表达免疫功能调控因子的免疫活性细胞及表达载体制造技术

本申请涉及表达免疫功能调控因子的免疫活性细胞及表达载体。本发明专利技术的课题在于提供在免疫活性细胞中表达免疫活性细胞的免疫功能调控因子且兼具增殖能力、存活能力、及T细胞的集聚能力的免疫活性细胞，以及提供用于制备所述免疫活性细胞的免疫功能调控因子表达载体。制备表达特异性识别癌抗原的细胞表面分子、白细胞介素7(IL

【技术实现步骤摘要】
表达免疫功能调控因子的免疫活性细胞及表达载体
[0001]本申请是申请日为2017年3月15日、专利技术名称为“表达免疫功能调控因子的免疫活性细胞及表达载体”的中国专利技术专利申请No.201780029948.1(PCT申请号为PCT/JP2017/010437)的分案申请。


[0002]本专利技术涉及表达特异性识别癌抗原的细胞表面分子、白细胞介素7(IL
‑
7)、及CCL19的免疫活性细胞、含有所述免疫活性细胞的抗癌剂、用于制备所述免疫活性细胞的表达载体。

技术介绍

[0003]癌症是全世界罹患者众多的疾病，通常广泛采用化学疗法、放射线疗法或外科疗法。然而，存在产生副作用、部分功能丧失、难以对转移进行治疗等多种问题。
[0004]因此，为了进一步维持患者高的生活质量(QOL)，近年来持续进行了免疫疗法的开发。在该免疫疗法中，免疫细胞疗法为从患者采集免疫活性细胞、将所述免疫活性细胞以提高其免疫功能的方式进行处置并扩增后再度移入患者的疗法。具体地，已知从患者采集T细胞、向所述T细胞中导入编码CAR的基因并扩增后再度移入患者的疗法(参见非专利文献1)。该疗法目前正在全世界进行临床试验，已获得了其在白血病、淋巴瘤等造血器官恶性肿瘤等中显示有效性的结果。
[0005]另外，作为T细胞等免疫活性细胞的免疫功能调控因子，已知细胞因子、趋化因子、信号调控蛋白质等至少数百种因子。其中，白细胞介素7(IL
‑
7)是对于T细胞的存活而言必要的细胞因子，已知其由骨髓、胸腺、淋巴器官/组织的基质细胞等非造血细胞所产生。作为利用所述IL
‑
7的功能的T细胞，已公开了表达融合IL
‑
7和IL
‑
7Rα而成的嵌合细胞因子受体的T细胞(参见专利文献1)。然而，所述T细胞中的嵌合细胞因子受体作为一种融合蛋白质，仅限于在所导入T细胞的膜表面表达，只是对于自身的细胞以非配体依赖性的方式传导IL
‑
7R等细胞因子信号，而无法提高未导入上述受体的T细胞的功能。
[0006]另外，已公开了SIRPα变异小鼠的脾脏中T细胞区维持缺陷的原因是CCL19、CCL21、IL
‑
7的表达降低(参见非专利文献2)，CCL19、CCL21、IL
‑
7在次级淋巴组织(脾脏、淋巴结)中具有维持T细胞的稳态的作用(参见非专利文献3)。然而，上述非专利文献2、3显示的是对于以稳态存在于次级淋巴组织的T细胞区的非活化T细胞的作用，而并没有显示与抗肿瘤免疫应答的直接相关性。并且，上述非专利文献2、3中的CCL19、CCL21、IL
‑
7表达细胞并非T细胞，而是存在于次级淋巴组织中的网状内皮系统的细胞。
[0007]另一方面，T细胞受体(T cell receptor，以下也称为“TCR”)是在T细胞的细胞膜上表达的抗原受体分子。已知其以包含α链和β链、或γ链和δ链的异二聚体的形式存在，通过识别已与主要组织相容性基因复合体(MHC)分子结合的抗原分子而使T细胞活化。
[0008]目前正在开发对所述TCR的功能加以应用、将可识别在癌细胞中表达的肿瘤抗原的TCR基因导入获自癌症患者的T细胞中并在扩增后再度移入患者的免疫疗法。具体地，已
公开了一种脊膜瘤治疗用药物组合物，其含有表达特异性识别WT1表达细胞的TCR的细胞(参见专利文献2)。
[0009]在上述技术的一部分中，尽管某些情况下观察到对于造血器官恶性肿瘤的抗肿瘤效果，但尚无对实体瘤显示显著效果的实例。对此，考虑到所移入的免疫活性细胞在生物体内的存活效率低，或者由所移入的免疫活性细胞诱导的内源性免疫活性细胞的活化、向肿瘤局部的集聚不充分这样的问题，需要开发解决上述问题的技术。
[0010]现有技术文献
[0011]专利文献
[0012]专利文献1：国际公开第2013/123061号公报
[0013]专利文献2：日本特开第2013
‑
116891号公报
[0014]非专利文献1：中泽洋三，信州医志，61(4)：197～203(2013)
[0015]非专利文献2：SATO
‑
HASHIMOTO M.等，J.Immunol.，2011，第187卷，第1期，291
‑7[0016]非专利文献3：SIEGERT S.等，Front.Immunol.，2012，第3卷，第285号文章

技术实现思路

[0017]专利技术要解决的课题
[0018]在用于现有免疫疗法的免疫活性细胞中，未充分地增强内源性免疫活性细胞的免疫诱导效果、免疫活性细胞的增殖能力、存活能力、或T细胞的集聚能力。因此，本专利技术的课题在于提供在免疫活性细胞中表达免疫活性细胞的免疫功能调控因子且兼具增殖能力、存活能力、及T细胞的集聚能力的免疫活性细胞，以及提供用于制备所述免疫活性细胞的免疫功能调控因子表达载体。
[0019]用于解决课题的手段
[0020]本申请的专利技术人以在利用免疫活性细胞的癌症免疫疗法中实现更优异的免疫诱导效果和抗肿瘤活性为目的，试图改良表达免疫功能调控因子的细胞。在这一过程之中，着眼于作为调控免疫活性细胞的免疫功能的因子的细胞因子、趋化因子、信号调控蛋白质，构建了表达调控前述免疫活性细胞的免疫功能的因子的载体。将所述表达载体导入免疫活性细胞中时，发现可由此制备具有比现有免疫活性细胞更优异的免疫诱导效果、增殖能力、存活能力以及T细胞集聚能力的免疫活性细胞，从而完成了本专利技术。
[0021]即，本专利技术如以下的(1)～(9)所公开。
[0022](1)免疫活性细胞，其表达特异性识别癌抗原的细胞表面分子、白细胞介素7(IL
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7)、及CCL19。
[0023](2)如上述(1)所述的免疫活性细胞，其特征在于，特异性识别癌抗原的细胞表面分子为特异性识别癌抗原的T细胞受体。
[0024](3)如上述(1)或(2)所述的免疫活性细胞，其特征在于，免疫活性细胞为T细胞。
[0025](4)如上述(1)～(3)中任一项所述的免疫活性细胞，其特征在于，癌抗原为WT1、MART
‑
1、NY
‑
ESO
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1、MAGE
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A1、MAGE
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A3、MAGE
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A4、磷脂酰肌醇蛋白聚糖
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3(Glypican
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3)、KIF20A、存活蛋白(Survivin)、AFP
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1、gp100、MUC1、PAP
‑
10、PAP
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5、TRP2
‑
1、SART
‑
1、VEGFR1、VEGFR2、NEIL3、MPHOSPH1、DEPDC1、FOXM1、CDH3、TTK、TOMM34、URLC10、KOC1、UBE2T、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.编码白细胞介素7(IL
‑
7)的核酸及编码CCL19的核酸用于导入表达T细胞受体(TCR)的免疫活性细胞而制备表达TCR、IL
‑
7、及CCL19的免疫活性细胞的用途。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，使用表达载体将编码IL
‑
7的核酸、及编码CCL19的核酸导入表达TCR的免疫活性细胞。3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，使用含有编码IL
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7的核酸、及编码CCL19的核酸的表达载体导入表达TCR的免疫活性细胞。4.如权利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述表达载体中含有编码自杀基因的核酸。5.如权利要求1～3中任一项所述的用途，其特征在于，免疫活性细胞为淋巴细胞、抗原呈递细胞、或粒细胞。6.如权利要求1～3中任一项所述的用途，其特征在于，免疫活性细胞为T细胞。7.如权利要求1～3中任一项所述的用途，其特征在于，TCR为识别癌抗原的TCR，所述癌抗原为WT1、MART
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1、NY
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ESO
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1、MAGE
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A1、MAGE
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A3、MAGE
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A4、磷脂酰肌醇蛋白聚糖
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3、KIF20A、存活蛋白、AFP
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1、gp100、MUC1、PAP、...

【专利技术属性】
技术研发人员：玉田耕治，佐古田幸美，安达圭志，
申请(专利权)人：国立大学法人山口大学，
类型：发明
国别省市：