一种基于原位形成光活性纳米材料模拟酶的碱性磷酸酯酶活性检测方法技术

本发明专利技术提供了一种基于光活性纳米材料模拟酶且具有高效信号放大作用的碱性磷酸酯酶活性检测方法。碱性磷酸酶(ALP)的水解产物邻苯二酚或水杨酸能够特异性的结合在TiO2纳米材料表面，形成电荷转移络合物，从而使TiO2纳米材料在可见光照射下表现出高效的模拟酶活性。区别于传统的纳米材料模拟酶，该光活性模拟酶通过天然酶的催化反应原位产生，并且其在工作时不需要使用高浓度的H2O2，具有良好的生物相容性。本发明专利技术通过碱性磷酸酶的催化反应原位产生的光活性纳米模拟酶对碱性磷酸酶的活性检测产生高效的信号放大作用，使得检测ALP活性的检测限可达0.01U/L。该新型方法具有简便、灵敏、快速的优点。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】活性检测方法
:本专利技术涉及纳米科技领域和生物分析检测领域，尤其涉及新型的光活性纳米材料模拟酶及其在碱性磷酸酯酶活性检测中的应用。
技术介绍
:碱性磷酸酯酶(ALP)是广泛存在于各种生物组织中的一种酶。ALP的存在浓度与骨骼疾病、肝炎以及前列腺癌等多种疾病的发生密切相关。此外，ALP具有催化活性高，稳定性好，成本低，广泛的底物特异性等优点，是一种被广泛使用的免疫分析标记物，被用于酶联免疫测定中。在酶联免疫测定中，抗原与抗体之间可以产生特异性的结合，通过标记在抗体上的ALP的催化反应产生测量信号。因为单个酶分子可以催化许多个底物分子产生大量的产物，从而使检测信号放大。目前，以天然酶为标记物的酶联免疫吸附分析在环境检测、食品安全及临床诊断等方面已经成长为重要的技术之一 。因此，ALP活性的检测在临床疾病诊断以及免疫分析研宄中具有重要意义。目前，大部分针对ALP的检测方法虽然较为简单，但是，由于这类方法单纯依靠ALP催化产生的产物的电化学信号或光信号进行检测，缺少信号放大策略，方法的灵敏度不是很高。所以，探索高效的信号放大策略以建立高灵敏的ALP活性的检测方法仍然是需要解本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于原位形成光活性纳米材料模拟酶的碱性磷酸酯酶活性检测方法，其特征在于：a、二氧化钛纳米材料的制备：将5mL含钛化合物逐滴加入到75mL超纯水中，混合后的溶液在室温下持续搅拌。然后将上述溶液转移到反应釜内并加热到160℃持续24h。离心获得产物并用超纯水洗涤多次，最后烘干获得白色二氧化钛纳米颗粒；b、碱性磷酸酯酶活性的测定：5μmol/L的碱性磷酸酯酶的底物与10μL不同浓度的碱性磷酸酯酶混合后加入到96孔板中，室温下反应一段时间；加入10μL 1.5mg/mL的二氧化钛纳米材料反应15min后，加入100μL pH为4.0的0.2mol/L的醋酸缓冲溶液和20μL 5mmol/L的纳米材...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王光丽，金璐怡，吴秀明，曹根霞，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32