一种基于制造技术

本发明专利技术公开了一种基于

【技术实现步骤摘要】
一种基于Sanger测序法检测人类PEAR1基因突变的方法及其试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物
，具体为一种基于
Sanger
测序法检测人类
PEAR1
基因突变的方法及其试剂盒
。

技术介绍

[0002]作为抗血小板治疗的标准药物，阿司匹林的应用非常广泛，可减少高危患者心肌梗死
、
心源性猝死及脑卒中，抗血小板治疗中阿司匹林的应用在心血管疾病二级预防中的作用已研究证实
,
可有效降低心血管事件风险
19%
‑
25%。
但是，仍有研究表明
PEAR1
（
c.
‑9‑
3996G>A
）与阿司匹林不良反应相关，
AA/AG
型患者服用阿司匹林后可能增加心血管风险或死亡
。
[0003]有研究表明，在人群中，
PEAR1
基因的单核苷酸多态性与阿司匹林抗血小板疗效相关（
P
＜
>0.05
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种基于
Sanger
测序法检测人类
PEAR1
基因突变的方法，其特征在于：包括以下步骤；第一
、
准备工作；
1、ProteinaseK
的溶解，首先取
4.5ml
双蒸水加入蛋白酶
K
粉中使其充分溶解，然后将溶解好的蛋白酶
K
溶液分装进小离心管，每管
100ul~200ul
，再将将分装好的
ProteinaseK
放入
‑
20℃
中保存，然后组织抑制剂的调配加入
20ml
无水乙醇颠倒混匀并在空白方框处打钩，最后洗液的调配加入
80ml
无水乙醇颠倒混匀并在空白方框处打钩；
2、
组织样品处理与消化，将带有
DNA
样品用
PBS
清洗干净
8000rpm/1min
离心，并倒掉，然后加
PBS200u1
振荡摇匀使之样品成为单个细胞的悬浊液，再加
200ulBinding Buffer
，
40ul
蛋白酶
K
混合均匀放入
70℃
水浴锅内消化
10
分钟
。2.DNA
提取，加异丙醇
100u1
混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心
8000g
一分钟，倒掉底液，加
500u1
组织抑制剂
Inhibitor Removal
然后离心倒掉底液，加入洗液
washing buffer500u1
离心液两次，预热双蒸水
37℃
然后将洗好的柱体下部分丢掉，换新的离心管加入双蒸水
100u1
溶解
10
分钟离心保留底液放
‑
20℃
保存，所有受检样本提取的
DNA
经过
Thermo Scientifi Multiskan go 酶标仪浓度和纯度浓度检测，并测出
OD260/280
在
1.8~2.0
之间；第二
、
根据检...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖开生，梁庆渊，刘哲，李九翔，江慧，原婉瑜，刘昕超，
申请(专利权)人：百世诺北京医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：