对所述样品进行超声波处理。此外，上述超声波产生部分是作为与所述电极之一相同的构件(member)而构成的。此外，理想的是拦截部分是透析膜或聚合物凝胶(polymergel)。此外，理想的是超声波产生部分是超声波探针(ultrasonicprobe)或超声波喇叭(ultrasonichorn)。如上所述，本公开内容提供了这样的核酸提取方法，所述方法允许简单地进行操作，并且能够在短时间内从样品中高效地提取核酸。附图简介图1是解释性的模式图，显示了根据本公开内容的第一个实施方案的核酸提取筒的构造。图2A至2D是解释性的模式图，涉及对根据本公开内容的第一个实施方案的核酸提取方法步骤的描述。图3是解释性的模式图，显示了根据本公开内容的第一个实施方案的修改方式的核酸提取筒的构造。图4显示的图分别表示沸石对样品的吸附率。图5显示的图分别表示强酸性阳离子交换树脂对样品的吸附率。和图6显示的图表示样品的LAMP反应的结果。具体实施方案的详述本公开内容的优选实施方案解释如下。应注意，下述待描述的作为本公开内容的实施方案的实施方案只是本公开内容的典型实施方式，不视为缩小本公开内容范围的限制。实施方案按下列顺序描述。1、根据本公开内容的第一个实施方案的核酸提取筒，针对所述筒的核酸提取方法，和用于生产所述核酸提取筒的方法。(1)核酸提取筒(2)核酸提取方法(3)生产核酸提取筒的方法2、根据本公开内容的第一个实施方案的修改方式的核酸提取筒，针对所述筒的核酸提取方法，和用于生产所述核酸提取筒的方法1、根据本公开内容的第一个实施方案的核酸提取筒，针对所述筒的核酸提取方法，和用于生产所述核酸提取筒的方法(1)核酸提取筒图1是解释性的模式图，显示了根据本公开内容的第一个实施方案的核酸提取筒1的构造。由图1的参考编号1所表示的核酸提取筒具有形成于基体材料中的通道11、正极12和负极13。正极12和负极13分别位于通道11两端的一侧。可以将样品导入到通道11的内部。在通道11的正极12和通道11的负极13之间提供了透析膜14。透析膜14位于正极12和负极13之间，将通道11的内部分为正极侧区域112和负极侧区域113。此外。正极12和负极13连接在构造中的电源V上，允许向导入通道11内部的样品上施加电压或去除电压。在上部，吸附载体容纳在通道11的负极侧区域113内。此外，超声波喇叭(horn)15也位于负极侧区域113内。基体材料的特征可以与玻璃或各种类型的塑料相同，如聚丙烯、聚碳酸酯、环烯聚合物和聚二甲基硅氧烷。如上所述，透析膜14将通道11内部分为正极侧区域112和负极侧区域113。根据本公开内容的核酸提取方法作为利用核酸提取筒1的方法，在电泳移动中，核酸从负极侧13向正极侧12迁移，并被透析膜14拦截。出于该原因，将样品导入到通道11的负极侧区域113中。没有具体描述通道11的形状。但是负极侧区域113的形状一般可类似于图1所示的形状。如图所示，负极侧区域113的形状按从负极13至透析膜14的方向逐渐压低。在负极侧区域113中容纳了吸附载体。对吸附载体没有特殊描述。换言之，吸附载体可以是任何载体，只要所述载体能够吸附样品中除核酸以外的物质。吸附载体的典型的恰当例子是阳离子交换树脂或沸石。根据本公开内容提供的核酸提取方法，通过在吸附处理中，将此类吸附载体容纳在上述负极侧区域113中，可以在样品的电泳处理前，排除包含在负极侧区本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于在同一区室中执行下列步骤的核酸提取方法，所述步骤包括：对含有核酸的样品实施超声波处理；通过使用吸附载体吸附所述样品中包含的物质；以及通过拦截在电泳现象中移动的所述核酸来浓缩所述核酸。

【技术特征摘要】
2011.07.20 JP 2011-1589911.用于在同一区室中执行下列步骤的核酸提取方法，所述步骤包括：将含有核酸的样品插入到透析膜和负极之间的负极侧区域中；在将珠状颗粒掺入含有核酸的样品后对所述样品实施超声波处理；在实施所述超声波处理后使用吸附载体吸附所述样品中包含的除所述核酸以外的外源物质；以及在吸附所述外源物质后，阻断所述核酸的电泳移动以在所述透析膜的界面上浓缩所述核酸，其中在将所述含有核酸的样品插入到所述负极侧区域中之前，将所述珠状颗粒插入到所述负极侧区域中，并且其中所述吸附载体是阳离子交换树脂或沸石。2.根据权利要求1的核酸提取方法，其中使用强酸性阳离子交换树脂作为所述阳离子交换树脂。3.根据权利要求1的核酸提取方法，其中所述对所述样品实施所述超声波处理的步骤是在使用缓冲溶液稀释所述样品后对所述样品实施所述超声波处理的步骤，和所述缓冲溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：世取山翼，中村友彦，坂本直久，伊东和峰，阿部友照，大西通博，
申请(专利权)人：索尼公司，
类型：发明
国别省市：