一种基质表达T.fusca角质酶的方法技术

本发明专利技术涉及一种基质表达T.fusca角质酶的方法，属于生物工程技术和酶工程领域。本发明专利技术由本研究室前期构建的Tfu_0883/pET-20b(+)为模板，PCR扩增得到角质酶成熟蛋白基因，连接表达载体，转化E.coli宿主菌，实现了角质酶的基质表达。摇瓶发酵中，经过诱导重组角质酶在培养基中的酶活达到204.8U/mL，为总酶活的95.3％。进一步在3L发酵罐中放大培养，最终酶活为1063U/mL，是摇瓶发酵的5.2倍，生产强度为44.2U/mL/h，为国内外报道的最高水平。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种基质表达T. fusca角质酶的方法，属于生物工程技术和酶工程领域。
技术介绍
角质酶是一种多功能酯酶，既可催化水解不溶性多聚物角质和各种聚酯的酯键，也可以作用于其它长链、短链脂肪酸酯、乳化的甘油三酯等。除了水解反应外，角质酶还能催化酸与醇的酯化、一些脂肪酸盐与醇的转酯化。因此角质酶在食品工业、化工工业及纺织工业等诸多领域均有广泛用途。目前研究者对真菌角质酶中的Fusariumsolani角质酶进行了深入的研究,包括晶体结构解析、分子改造和闻效表达等各个方面。其中关于制备研究尚处在实验室阶段，主要集中于野生菌的培养条件优化以及在不同的基因工程宿主细胞(如酵母、大肠杆菌、曲霉属和镰刀菌属)中进行高效表达、优化生产工艺等方面的研究，但由于存在基因工程异源表达时表达量较低和稳定性较差的问题，并且生产成本较高，至今为止没有实现工业化生产，同时真菌角质酶本身存在热稳定性差的缺点，不能适合纺织工业的高温处理环境。 与真菌角质酶相比，细菌角质酶具有催化效率高、环境适应能力强、基因工程异源表达技术成熟等方面的优势。但是迄今为止国内外关于细菌角质酶的报道很少，仅有的报道集中在产角质本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基质表达T.fusca角质酶的方法，其特征在于，将NCBI编号为AAZ54921的T.fusca角质酶成熟蛋白基因在大肠杆菌中表达，发酵培养并收集发酵上清液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴敬，宿玲恰，陈晟，陈坚，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：