缀合方法技术

本文提供了通过还原胺化用于缀合细菌糖类包括肺炎链球菌和流感嗜血杆菌糖类的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于缀合的方法。特别地，它涉及使用还原胺化的糖和蛋白质的缀合。
技术介绍
细菌荚膜多糖已广泛用于免疫学许多年用于预防细菌疾病。然而，关于此类使用的问题是免疫应答的T不依赖性特性。这些抗原因此在幼儿中是弱免疫原性的。这个问题已通过将多糖抗原与载体蛋白质(T辅助表位的来源)缀合得到克服，其随后可以用于甚至在生命的第一年中引发T依赖性免疫应答。多种缀合技术是本领域已知的。缀合物可以通过如US200710184072(Hausdorff)US 4365170 (Jennings)和US 4673574 (Anderson)中所述的直接还原胺化法进行制备。其他方法在EP-0-161-188、EP-208375和EP-0-477508中描述。缀合法可以可替代地依赖 缀合物在 PCT 公开申请 WO 93/15760 Uniformed Services University 以及 WO 95/08348和 TO 96/29094 中描述。还参见 Chu C.等人 Infect. Immunity, 1983 245 256。还原胺化涉及两个步骤，(I)抗原的氧化，(2)抗原和载体蛋白质的还原，以形成缀合物。氧化步骤可以涉及与高碘酸盐的反应，然而，通过高碘酸盐的氧化可以导致尺寸减小(W094/05325)。
技术实现思路
本专利技术人已惊讶地发现在低磷酸盐的存在下使用较低浓度的高碘酸盐可以导致尺寸的保留和/或表位的保留。在本专利技术的第一个方面，提供了用于缀合细菌糖类的方法，其包括步骤a)将细菌糖类与O. 001-0. 7,0. 005-0. 5,0. 01-0. 5,0. 1-1. 2,0. 1-0. 5,0. 1-0. 2、O.5-0. 8,0. 1-0. 8,0. 3-1. O或O. 4-0. 9摩尔当量的高碘酸盐反应，以形成活化的细菌糖类； b)将活化的细菌糖类与载体蛋白质混合； c)将活化的细菌糖类和载体蛋白质与还原剂反应，以形成缀合物； 或a)将细菌糖类与O. 001-0. 7,0. 005-0. 5,0. 01-0. 5,0. 1-1. 2,0. 1-0. 5,0. 1-0. 2、O.5-0. 8,0. 1-0. 8,0. 3-1. O或O. 4-0. 9摩尔当量的高碘酸盐反应，以形成活化的细菌糖类； b)将活化的细菌糖类与接头混合； C，)使用还原剂将活化的细菌糖类与接头反应，以形成细菌糖类-接头； d)将细菌糖类-接头与载体蛋白质反应，以形成缀合物；其中步骤a)在不含胺基团的缓冲液中发生，并且所述缓冲液具有I-IOOmM的浓度。在本专利技术的第二个方面，提供了可通过本专利技术的方法获得的缀合物。在本专利技术的第三个方面，提供了通过本专利技术的方法获得的缀合物。在本专利技术的第四个方面，提供了免疫原性组合物，其包含本专利技术的缀合物和药学可接受的赋形剂。在本专利技术的第五个方面，提供了包含本专利技术的免疫原性组合物的疫苗。在本专利技术的第六个方面，提供了本专利技术的免疫原性组合物或本专利技术的疫苗在预防或治疗细菌疾病中的用途。在本专利技术的第七个方面，提供了本专利技术的免疫原性组合物或本专利技术的疫苗在制备用于预防或治疗细菌疾病的药物中的用途。在本专利技术的第八个方面，提供了预防或治疗细菌感染的方法，其包括给患者施用本专利技术的免疫原性组合物或本专利技术的疫苗。在本专利技术的第九个方面，提供了活化的细菌糖类，其中所述活化的细菌糖类包含式(I)的重复单位权利要求1.一种用于缀合细菌糖类的方法，其包括步骤a)将所述细菌糖类与O. 001-0. 7,0. 005-0. 5,0. 01-0. 5,0. 1-1. 2,0. 1-0. 5,0. 1-0. 2、O. 5-0. 8,0. 1-0. 8,0. 3-1. O或O. 4-0. 9摩尔当量的高碘酸盐反应，以形成活化的细菌糖类； b)将所述活化的细菌糖类与载体蛋白质混合； c)将所述活化的细菌糖类和所述载体蛋白质与还原剂反应，以形成缀合物； 或a)将所述细菌糖类与O. 001-0. 7,0. 005-0. 5,0. 01-0. 5,0. 1-1. 2,0. 1-0. 5,0. 1-0. 2、O.5-0. 8,0. 1-0. 8,0. 3-1. O或O. 4-0. 9摩尔当量的高碘酸盐反应，以形成活化的细菌糖类； b)将所述活化的细菌糖类与接头混合； C，)使用还原剂将所述活化的细菌糖类与所述接头反应，以形成细菌糖类-接头； d)将所述细菌糖类-接头与载体蛋白质反应，以形成缀合物； 其中步骤a)在不含胺基团的缓冲液中发生，并且所述缓冲液具有I-IOOmM的浓度。2.权利要求I的方法，其中所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液和柠檬酸盐缓冲液。3.权利要求1-2中任一项的方法，其中所述缓冲液是无机缓冲液。4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述缓冲液是磷酸盐缓冲液。5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述缓冲液具有l-50mM、l-25mM、l-10mM、5-15mM、8-12mM、或 10_50mM 或约 IOmM 的浓度。6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述步骤a)中的pH是pH3. 5-8.0,5. 0-7.0,或 pH 5. 5-6. 5 或约 pH 6. O。7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述细菌糖类包含细菌荚膜糖类。8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述细菌糖类源于肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌、沙门氏菌Vi或表皮葡萄球菌。9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述细菌糖类选自1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F 和 33F 的肺炎链球菌荚膜糖类。10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述细菌糖类选自5、6B、6A、7F、9V、14、19F或23F。11.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述细菌糖类是肺炎链球菌荚膜糖类23F。12.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述细菌糖类是肺炎链球菌荚膜糖类6B。13.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述细菌糖类是肺炎链球菌荚膜糖类6A。14.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述细菌糖类是流感嗜血杆菌b(Hib)多糖或寡糖。15.权利要求1-14中任一项的方法，其中所述细菌糖类含有邻位二醇。16.权利要求1-15中任一项的方法，其中所述细菌糖类是天然多糖，或在大小中减少不超过x20倍(例如通过微流化)。17.权利要求1-16中任一项的方法，其中在步骤a)前，所述细菌糖类是微流化的。18.权利要求16-17中任一项的方法，其中所述天然多糖的平均分子量是20kDa-2000kDa 或 30kDa - IOOOkDa019.权利要求18的方法，其中所述天然多糖的平均分子量是750-1500kDa。20.权利要求18的方法，其中所述天然多糖的平均分子量是100- 250 kDa。21.权利要求1-20中任一项的方法，其中在步骤a)前，所述细菌糖类的平均分子量是l-1100kDa、100-470kDa、200-300kDa、600-1100kDa 或本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：RL比曼斯，P杜维维耶，OFN加瓦尔，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：
国别省市：