马克斯克鲁维酵母转化体的制造方法技术

本发明专利技术的课题在于提供一种不使用特定的限制酶及其识别序列，而利用简单且有效地将DNA片段的末端联结起来的方法制造马克斯克鲁维酵母转化体的方法，以及使用该转化体的有用物质的制造方法等。由此，发现了下述解决手段：将不含马克斯克鲁维酵母菌的自主复制序列的二种以上的直链状的双链DNA片段导入马克斯克鲁维酵母菌，以通过所希望的DNA连接体表达的标记基因的表达为指标，选择包含所希望的DNA连接体的转化体，或者，将含有马克斯克鲁维酵母菌的自主复制序列的直链状的双链DNA片段单独导入或与一种以上的其它直链状的双链DNA片段组合导入马克斯克鲁维酵母菌，以通过所希望的DNA连接体表达的标记基因的表达为指标，选择包含所希望的DNA连接体的转化体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)转化体的制造方法、使用该转化体的有用物质的制造方法等。
技术介绍
联结DNA片段的末端制作任意DNA分子的技术，是以克隆为代表的众多分子生物学领域中的实验操作所必需的基本技术。目前，用于连接DNA片段的最常用的手段，是一种用DNA连接酶将具有平末端的DNA分子与分子之间，或具有互补的突出末端的DNA分子与分子之间结合起来的手段。并且，作为应用这种手段的克隆方法，已知Cohen-Boyer法(参见非专利文献I)，这种方法中，分别利用限制酶切断插入DNA和载体并提纯后，通过DNA连接酶使它们连接，制作目的构建体，通过该构建体转化大肠杆菌，使其扩增。但是，在利用限制酶和DNA连接酶的DNA连接方法上，若不是预先以使得末端互相适合的方式制备的DNA·分子，就无法连接，因此，为了制作转化用的构建体，Cohen-Boyer法需要将聚合酶链式反应(PCR)或限制酶处理等复杂的体外(in vitro)操作作为必要操作，并且，为了从转化后的大肠杆菌菌落中选出包含目的构建体的大肠杆菌，需要大量时间。由于上述原因，要求开发一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：赤田伦治，星田尚司，B·M·A·阿布德尔巴纳特，浅川润，
申请(专利权)人：国立大学法人山口大学，
类型：
国别省市：