多孔基质蛋白递送与功能强化制造技术

提供用于保存和递送蛋白质的组合物、方法、制品和试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】多孔基质蛋白递送与功能强化 相关申请的交叉引用 本申请要求于2013年7月25日提交的61/858, 488号美国临时专利申请的优先 权，该文的全部内容通过引用纳入本文用于所有目的。
技术介绍
在保存期间，生物分子应当抗聚集、变性和降解以保持稳定。根据生物分子的相对 纯度、任何污染性生物分子的性质、本身生物分子的一级、二级和三级结构以及进行保存的 环境，生物分子的稳定性呈现高度差异。 保存方法包括将生物分子沉淀和/或结晶。例如，生物分子（如蛋白质）可用沉 淀剂如硫酸铵来沉淀和/或结晶并保存供后续重溶（reconstitution)。或者，生物分子可 冻干并以固体形式保存。又或者，生物分子可保存于溶液中，例如缓冲溶液中。已经以合适 方式保存使其（或其大部分）稳定的生物分子此后可以自保存介质递送或者提取，并后续 用于各种目的。
技术实现思路
在一些实施方式中，本专利技术提供递送蛋白质的方法，所述方法包括：提供多孔基 质，其包含可逆固定有蛋白质和蛋白质聚集改性剂；以及用洗脱剂从多孔基质洗脱所述可 逆固定的蛋白质，由此递送所述蛋白质。 -些情况中，洗脱剂含有pH高于所述可逆固定蛋白质的等电点的缓冲溶液。一些 情况中，洗脱剂含有蛋白聚集改性剂，其选自：环糊精、非离子表面活性剂、离子型表面活性 剂、两性离子表面活性剂、非去污剂磺基甜菜碱、简单糖、多糖、多元醇、有机溶剂、聚集改性 蛋白、无序肽序列、氨基酸、氧化还原剂、冻干保护剂、冷冻保护剂和离液剂。一些情况中，洗 脱剂含有蛋白质印迹转移缓冲剂。蛋白质印迹转移缓冲剂可含有三（羟基甲基）氨基甲烷 (Tris)、N-环己基-3-氨基丙磺酸（CAPS)、甘氨酸、甲醇、乙醇或丙醇。蛋白质印迹转移缓 冲剂可含有选自三（羟基甲基）氨基甲烷（Tris)、N-环己基-3-氨基丙磺酸（CAPS)、甘氨 酸、甲醇、乙醇和丙醇的两种或更多种化合物。 -些情况中，所述洗脱包括使基质经历扩散、毛细管作用、真空、压力或电泳，或者 使多孔基质接触对被可逆固定的蛋白质有亲和性的磁性颗粒。一些情况中，所述洗脱包括 把部分蛋白质洗脱到膜上。一些情况中，所述方法包括用洗脱剂从多孔基质洗脱至少50% 可逆固定的蛋白质。一些情况中，所述方法包括用洗脱剂从多孔基质洗脱基本全部可逆固 定的蛋白质。一些情况中，与从多孔基质上洗脱的不含蛋白质聚集改性剂的蛋白质相比，洗 脱下的可逆固定的蛋白质较少聚集。 -些情况中，所述膜的表面上固定有蛋白质。一些情况中，膜上的非特异性结合位 点被封闭。一些情况中，所述洗脱包括使基质接触膜并将基质上可逆固定的蛋白质通过扩 散、毛细管作用、真空、压力或电磁力的作用转移至膜。一些情况中，所述方法还包括从膜上 洗去非特异性结合以及未结合的洗脱蛋白质。一些情况中，所述方法还包括检测膜上洗脱 蛋白质的存在。 -些情况中，所述方法还包括使从基质洗脱的蛋白质结合膜表面上的固定化蛋白 质；并且检测膜上洗脱蛋白质的存在，由此检测膜表面上固定化蛋白质的存在。一些情况 中，有1、2、3、4或更多种不同的蛋白质可逆固定在多孔基质上。一些情况中，有1、2、3、4或 更多种不同的蛋白质可逆固定在多孔基质的1、2、3、4或更多区域例如横向分隔区域上。 -些情况中，所述多孔基质含有选自下组的成分：沃特曼纸（whatmanpaper)、纸、 纤维素滤器、玻璃微纤维滤器、硝酸纤维素、聚偏二氟乙烯（PVDF)、烧结玻璃、烧结聚合物、 烧结金属、纺粘聚酯、人造丝、尼龙、多孔聚合物整料、多孔聚合物珠、毛细管芯吸床、天然或 合成海绵以及纤维玻璃。一些情况中，所述毛细管芯吸床是薄膜色谱板。 -些情况中，所述多孔基质包括掩蔽区和可逆固定化区，其中所述可逆固定的蛋 白质是固定在可逆固定化区。一些情况中，所述可逆固定的蛋白质被可逆固定覆盖至少 30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%、全部或基本全部的所述可逆固定化 区。一些情况中，所述多孔基质还包含2、3、4或更多个可逆固定化区。一些情况中，所述多 孔基质还包含边界区。一些情况中，掩蔽区含有疏水聚合物。一些情况中，掩蔽区含有脂 肪酸或蜡。一些情况中，所述可逆固定的蛋白质均匀分布在所述基质至少一个表面的至少 30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%、全部或基本全部。 -些情况中，可逆固定的蛋白质被可逆固定在多孔基质上持续不到约12小时、24 小时、48小时、或不到约1周。一些情况中，蛋白质被可逆固定在多孔基质上持续至少约1 周、1月、3月、6月、9月或1年。 -些情况中，可逆固定化的蛋白质是抗体。一些情况中，所述抗体被可逆固定在 多孔基质上且所述多孔基质上没有固定化其它抗体。一些情况中，不到50%、40%、30%、 20 %、10%、5%、2%、1%、基本没有或者没有蛋白质被不可逆固定在所述多孔基质上。一些 情况中，至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%、基本全部或者全部的可逆固定的蛋 白质是非聚集且未变性的。一些情况中，可逆固定的蛋白质是未标记的。一些情况中，可逆 固定的蛋白质是带标记的。 -些情况中，蛋白聚集改性剂选自下组：环糊精、非离子表面活性剂、离子型表面 活性剂、两性离子表面活性剂、非去污剂磺基甜菜碱、简单糖、多糖、多元醇、有机溶剂、聚集 改性蛋白、无序肽序列、氨基酸、氧化还原剂、冻干保护剂、冷冻保护剂和离液剂。环糊精可选自下组：α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、（2, 3,6_三-0-甲 基）-β-环糊精、（2, 3, 6-二-〇-甲基）-β-环糊精、（2-羟基）丙基-β-环糊精、（2-轻 基）丙基-γ-环糊精、无规甲基-β-环糊精、无规甲基-γ-环糊精、羧甲基-β-环糊 精、羧甲基-γ-环糊精、6-单脱氧-6-单氨基-β-环糊精、磺基丁基-β-环糊精、6-氨 基-6-脱氧-β-环糊精、乙酰β-环糊精、琥珀酰α-环糊精、琥珀酰β-环糊精、琥珀酰 γ-环糊精、（2, 3, 6-三-0-苯甲酰）-β-环糊精、琥珀酰-(2-羟丙基）-β-环糊精和琥珀 酰-(2-羟丙基）-γ-环糊精。 离子型表面活性剂可以是十二烷基硫酸钠或辛基硫酸钠。非离子表面活性剂可选 自下组：聚山梨酯80、聚山梨酯20、Brij-35和聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物。非去污剂 磺基甜菜碱可选自下组：灿38 256、灿38 221、灿38 211、灿38 201、灿38 195、3-(4-叔丁 基-1-P比啶内鐵）_1_丙横酸盐、3-(1-P比啶内鐵）_1_丙横酸盐、3_(苯基二甲基钱）丙横 酸盐、和二甲基乙基铵丙磺酸盐。简单糖可选自：蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、肌醇、木糖醇、赤 藓糖醇、葡萄糖、半乳糖、棉籽糖和海藻糖。聚糖可选自下组：右旋糖酐、淀粉和羟乙基淀粉。 多元醇可选自下组：甘油、乙二醇、聚乙二醇、季戊四醇丙氧基化物和季戊四醇丙氧基化物。 有机溶剂可选自下组：乙醇、丁醇、丙醇、二甲基甲酰胺、2-甲基-2, 4-戊二醇、2, 3-丁二醇、 1，2_丙二醇、1，6_己二醇和二甲亚砜。聚集改性蛋白可选自下组：白蛋白、酪蛋白、明胶、泛 素、溶菌酶和胚胎发生晚期丰富（LEA)蛋白。所述氨基酸可选自下组：甘氨酸、脯氨本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种递送蛋白质的方法，所述方法包括：提供含有可逆固定蛋白质和蛋白聚集改性剂的多孔基质；以及用洗脱剂从所述多孔基质洗脱可逆固定蛋白质，由此递送所述蛋白质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·T·麦基，W·斯特朗，
申请(专利权)人：生物辐射实验室股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US