用于DWARF开放阅读框的腺相关病毒载体制造技术

公开了用有效量的重组腺相关病毒(rAAV)病毒体来治疗对象(例如患有心肌病或处于心肌病之风险中的那些)的方法，所述rAAV病毒体包含AAV衣壳和表达盒，所述表达盒包含与启动子有效连接的编码DWORF多肽的多核苷酸。还公开了与其相关的组合物和药盒。了与其相关的组合物和药盒。了与其相关的组合物和药盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于DWARF开放阅读框的腺相关病毒载体
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年7月7日提交的美国临时申请No.63/048,743的优先权权益，其内容通过引用整体并入本文。
[0003]关于联邦政府资助的研究和开发的声明
[0004]本专利技术是在国立卫生研究院(National Institutes of Health，NIH)的HL141630、HL130253、HL138426、HD087351和AR067294下在政府支持下完成的。政府享有本专利技术的某些权利。
[0005]参考序列表
[0006]本申请通过EFS
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Web电子提交并且包括.txt格式的电子提交的序列表。该.txt文件包含标题为“UTFDP3586WO_ST25.txt”的序列表，其创建于2021年6月24日且大小为17千字节。该.txt文件中包含的序列表是说明书的一部分并通过引用整体并入本文。


[0007]本公开内容涉及用于在对象中治疗或预防心脏病(例如，心肌病)的组合物和方法。特别地，本公开内容涉及用于治疗心脏病(例如，心肌病)的包含与治疗性基因产物可操作性连接的心脏特异性启动子的载体。

技术介绍

[0008]心肌病导致约一半的心脏相关死亡。据估计，约1/250至1/10,000的成年人受某种形式的心肌病的影响(McKenna et al.Circ Res.121:722
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730(2017))。尽管在筛查、诊断和治疗策略方面做出了重大努力，但心肌病的患病率和心肌病相关死亡的发生率仍然很高(Brieler Am Fam Physician.96:640
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646(2017))。
[0009]心肌病是指当心脏的泵血能力降低时发生的一系列心脏病症。心脏肌肉正常功能的降低例如收缩功能障碍可导致心肌梗死、心力衰竭、血凝块、瓣膜问题和心脏骤停。心肌病可分为原发性和继发性类别，从而导致不同的表型(McKenna et al.Circ Res.121:722
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730(2017))。原发性心肌病可以是遗传性的、获得性的或混合病因学的。遗传性心肌病是遗传性的并且包括致心律失常性右心室发育不良、肥厚性离子通道病症、左心室紧缩和线粒体肌病。获得性心肌病主要由导致心脏并发症的非继发性、非遗传原因引起的，并且包括心肌炎，围产期、心动过速诱发的心肌病和应激诱发的心肌病。具有混合病因学的心肌病是由非遗传和遗传因素的组合引起的，并且包括扩张型心肌病和限制型心肌病。继发性心肌病是指由心血管外原因引起的心脏病。继发性心肌病的根本原因可以是内分泌性的、感染、暴露于毒素、自身免疫相关的、营养的和/或神经肌肉性的。
[0010]心肌细胞在心肌病病理学中起着核心作用。心肌细胞(cardiomyocyte)，也称为心脏肌肉细胞、心脏肌细胞或心肌细胞(myocardiocyte)，是构成心脏肌肉的心脏细胞并负责使心脏作为泵发挥作用的收缩功能。具有降低心肌细胞的能力以正常发挥功能的许多机制(Dadson et al.Clin Sci(Lond)131:1375
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1392(2017))。在致心律失常性右心室心肌病
中，心肌细胞逐渐被纤维化组织替代，导致心肌细胞的电隔离和心室心肌的萎缩，所述心室心肌是负责心脏收缩功能的主要结构。在线粒体心肌病中，ATP产生不足对具有高代谢需求的心肌细胞的收缩功能具有直接影响。由于调节酶(例如肌浆网/内质网钙ATP酶(sarco/endoplasmic reticulum calcium ATPase，SERCA))的活性丧失，由正常Ca
2+
离子释放、摄取和隔离过程丧失造成的收缩功能异常也导致出现心肌病(Lennon et al.Int J Mol Med.7:131
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41(2001))。
[0011]需要用于心肌病的治疗策略。靶向控制心脏细胞的异常收缩功能的机制是有效的方法。
[0012]专利技术概述
[0013]在一个方面中，本公开内容提供了在有此需要的对象中治疗心力衰竭的方法，所述方法包括施用有效量的重组腺相关病毒(recombinant adeno
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associated virus，rAAV)病毒体(virion)，所述rAAV病毒体包含AAV衣壳和表达盒，所述表达盒包含与启动子有效连接的编码DWarf开放阅读框(DWarf Open Reading Frame，DWORF)多肽的多核苷酸。
[0014]在一些实施方案中，所述对象患有心肌病或处于肌病之风险中。在一个实施方案中，所述心肌病是扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy，DCM)。在一些实施方案中，对象患有心肌梗死或处于患有心肌梗死之风险中。在一个实施方案中，所述心肌梗死是慢性心肌梗死。在一个实施方案中，所述心肌梗死是急性心肌梗死。
[0015]在一些实施方案中，所述rAAV病毒体通过静脉内或冠状动脉内注射来施用。在一些实施方案中，所述rAAV转导心脏细胞。在一些实施方案中，所述rAAV转导心肌细胞。
[0016]在一些实施方案中，rAAV转导提高对象心脏中的DWORF多肽表达。
[0017]在一些实施方案中，所述rAAV转导增强SERCA活性。
[0018]在一些实施方案中，所述rAAV病毒体是血清型AAV9的rAAV病毒体。在一些实施方案中，所述AAV衣壳包含与SEQ ID NO:14具有至少98％同一性的衣壳蛋白。在一些实施方案中，所述AAV衣壳包含与SEQ ID NO:14具有至少99％同一性的衣壳蛋白。在一些实施方案中，所述AAV衣壳包含含有SEQ ID NO:14的多肽序列的衣壳蛋白。
[0019]在一些实施方案中，所述启动子是鸡心脏肌钙蛋白
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T(cardiac troponin
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T，cTnT)启动子。在一些实施方案中，所述鸡cTnT启动子包含与SEQ ID NO:11具有至少95％同一性的多核苷酸序列。在一些实施方案中，所述鸡cTnT启动子包含与SEQ ID NO:11具有至少98％同一性的多核苷酸序列。在一些实施方案中，所述鸡cTnT启动子包含SEQ ID NO:11的多核苷酸序列。
[0020]在一些实施方案中，DWORF多肽是小鼠DWORF多肽。在一些实施方案中，所述DWORF多肽包含与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:9具有至少95％同一性的多肽序列。在一些实施方案中，所述DWORF多肽包含与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:9具有至少98％同一性的多肽序列。在一些实施方案中，所述DWORF多肽包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.治疗有此需要的对象的方法，所述方法包括施用有效量的重组腺相关病毒(rAAV)病毒体，所述rAAV病毒体包含AAV衣壳和表达盒，所述表达盒包含与启动子有效连接的编码DWORF多肽的多核苷酸。2.权利要求1所述的方法，其中所述方法治疗心力衰竭。3.权利要求1所述的方法，其中所述方法预防心力衰竭。4.权利要求1所述的方法，其中所述对象患有心肌病或处于心肌病之风险中。5.权利要求1所述的方法，其中所述对象患有扩张型心肌病或处于扩张型心肌病之风险中。6.权利要求1所述的方法，其中所述对象具有针对心力衰竭的遗传风险等位基因。7.权利要求1所述的方法，其中所述心力衰竭是心肌梗死。8.权利要求1所述的方法，其中所述心力衰竭是射血分数降低的心力衰竭(HFrEF)。9.权利要求1所述的方法，其中所述心力衰竭是射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)。10.权利要求1至9中任一项所述的方法，其中对象患有心肌梗死或处于患有心肌梗死之风险中。11.权利要求10所述的方法，其中所述心肌梗死是慢性心肌梗死。12.权利要求10所述的方法，其中所述心肌梗死是急性心肌梗死。13.权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述对象具有针对心力衰竭的遗传风险等位基因。14.权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述方法导致所述对象心脏中所述DWORF多肽的表达。15.权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述方法导致除心脏之外在所述对象的肌肉中检测不到所述DWORF多肽的表达。16.权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述方法导致在所述对象的肝中检测不到所述DWORF多肽的表达。17.权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述方法导致心肌细胞中所述DWORF多肽的表达。18.权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述方法导致在心脏成纤维细胞中检测不到所述DWORF多肽的表达。19.权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述方法改善心脏功能的一项或更多项测量结果，其任选地为缩短分数和/或左心室内径(LVID)。20.权利要求18所述的方法，其中在第2周至第12周观察到心脏功能的改善。21.权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述方法降低心脏重塑。22.权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述方法防止患有心肌梗死的对象中DWORF表达的降低。23.权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述rAAV病毒体通过静脉内或冠状动脉内注射来施用。24.权利要求17所述的方法，其中所述方法提高SERCA活性。25.权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述rAAV病毒体是血清型AAV9的rAAV病毒体。
26.权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述AAV衣壳包含与SEQ ID NO:14具有至少98％同一性的衣壳蛋白。27.权利要求1至26中任一项所述的方法，其中所述AAV衣壳包含与SEQ ID NO:14具有至少99％同一性的衣壳蛋白。28.权利要求1至27中任一项所述的方法，其中所述AAV衣壳包含含有SEQ ID NO:14的多肽序列的衣壳蛋白。29.权利要求1至28中任一项所述的方法，其中所述启动子是心脏肌钙蛋白
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T(cTnT)启动子。30.权利要求1至29中任一项所述的方法，其中所述心脏肌钙蛋白
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T(cTnT)启动子包含与SEQ ID NO:11具有至少95％同一性的多核苷酸序列。31.权利要求1至30中任一项所述的方法，其中所述心脏肌钙蛋白
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T(cTnT)启动子包含与SEQ ID NO:11具有至少98％同一性的多核苷酸序列。32.权利要求1至31中任一项所述的方法，其中所述心脏肌钙蛋白
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T(cTnT)启动子包含SEQ ID NO:11的多核苷酸序列。33.权利要求1至32中任一项所述的方法，其中DWORF多肽是人DWORF多肽。34.权利要求1至33中任一项所述的方法，其中DWORF多肽包含与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7或SEQ IDNO:9具有至少95％同一性的多肽序列。35.权利要求1至34中...

【专利技术属性】
技术研发人员：埃里克，
申请(专利权)人：德克萨斯大学系统董事会，
类型：发明
国别省市：