一种碱性磷酸酶的制取方法技术

本发明专利技术涉及一种碱性磷酸酶的制取方法，关键步骤为：将动物屠宰后的废弃脏器经绞碎离心后获得碱性磷酸酶粗酶液，再采用酸沉、盐析、柱层析、透析、真空冷冻干燥等一系列工艺，最后得到碱性磷酸酶，其比酶活达到402U/mg以上。本发明专利技术制取的碱性磷酸酶的回收率高于10％，纯化倍数达到1297倍以上，整个工艺具有周期短、生产设备典型、操作工艺简单、成本低、效率高、产品纯度高等优点，适合产业化推广。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，特别是涉及到一种碱性磷酸酶提取制备的方法。
技术介绍
碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,EC3. I. 3. IAP)是非特异性磷酸单酯酶,可以催化几乎所有的磷酸单酯的水解反应，生成无机磷酸和相应的醇、酚、糖等，还可以催化磷酸基团的转移反应，且大肠杆菌AP还是一种依赖亚磷酸盐的氢化酶。AP存在于除高等植物外几乎所有的生物体内，可直接参加磷代谢，在钙、磷的消化、吸收、分泌及骨化过程中发挥了重要的作用。碱性磷酸酶临床上主要用于骨骼、肝胆系统疾病的诊断和鉴别诊断，尤其是黄疸 的鉴别诊断。对于不明原因的高ALP血清水平，可测定同工酶以协助明确其器官来源。在动物饲养和疾病诊断方面，AP是反映成骨细胞活性、骨生成状况和钙、磷代谢的重要生化指标。在免疫学研究方面，已广泛应用AP标记抗体进行酶联免疫荧光反应(ELISA)和Western印迹分析，即将AP与显色剂或去磷酸化后能发光的底物相互作用来揭示靶与检测酶复合物的存在，与过氧化物酶相比，AP用作标记酶的优点是稳定性高、灵敏度高，缺点是成本高、标记困难。在生物化学和分子生物学方面，用AP催化除去DN本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种碱性磷酸酶的制取方法，其特征为：(1)粗酶液的制备：动物屠宰废弃脏器剪碎，加Tris？HCl缓冲液匀浆，4℃下搅拌后离心，上清液即为碱性磷酸酶粗酶液；(2)酸沉淀：所得粗酶液，用HAc调至pH，搅拌后离心，沉淀溶于Tris？HCl缓冲液中。加正丁醇搅拌后离心，吸取水层对Tris？HCl缓冲液透析并浓缩；(3)(NH4)2SO4盐析：用(NH4)2SO4进行分段盐析，沉淀用Tris？HCl缓冲液，溶解并透析；(4)DEAE？Sephacel柱层析：透析液上样于DEAE？Sephacel柱，上样后用NaCl梯度洗脱，收集碱性磷酸酶活性部分，用Tris？HCl缓冲液透析浓缩备用；(5)ConA？...

【技术特征摘要】
1.一种碱性磷酸酶的制取方法，其特征为(1)粗酶液的制备动物屠宰废弃脏器剪碎，加TriS-HCl缓冲液匀浆，4°C下搅拌后离心，上清液即为碱性磷酸酶粗酶液；(2)酸沉淀所得粗酶液，用HAc调至pH，搅拌后离心，沉淀溶于Tris-HCl缓冲液中。加正丁醇搅拌后离心，吸取水层对Tris-HCl缓冲液透析并浓缩；⑶(MM)2SO4盐析用(MM)2SO4进行分段盐析，沉淀用Tris-HCl缓冲液,溶解并透析；(4) DEAE-Sephacel柱层析透析液上样于DEAE-Sephacel柱，上样后用NaCl梯度洗脱，收集碱性磷酸酶活性部分，用Tris-HCl缓冲液透析浓缩备用；(5) ConA-Sepharose柱层析浓缩液上样于平衡的ConA-Sepharose柱，甲基甘露糖苷洗脱。收集碱性磷酸酶活性部分，用Tris-HC I缓冲液透析浓缩备用；(6) SephadexG-200柱层析浓缩液上样于平衡后的Sephadex G-200柱，同一缓冲液洗脱，收集碱性磷酸酶活性部分，透析浓缩后备用；(7) GGT免疫亲和层析柱浓缩液过抗GGT免疫亲和层析柱，收集流出液，用Tris-HCl缓冲液透析后置_70°C冻干获得碱性磷酸酶产品。2.如权利要求I所述的ー种碱性磷酸酶的制取方法，其特征为步...

【专利技术属性】
技术研发人员：王福华，
申请(专利权)人：西藏俪阳科技有限公司，
类型：发明
国别省市：