肥厚型心肌病变异基因TPM1及其应用制造技术

本发明专利技术涉及基因检测技术领域，具体涉及了一种肥厚型心肌病变异基因TPM1，与野生型TPM1基因的参考序列SEQ ID NO:5相比，所述变异基因TPM1第71位碱基A突变为碱基G，核苷酸序列为SEQ ID NO:1。本发明专利技术还涉及上述肥厚型心肌病变异基因TPM1在制备检测试剂盒中的应用。本发明专利技术提供的肥厚型心肌病变异基因TPM1可以作为临床辅助诊断的生物标志物；检测该变异的携带者，为受试者提供优生优育指导和遗传咨询，减少患儿出生，对肥厚型心肌病的早期诊断，或者辅助临床判断具有重要意义。辅助临床判断具有重要意义。辅助临床判断具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
肥厚型心肌病变异基因TPM1及其应用


[0001]本专利技术涉及基因检测
，尤其涉及肥厚型心肌病变异基因TPM1及其应用。

技术介绍

[0002]肥厚型心肌病是最常见的单基因心血管疾病，多为常染色体显性遗传，发病率约为1/500，是引起年轻人(包括年轻的运动员)猝死的最常见原因，也是引起心衰和中风的重要原因。肥厚型心肌病以左室心肌肥厚为主要特征，无任何明显病因，如压力负荷过大(长期高血压、主动脉狭窄)或储存/浸润性疾病(淀粉样变性)等。病理特征包括心肌细胞排列紊乱，纤维化增多。临床表现具有高度异质性，患者可从无症状到心律失常、顽固性心力衰竭，乃至猝死。即便是同一家族中，也可能出现不同的临床表现。临床上需要注意与高血压造成的心肌肥厚、法布雷氏病、Danon病等有心肌肥厚症状的疾病进行鉴别诊断。
[0003]肥厚型心肌病相关基因TPM1是原肌球蛋白家族的一员，该蛋白家族高度保守，广泛分布于肌动蛋白结合蛋白，主要参与横纹肌、平滑肌和非肌肉细胞骨架的收缩运动。TPM1基因编码的蛋白是一种形成横纹肌原肌球蛋白的α
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螺旋链，其功能为通过与肌钙蛋白复合物相互作用来调节肌动蛋白和肌球蛋白的钙依赖性进而完成肌肉收缩过程。
[0004]根据患者意愿对疑似病例进行相关基因检测有助于肥厚型心肌病的早期诊断及临床干预，以达到延缓疾病发生或预防疾病的目的。从分子水平揭示与TPM1基因相关的肥厚型心肌病的发病机制，能够肥厚型心肌病的临床治疗提供理论依据，但是目前仍存在大量未知的TPM1基因突变位点，进一步发现新的TPM1基因的突变位点将有助于进一步研究肥厚型心肌病，对肥厚型心肌病的早期诊断，或者辅助临床判断具有重要意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于针对上述缺陷，提供肥厚型心肌病变异基因TPM1及其应用。
[0006]本专利技术目的在于提供：肥厚型心肌病变异基因TPM1，与野生型TPM1基因的参考序列SEQ ID NO:5相比，所述变异基因TPM1第71位碱基A突变为碱基G，核苷酸序列为SEQ ID NO:1；与野生型TPM1基因编码蛋白的氨基酸序列SEQ ID NO:6相比，所述变异基因TPM1编码蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:2。
[0007]本专利技术经过大量试验、研究和分析成功地筛选出变异基因TPM1，并利用变异基因TPM1开发出能够用于快速、灵敏、有效的检测变异基因TPM1的检测试剂盒。变异基因TPM1具体信息见下表：
[0008]表1.变异基因TPM1
[0009][0010]本专利技术还提供上述肥厚型心肌病变异基因TPM1在制备检测试剂盒中的应用，所述检测试剂盒包括用于扩增变异基因TPM1的引物，引物的序列为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:
4。
[0011]优选地，所述肥厚型心肌病试剂盒还包括PCR预混液、阴性对照试剂和阳性对照试剂。
[0012]本专利技术有益效果在于：本专利技术公开的变异基因TPM1可以作为临床辅助诊断肥厚型心肌病的生物标志物，对肥厚型心肌病的早期诊断，或者辅助临床判断具有重要意义；基于变异基因TPM1的试剂开发的试剂盒，能够将携带TPM1 c.71A>G杂合错义突变的患者和正常人群区分开，为受试者提供优生优育指导和遗传咨询，减少患儿出生。
附图说明
[0013]图1为实施例1中携带TPM1 c.71A>G患者的Sanger测序图；
[0014]图2为实施例2中肥厚型心肌病先证者家系图。
具体实施方式
[0015]下面通过具体实施方式进一步详细说明，但并不因此而限制本专利技术。
[0016]下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可通过商业途径获得。
[0017]试剂来源：PCR预混液：2
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Taq MasterMix(Dye)，购自江苏康为世纪生物科技有限公司，货号：l01037/70335；包含如下成分：Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg
2+
、dNTPs、PCR稳定剂和增强剂等常规PCR所需要的组分。Agencourt AMPure XP磁珠：购自贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司，货号：311303。扩增用引物均委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成。RNase
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Free H2O：购自北京索莱宝科技有限公司。磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒：购自江苏百世诺医疗科技有限公司，批号：20031886
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01C。
[0018]实施例1：变异基因TPM1 c.71A>G验证实验
[0019]在临床诊断为肥厚型心肌病患者及其家属自愿签署知情同意书的前提下，寄送5
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10mL人类全血EDTA抗凝样本，建立病历资料库，详细记录患者病情、家系情况等资料。本研究已得到本单位伦理委员会批准。
[0020]S1、提取基因组DNA：对患者的人类全血EDTA抗凝样本进行全基因组DNA的提取，采用江苏百世诺医疗科技有限公司磁珠法全血基因组DNA提取试剂盒，操作步骤按照产品说明书进行。对DNA的浓度和纯度进行检测，作为PCR扩增的模板DNA。
[0021]S2、准备PCR反应体系：该PCR反应体系用于扩增包含目的基因位点在内的一段DNA序列，其组成为：PCR预混液25μL、正向引物(10μM)2μL、反向引物(10μM)2μL、模板DNA＜1000ng，加RNase
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Free H2O补至50μL。所用的正、反向引物信息如下：
[0022]正向引物(SEQ ID NO:3)：5'CTCGGCCCCAACGCCCTCT 3'；反向引物(SEQ ID NO:4)：5'CTGTAGCCTCCATTCCGCCCCAT 3'。长度：978bp。
[0023]S3、扩增目的片段：将反应体系混合，在PCR仪上进行目的基因片段的扩增反应，扩增程序为：95℃预变性2min；94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸30s，共35循环。
[0024]S4、PCR产物的检测：取2μL的PCR产物，使用1.5％的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，选用1000bp Marker作为参考，检测验证扩增产物为预期的大小。
[0025]S5、PCR产物纯化：PCR产物检测后，使用Agencourt AMPure XP磁珠对PCR产物进行
纯化，纯化步骤按照产品说明书进行，具体步骤如下：(1)涡旋振荡磁珠30s，使其彻底混匀为均一溶液。(2)向1.5mL的离心管中加入待纯化的PCR产物，然后加入2倍样品体积的磁珠溶液。涡旋振荡混匀后，室温下在1400rpm的Thermomixer上振荡5min。(3)将上一步的离心管放于磁力架上约1min，直至磁珠完全吸附。(4)保持离心管固定于磁力架上，弃去溶液，期间避免接触磁珠本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.肥厚型心肌病变异基因TPM1，其特征在于，与野生型TPM1基因的参考序列SEQ ID NO:5相比，所述变异基因TPM1第71位碱基A突变为碱基G，核苷酸序列为SEQ ID NO:1。2.根据权利要求1所述的肥厚型心肌病变异基因TPM1，其特征在于，与野生型TPM1基因编码蛋白的氨基酸序列SEQ ID NO:6相比，所述变异基因TPM1编码蛋白的氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘哲，梁庆渊，赵娜娜，赖开生，刘昕超，高璇，李方玉，曲晓欢，黄靖雯，侯青，惠汝太，
申请(专利权)人：百世诺北京医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：