本发明专利技术公开了蛋白Rh054_01780在抗黑龙江立克次体的免疫保护中的应用。本发明专利技术保护蛋白Rh054_01780在制备远东斑点热疫苗中的应用、在制备针对黑龙江立克次体的疫苗中的应用、在制备针对远东斑点热的保护性抗原中的应用或在制备针对黑龙江立克次体的保护性抗原中的应用。蛋白Rh054_01780为如下（a）或（b）：（a）由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（b）将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列1衍生的蛋白质。用蛋白Rh054_01780为为疫苗与菌体蛋白疫苗相比，具有制备方法简便、成本低、产量高、更安全等优点。本发明专利技术对于远东斑点热的防疫和治疗具有重大价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种蛋白Rh054_01780在抗黑龙江立克次体的免疫保护中的应用。
技术介绍
立克次体病是一种严重威胁人类健康的人兽共患自然疫源性疾病，在两次世界大战期间曾给人类带来深重的灾难。斑点热病是立克次体病的一种，由斑点热群立克次体引起，经蜱传播的传染性疾病。黑龙江立克次体(Rickettsia heilongjiangensis)是1983年在我国黑龙江绥芬河地区森林革蜱中新分离到的立克次体株，为专性细胞内寄生的革兰氏阴性小杆菌。该菌引起的斑点热病被WHO正式命名为远东斑点热。远东斑点热是一种人兽共患病，主要分布于中国东北地区、俄罗斯西伯利亚地区和日本，近年在广东也有发现。 制备斑点热疫苗通常方法为采用灭活菌体或化学提取亚单位疫苗，而这些方法需要鸡胚或者细胞大量培养立克次体，但是提取纯化立克次体的防护要求高，工艺复杂，成本昂贵，因此难以大量制备和推广使用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供蛋白Rh054_01780在抗黑龙江立克次体的免疫保护中的应用。本专利技术保护蛋白Rh054_01780在制备远东斑点热疫苗中的应用。本专利技术还保护蛋白Rh054_01780在制备针对黑龙江立克次体(Rickettsiaheilongjiangensis)的疫苗中的应用。本专利技术还保护蛋白Rh054_01780在制备针对远东斑点热的保护性抗原中的应用。本专利技术还保护蛋白Rh054_01780在制备针对黑龙江立克次体(Rickettsiaheilongjiangensis)的保护性抗原中的应用。本专利技术还保护一种远东斑点热疫苗，它的活性成分包括蛋白Rh054_01780。所述活性成分可由所述蛋白Rh054_01780和佐剂组成。本专利技术还保护一种黑龙江立克次体(Rickettsia heilongjiangensis)的疫苗,它的活性成分包括蛋白Rh054_01780。所述活性成分可由所述蛋白Rh054_01780和佐剂组成。本专利技术还保护一种针对远东斑点热的保护性抗原，它的活性成分包括蛋白Rh054_01780。所述活性成分可由所述蛋白Rh054_01780和佐剂组成。本专利技术还保护一种针对黑龙江立克次体(Rickettsia heilongjiangensis)的保护性抗原，它的活性成分包括蛋白Rh054_01780。所述活性成分可由所述蛋白Rh054_01780和佐剂组成。以上任一所述佐剂可为弗氏佐剂、氢氧化铝佐剂、明矾佐剂、脂质体佐剂等。以上任一所述佐剂具体可为弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂。以上任一所述蛋白Rh054_01780为如下(a)或(b)(a)由序列表中序列I所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列I所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列I衍生的蛋白质。 本专利技术的专利技术人发现黑龙江立克次体的蛋白Rh054_01780可以作为一种抗原蛋白，能够刺激机体产生免疫应答对抗黑龙江立克次体毒株攻击，为具有远东斑点热疫苗功能的保护性抗原。蛋白Rh054_01780可通过基因工程制备，用蛋白Rh054_01780作为疫苗与菌体蛋白疫苗相比，具有制备方法简便、成本低、产量高、更安全等优点。本专利技术对于远东斑点热的防疫和治疗具有重大价值。附图说明图I为蛋白电泳检测图。 图2为实时荧光定量PCR检测免疫小鼠脾组织内黑龙江立克次体拷贝数评价蛋白Rh054_01780的免疫保护效果。图3为实时荧光定量PCR检测免疫小鼠肝组织内黑龙江立克次体拷贝数评价蛋白Rh054_01780的免疫保护效果。图4为实时荧光定量PCR检测免疫小鼠肺组织内黑龙江立克次体拷贝数评价蛋白Rh054_01780的免疫保护效果。具体实施例方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。实施例中利用仪器Nanodrop 1000分光光度计(购自Thermo Scientific公司)进行蛋白质浓度的测定。载体pET_32a(+):购自Novagen公司，产品目录号为69015。大肠杆菌BL21 :购自Novagen公司，产品目录号为69450。C3H/HeN小鼠(周龄为3_4周，雄性小鼠)购自北京维通利华公司。弗氏完全佐剂购自Sigma公司，产品目录号为F_5881。弗氏不完全佐剂购自Sigma公司，产品目录号为F_5506。实施例中所用的黑龙江立克次体(Rickettsia heilongjiangensis)均为黑龙江立克次体 054 型株在文献“Changsong Duan, Yanfen Meng, Xile Wang, Xiaolu Xiong, andBohai Wen. 2011. Exploratory Study on Pathogenesis of Far-Eastern Spotted Fever.Am. J. Trop. Med. Hyg, 85 (3), 2011, pp. 504 - 509. ”中公开过,公众可从中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所获得。每I升裂解缓冲液按照如下方法制备将50mmol NaH2PO4 H2O、300mmoI NaCl、IOmmol咪唑和水混合，用NaOH调节pH至8. 0，用水定容至1L，得到裂解缓冲液。0. lmol/L Tris-Cl 缓冲液配制将 12. Ilg Tris、800mL ddH20 和 49mL HCl 混合，滴加浓盐酸调PH至8. 0，用ddH20定溶至IOOOmL,得到0. lmol/L Tris-Cl缓冲液。每I升回收缓冲液按照如下方法制备将IOOmmol NaH2PO4 H20、0. ILTris-Cl缓冲液、8mol尿素和水混合，用NaOH调节pH至8. 0，用水定容至1L，得到回收缓冲液。每I升洗涤缓冲液按照如下方法制备将IOOmmol NaH2PO4 H20、0. ILTris-Cl缓冲液、8mol尿素和水混合，调节pH至6. 5，用水定容至1L，得到洗涤缓冲液。每I升洗脱缓冲液按照如下方法制备将IOOmmol NaH2PO4 H20、0. ILTris-Cl缓冲液、8mol尿素和水混合，调节pH至4. 5，用水定容至1L，得到洗脱缓冲液。每I升LB液体培养基组成将IOg胰蛋白胨、5g酵母提取物、IOg氯化钠和水混合，用水定容至1L，得到LB液体培养基。实施例I、重组质粒和蛋白的制备 一、重组质粒的构建I、重组质粒甲的构建( I)提取黑龙江立克次体的基因组DNA。(2)以步骤(I)提取的基因组DNA为模板，用Fl和Rl组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。Fl:5’-GTGGATCCGGAGAAAGCGAAACTA-3’ ；Rl:5’-ATCTCGAGCTTGGATGCAGCAGTT-3’ 。Fl和Rl的靶序列为序列3所示的双链DNA分子(编码序列表的序列I所示的蛋白Rh054_01780)oPCR扩增条件94°C预变性 5min ；95°C 30sec、55°C 30sec、72本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.蛋白Rh054_01780在制备远东斑点热疫苗中的应用； 所述蛋白Rh054_01780为如下(a)或(b) Ca)由序列表中序列I所示的氨基酸序列组成的蛋白质； (b)将序列表中序列I所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列I衍生的蛋白质。2.蛋白Rh054_01780在制备针对黑龙江立克次体(Rickettsiaheilong jiangensis)的疫苗中的应用； 所述蛋白Rh054_01780为如下(a)或(b) Ca)由序列表中序列I所示的氨基酸序列组成的蛋白质； (b)将序列表中序列I所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列I衍生的蛋白质。3.蛋白Rh054_01780在制备针对远东斑点热的保护性抗原中的应用； 所述蛋白Rh054_01780为如下(a)或(b) Ca)由序列表中序列I所示的氨基酸序列组成的蛋白质； (b)将序列表中序列I所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列I衍生的蛋白质。4.蛋白Rh054_01780在制备针对黑龙江立克次体(Rickettsiaheilong jiangensis)的保护性抗原中的应用； 所述蛋白Rh054_01780为如下(a)或(b) Ca)由序列表中序列I所示的氨基酸序列组成的蛋白质； (b)将序列表中序列I所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列I衍生的蛋白质。5.一种远东斑点热疫苗，它的活性成分包括蛋白Rh054_01780 ； 所述蛋白Rh054_01780为如下(a)或(...
【专利技术属性】
技术研发人员：齐永，温博海，王锡乐，熊小路，段长松，李佳明，焦俊，龚文平，贾引军，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所，
类型：发明
国别省市：
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