一种检测基质金属蛋白酶-2的生物传感器的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种检测基质金属蛋白酶-2的生物传感器的制备方法及应用，首先在96孔板上修饰胶体金，利用金-硫键的结合把一端含巯基另外一端含生物素的肽连接到胶体金-96孔板上。再制备出链霉亲和素-蔗糖转化酶-胶体金探针(streptavidin-转化酶-AuNPs)。通过生物素和亲和素的特异性结合，从而得到streptavidin-转化酶-AuNPs-肽修饰的96孔板(基质金属蛋白酶-2生物传感器)。MMP-2可以把含特异性序列PLGVR的肽切割成两部分，streptavidin-转化酶-AuNPs在上清液中，吸出上清液加入果糖溶液，根据血糖仪读数，从而实现MMP-2浓度的测定。本发明专利技术的传感器具有很高的选择性和检测灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
—种检测基质金属蛋白酶-2的生物传感器的制备方法及其应用
本专利技术属于分析化学与生物传感器领域，具体为一种检测基质金属蛋白酶-2生物传感器的制备方法及其应用。另外，本专利技术还涉及所述的生物传感器检测基质金属蛋白酶-2的方法。
技术介绍
肿瘤浸润转移的过程是肿瘤细胞与宿主相互作用的多环节过程。肿瘤细胞分泌产生多种蛋白水解酶参与降解细胞外基质。基质金属蛋白酶是其中的主要酶类，基质金属蛋白酶是一个大家族，因其需要Ca2+、Zn2+等金属离子作为辅助因子而得名。基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-7(MMP-7)除可以降解IV型胶原外，还能降解V、YD型胶原及明胶，与肿瘤侵袭转移的关系最为密切。近年来，MMP-2的结构和功能得到了广泛、深入的研究。很多研究结果表明，MMP-2在多种疾病的病理进程中发挥着关键的作用。一些研究者根据实验结果指出，通过检测MMP-2可以估计这些疾病的病理进程，也就是MMP-2可以作为这些疾病的预后指标。据此，研制准确、灵敏、快速测定MMP-2、MMP-7活性的方法具有极高的医学应用价值。基质金属蛋白酶常用测定方法有酶联免疫吸附法(Pate本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测基质金属蛋白酶‑2的生物传感器的制备方法及其应用，包括以下步骤： (1)将100μL的0.1～10μM肽溶液加到胶体金修饰的96孔板中，37℃反应12～60h，用Tris‑HCl溶液冲洗各孔，得肽修饰胶体金‑96孔板； (2)加10μL的0.1～2mg/mL链霉亲和素溶液于转化酶‑AuNPs(转化酶修饰胶体金)溶液中，置于恒温振荡器上震荡4～32h；然后以8000～14000转速下离心，将沉淀加1mL Tris‑HCl溶液分散，得链霉亲和素修饰转化酶胶体金(streptavidin‑转化酶‑AuNPs)； (3)取streptavidin‑转化酶‑AuNPs溶液加到肽修饰胶体金‑96孔...

【技术特征摘要】
1.一种检测基质金属蛋白酶-2的生物传感器的制备方法及其应用，包括以下步骤: (1)将100μ L的0.1?10 μ M肽溶液加到胶体金修饰的96孔板中，37 °C反应12?60h，用Tris-HCl溶液冲洗各孔，得肽修饰胶体金_96孔板； (2)加10μ L的0.1?2mg/mL链霉亲和素溶液于转化酶-AuNPs (转化酶修饰胶体金)溶液中，置于恒温振荡器上震荡4?32h ;然后以8000?14000转速下离心，将沉淀加ImLTris-HCl溶液分散,得链霉亲和素修饰转化酶胶体金(streptavidin-转化酶-AuNPs)； (3)取streptavidin-转化酶-AuNPs溶液加到肽修饰胶体金_96孔板中反应,之后用Tris-HCl溶液冲洗各孔，从而得基质金属蛋白酶-2生物传感器； 其中:所述的胶体金修饰的96孔板按如下的方法制备而成:96孔板用无水乙醇和水依次超声处理3次，然后在37°C下干燥；将100 μ L胶体金溶液滴涂在处理好的96孔板中，在室温条件下使溶剂自然挥发，即得胶体金修饰96孔板(胶体金-96孔板)； 所述的转化酶修饰胶体金按如下的方法制备而成:用NaOH溶液将胶体金溶液pH调至7.0，取0.2?2mL胶体金溶液于离心管中，然后加入500 μ L0.1?2mg/mL转化酶溶液，4°C反应2?...

【专利技术属性】
技术研发人员：混旭，柏莉，徐亚琼，
申请(专利权)人：青岛科技大学，
类型：发明
国别省市：山东;37