抗体切割位点结合分子制造技术

本公开提供药物组合物，所述药物组合物包含具有ADCC活性的抗体、T细胞重定向抗体或表达嵌合受体的细胞，用于与能结合靶标抗原的抗原结合分子的施用组合使用，其中一级分子包含蛋白酶可切割接头，切割了接头的抗原结合分子对靶标抗原具有结合能力，具有ADCC活性的抗体或T细胞重定向抗体的可变区以及嵌合受体的细胞外结合结构域通过与可切割接头被切割后所产生的切割了接头的抗原结合分子结合而与表达靶标抗原的细胞结合。达靶标抗原的细胞结合。达靶标抗原的细胞结合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体切割位点结合分子


[0001]本公开涉及具有ADCC活性的抗体、T细胞重定向抗体、嵌合受体、表达嵌合受体的细胞、及利用该细胞或抗体的疾病处理方法，特别地，涉及利用抗体的ADCC活性的疗法、利用该细胞的CAR
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T疗法以及T细胞重定向抗体疗法。

技术介绍

[0002]抗体药物是以活体具有的免疫系统的一部分的免疫球蛋白或其类似物作为主要成分的药物(非专利文献1和非专利文献2)。与现有的小分子化合物相比较，抗体药物分子量大，可识别复杂分子，因此靶标识别的特异性高，出现预料外的副作用小。另外，血液中的异物一般经由内吞作用被摄入细胞而分解，但是由于抗体存在通过特异的受体FcRn及抗体Fc区回收抗体的机制，因此抗体在血液中滞留性长，通过单次施用可获得长时间药效的特征。进一步地，由于抗体药物是作为重组蛋白制备的，因此可以应用基因工程来改变其功能。
[0003]例如，抗体的恒定区通过与NK细胞或巨噬细胞的FcγR结合所诱导的抗体依赖性细胞毒作用(antibody
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dependent cell
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mediated cytotoxicity；ADCC)，当使用具有这样的恒定区的抗体时，所述恒定区添加了增强对FcγR的结合的改变，已知诱导更强的细胞毒性(非专利文献3)。
[0004]另外，通常的抗体只识别、结合抗原的一个表位，但是通过改良天然型的IgG型抗体，开发以一分子抗体结合两种以上抗原的抗体(称为Bispecific抗体或双特异性抗体)(非专利文献11)，可以与T细胞表达的蛋白质(CD3ε或TCR)和癌细胞表达的蛋白质(癌抗原)结合。作为双特异性抗体中的一种，从1980年代就已知T细胞重定向抗体(T cell
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redirecting抗体)，其是以T细胞作为效应细胞，动员以细胞毒作为其抗肿瘤效果的机制的抗体(非专利文献12、13、14)。与以NK细胞或巨噬细胞作为效应细胞，动员以ADCC作为其抗肿瘤效果的机制的抗体不同，T细胞重定向抗体具有针对T细胞受体(TCR)复合体的任一构成亚单位的结合结构域，特别是结合CD3ε链的结构域，并与作为靶标的癌细胞上的抗原结合，使T细胞和癌抗原表达细胞形成细胞间桥连，以T细胞作为效应细胞，对癌抗原表达细胞诱导强细胞毒作用(T
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cell dependent cellular cytotoxicity；TDCC)(非专利文献4、12、13、14)。
[0005]进一步地，近年开发将抗体所具有的高特异性利用于效应细胞的抗原识别的抗肿瘤疗法，在一些癌肿瘤中显示显著的药效。在该称为嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor；以下也称为“CAR”)过继免疫疗法(adoptive immunotherapy)的疗法中，将具有以来自抗体的scFv为首的抗原结合能力的细胞外结构域人工融合细胞内信号传导结构域，形成CAR，在T细胞等的效应细胞表达。将此CAR表达T细胞(以下也称“CAR
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T细胞”)移入癌患者，当肿瘤抗原被CAR识别时，细胞内结构域活化，诱导效应细胞的细胞毒性，通过毒杀肿瘤细胞而发挥药效(非专利文献5)。
[0006]对于以CAR
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T细胞的施用的癌免疫疗法进行临床试验(非专利文献10)，获得以
CAR
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T细胞的施用的癌免疫疗法在白血病或淋巴瘤等的造血器官恶性肿瘤等中显示有效性的结果。2017年以CD19为抗原的CAR
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T的Kymriah(注册商标)(Novartis，tisagenlecleucel，CTL
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019，CD3ζ
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CD137)及Yescarta(注册商标)(KiTE，axicabtagene ciloleucel，CD3ζ
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CD28)在美国、2019年在日本认可为药物。
[0007]除此之外，也提出了利用来自骆驼科动物的单结构域抗体，以多样的抗原为靶标，再简化抗体的制备等的方法。总而言之，抗体药物有多个优点，因此适用于肿瘤或自身免疫疾病、感染症等广泛疾病(非专利文献6)。
[0008]另一方面，也指出了抗体药物的局限性。其中之一是抗原的病变部位特异性的问题。成为抗体靶标的表面抗原也有在病变部位以外的正常组织中表达的情形，虽然抗原的表达量较病变部位低，但对于表达该抗原的正常组织而言，抗体作用产生副作用。
[0009]关于这个问题，能够成为解决的对策为：鉴定以病变部位特异性的蛋白酶活性作为靶标的病变部位。例如，施用对含有在病变部位活化的蛋白酶的切割位点的合成肽链添加有荧光色素的蛋白酶底物，测定伴随切割的荧光变化，显示了经由蛋白酶活性可鉴定病变部位(非专利文献7)。
[0010]报导了用抗体识别在病变部位所生成的蛋白酶切割产物而检测出病变部位的研究(非专利文献8)。在该研究中报导，对经由放线菌表达的IdeS蛋白酶的切割产物，使用特异性结合该切割物的抗体可在体内(in vivo)特异性识别该切割物(非专利文献8)。
[0011]在慢性疾病领域中，也有以开发检测退化性膝关节炎的病变的试剂为目的，开发在退化性膝关节炎的病变部位中，识别活化的MMP(matrix metalloproteinase)切割的II型胶原蛋白的抗体(非专利文献9)。
[0012]作为将现有的蛋白酶活化抗体技术应用在治疗上的例子，可以例举通过对抗体赋予对在如癌组织或炎症组织的病变部位表达或活化的程度增加的蛋白酶的敏感性，扩大组织特异性和治疗窗口(therapeutic window)的”Probody(注册商标)技术”(图1)。
[0013]“Probody(注册商标)”是：抗体和掩蔽抗体的抗原结合部位的掩蔽肽用在病变部位表达的蛋白酶切割的切割肽序列连接而成的分子(非专利文献15)。抗体的抗原结合部位在肽序列未切割的状态下，被掩蔽肽掩蔽，因此不能与抗原结合。Probody(注册商标)的切割肽序列被靶标病变部位表达的蛋白酶切割，由此掩蔽肽解离，生成具有抗原结合活性的抗体分子，使得与靶标病态组织特异性抗原结合成为可能。Probody(注册商标)在蛋白酶不存在的非病变部位中，由于抗原抗体的结合受到抑制，能够比常规的抗体以更大量施用，期待可扩大治疗窗口。
[0014]现有技术文献
[0015]专利文献
[0016]专利文献1：WO2009/025846
[0017]专利文献2：WO2017/143094
[0018]专利文献3：WO2018/097307
[0019]非专利文献
[0020]非专利文献1：Janice M Reichert，Clark J Rosensweig，Laura B Faden&amp；Matthew C Dewitz，Monoclonal antibody successes in the clinic.，Nat.Bio本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.药物组合物，其是用于与抗原结合分子的施用组合使用的、包含表达嵌合受体的细胞的药物组合物，其中抗原结合分子包含蛋白酶可切割接头，在接头切割后对靶标抗原具有结合能力，嵌合受体包含细胞外结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，细胞外结合结构域对接头切割后的抗原结合分子具有结合能力，通过与接头切割后的抗原结合分子的结合，能够与表达所述靶标抗原的细胞结合。2.药物组合物，其是用于与表达嵌合受体的细胞的施用组合使用的、包含抗原结合分子的药物组合物，其中抗原结合分子包含蛋白酶可切割接头，在接头切割后对靶标抗原具有结合能力，嵌合受体包含细胞外结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，细胞外结合结构域对接头切割后的抗原结合分子具有结合能力，通过与接头切割后的抗原结合分子的结合，能够与表达所述靶标抗原的细胞结合。3.药物组合物，其是用于与抗原结合分子的施用组合使用的、包含双特异性抗体的药物组合物，其中抗原结合分子包含蛋白酶可切割接头，在接头切割后对靶标抗原具有结合能力，双特异性抗体包含对经蛋白酶切割接头后的抗原结合分子具有结合活性的抗体可变区和对在T细胞表面表达的分子具有结合活性的抗体可变区，双特异性抗体通过与接头切割后的抗原结合分子的结合，能够与表达靶标抗原的细胞结合。4.药物组合物，其是用于与双特异性抗体的施用组合使用的、包含抗原结合分子的药物组合物，其中抗原结合分子包含蛋白酶可切割接头，在接头切割后对靶标抗原具有结合能力，双特异性抗体包含对经蛋白酶切割接头后的抗原结合分子具有结合活性的抗体可变区和对在T细胞表面表达的分子具有结合活性的抗体可变区，双特异性抗体通过与接头切割后的抗原结合分子的结合，能够与表达靶标抗原的细胞结合。5.药物组合物，其是用于与抗原结合分子的施用组合使用的、包含以抗体依赖性细胞毒作用被增强为特征的IgG抗体的药物组合物，其中所述抗原结合分子包含蛋白酶可切割接头，在经蛋白酶切割接头后，对靶标细胞表面表达的抗原具有结合活性，所述IgG抗体包含对经蛋白酶切割所述接头后的抗原结合分子具有结合活性的抗体可变区，所述IgG抗体通过与接头切割后的抗原结合分子的结合，能够与靶标细胞结合。6.药物组合物，其是用于与以抗体依赖...

【专利技术属性】
技术研发人员：樱井实香，井川智之，小森靖则，玉田耕治，佐古田幸美，
申请(专利权)人：国立大学法人山口大学，
类型：发明
国别省市：